SNT1207-2011 猪痢疾检疫技术规范.pdf

'版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１２０７—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１２０７—２００３猪痢疾检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狊狑犻狀犲犱狔狊犲狀狋犲狉狔２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１２０７—２００３《猪痢疾短螺旋体分离培养操作规程》。本标准与ＳＮ／Ｔ１２０７—２００３相比，主要技术变化如下：———增加了猪痢疾临床诊断及疾病概述相关技术内容；———增加了患病猪大肠组织切片镜检操作方法内容；———修改、完善了猪痢疾短螺旋体分离培养和鉴定方法，细化了采样方法与检测程序；———增加了猪痢疾短螺旋体的ＰＣＲ检测鉴定方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、华中农业大学。本标准主要起草人：陈建军、郭明星、曾宪东、金梅林、张四喜、黄晟、冯汉利、赵晖、徐家文、张春亚。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１２０７—２００３。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１猪痢疾检疫技术规范１范围本标准规定了猪痢疾病的临床诊断、组织切片镜检及猪痢疾短螺旋体分离培养和鉴定方法。本标准适用于猪痢疾病的检疫诊断。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ１９４８９实验室生物安全通用要求ＧＢ／Ｔ１９４９５．３转基因产品检测核酸提取纯化方法３缩略语下列缩略语适用于本文件。ＳＤ（ｓｗｉｎｅｄｙｓｅｎｔｅｒｙ）：猪痢疾Ｂ．ｈ（ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）：猪痢疾短螺旋体Ｂ．ｉ（ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａｉｎｎｏｃｅｎｓ）：非致病性短螺旋体Ｂ．ｐ（ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）：结肠菌毛样短螺旋体４临床诊断猪只感染ＳＤ后所表现出的临床、病理症状大多较为典型，对于本病的检疫可结合猪群的流行病学、临床症状及病理解剖检验的结果对猪只是否感染本病作出初步的诊断，具体方法参见附录Ａ。５实验室诊断５．１大肠组织切片镜检５．１．１材料准备５．１．１．１器材：组织切片机、生物显微镜、染色缸、水浴锅、恒温培养箱、载玻片。５．１．１．２试剂：１０％福尔马林、７０％乙醇、９５％乙醇、无水乙醇、二甲苯、切片石蜡、革兰氏染色液或姬姆萨染色液。５．１．２样品采集与处理５．１．２．１剖检病猪，取病变大肠段（盲肠、结肠和直肠前段），冷藏送检。２左右病变大肠段样品置１０％福尔马林中至少固定３ｈ～４ｈ。５．１．２．２切取１ｃｍ１标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１５．１．２．３取出样品用流水冲洗１ｈ。５．１．２．４将样品依次浸入３９℃的９５％乙醇、无水乙醇中，各脱水３０ｍｉｎ。５．１．２．５再将脱水后的样品浸入３８℃的二甲苯中，透明１０ｍｉｎ～１５ｍｉｎ。５．１．２．６取透明样品依次浸入５６℃的二甲苯石蜡（体积比＝１∶１）１０ｍｉｎ、二甲苯石蜡（体积比＝１∶３）２０ｍｉｎ和液体石蜡中３０ｍｉｎ～６０ｍｉｎ，进行浸蜡包埋。５．１．２．７用切片机切片，并将组织切片贴于洁净载玻片上，置５６℃温箱２ｈ～３ｈ或３８℃温箱中过夜烘干，备染。５．１．２．８取烘干切片样品依次浸入两缸二甲苯中脱蜡，各３ｍｉｎ～５ｍｉｎ。５．１．２．９再依次放入无水酒精、９５％和７０％酒精中浸泡２ｍｉｎ～３ｍｉｎ，取出用流水润洗。５．１．２．１０用革兰氏染色液染色，干燥，再用二甲苯透明一次，用盖玻片封片备检。或以１０倍稀释的姬姆萨染色液浸染脱蜡切片样品８ｈ～２４ｈ，再迅速通过两缸无水乙醇，干燥，二甲苯透明，封片备检。５．１．３镜检镜检观察，ＳＤ阳性病猪病料可在粘膜表面特别是在结肠腺窝内见到大量的Ｂ．ｈ样菌体，Ｂ．ｈ为革兰氏阴性，长６μｍ～８．５μｍ，呈舒展的２～４个螺旋状，两端尖锐的蛇样菌（参见附录Ｂ）。５．２猪痢疾短螺旋体的分离培养和鉴定５．２．１材料准备５．２．１．１器材：生物显微镜、载玻片、厌氧培养箱（罐）（２０％ＣＯ２、８０％Ｈ２）、离心机、灭菌注射器、手术刀、止血钳、缝合针、线、灭菌棉拭子。５．２．１．２试剂：ＢＪ培养基、磷酸缓冲液（０．０１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２ＰＢＳ）（配制方法见附录Ｃ）、革兰氏染色液或姬姆萨染色液。５．２．１．３试验动物：仔猪（１５ｋｇ～２５ｋｇ）或豚鼠（３周龄～４周龄）或幼小鼠（２０ｇ左右）。５．２．２病料采集处理与分离培养５．２．２．１采集直肠或新鲜粪便拭子样品，置入装有适量ＰＢＳ的灭菌试管内，密封后０℃～４℃保存送检，３ｄ内进行分离培养检验；对于病死猪或扑杀猪，可将大肠（盲肠、结肠及直肠前段）分段两头结扎（每段１０ｃｍ），分离取出，样品置４℃保存箱尽快送检，进行镜检及病原分离培养，样品保存不超过５ｄ～７ｄ。５．２．２．２取少许样品抹片染色或做成悬滴标本，直接镜检，观察有无Ｂ．ｈ样菌体及活力。５．２．２．３对于含菌量较多的病科可直接划线接种或用无菌ＰＢＳ作１∶１０稀释后划线接种于ＢＪ培养基平板，置厌氧培养箱中４２℃培养。５．２．２．４对于临床表现不明显的以及投药治疗后的猪病料，由于含菌量少或活力减弱，需先将样品用适量ＰＢＳ溶解后，低速离心除去残渣，取上清，再以６０００ｒ／ｍｉｎ～８０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，进行集菌后，再取沉淀物划线接种ＢＪ培养基平板，置厌氧培养器内４２℃培养。５．２．３结果观察每隔２ｄ检查一次，观察有无溶血区及溶血菌落，阴性样品应至少培养６ｄ。Ｂ．ｈ生长能产生强β溶血区，溶血区呈条状或一端稍尖的椭圆形斑点，其菌落不明显，只在溶血区内可见一层云雾状菌苔，Ｂ．ｉ和Ｂ．ｐ等螺旋体呈弱β溶血，结合染色镜检结果，可初步判定猪只是否感染Ｂ．ｈ。Ｂ．ｈ最终判定还需进行生化鉴定或核酸序列检测，必要时通过结肠致病性试验进行鉴定（具体方法见附录Ｄ）。２标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１５．２．４生化鉴定取溶血区内物质涂片染色镜检，如见Ｂ．ｈ样菌体，在无杂菌的溶血区挑取一小块琼脂，接种于ＢＪ培养基中４２℃纯化培养４８ｈ，取经纯化培养的菌落进行生化鉴定。表１三种常见螺旋体的生化鉴定表猪痢疾短螺旋体结肠菌毛样短螺旋体非致病性短螺旋体试验项目（Ｂ．ｈ）（Ｂ．ｐ）（Ｂ．ｉ）溶血强弱弱吲哚＋±－马尿酸盐水解－±－α半乳糖苷酶－＋＋α葡萄糖苷酶＋±－β葡萄糖苷酶＋－＋Ｄ核糖－＋－注：＋阳性反应；－阴性反应。５．３猪痢疾短螺旋体的犘犆犚检测鉴定５．３．１材料准备５．３．１．１主要仪器ＰＣＲ仪、电泳仪、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、水浴锅、移液器、核酸蛋白分析仪。５．３．１．２试剂材料除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含ＤＮＡ和ＤＮａｓｅ的分析纯或生化试剂。实验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２一级水的规格，去离子水电阻应达到１８．２ＭΩ。５．３．１．３犇犖犃提取试剂１））、ＤＮＡ提取缓冲液、平衡酚、三氯甲烷、异丙ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ公司产品醇、７０％乙醇、ＴＥ缓冲液等。５．３．１．４犘犆犚试剂２＋）、ｄＮＴＰ溶液（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）、犜犪狇酶（５Ｕ／）、双蒸水。１０×ＰＣＲ缓冲液（含ＭｇμＬ５．３．１．５引物上游引物（ＢＨＦ）：５’ＡＣＴＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧ３’下游引物（ＢＨＲ）：５’ＣＴＡＡＴＡＡＡＣＧＴＣＴＧＣＴＧＣ３’１）标准给出所列产品是为了方便本标准使用者，并不表示对该产品的指定，其他同类产品具有相同效果也可采用。３标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１５．３．１．６电泳试剂琼脂糖、溴化乙锭、ＴＢＥ缓冲液、上样缓冲液、相对分子质量Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）。５．３．２检测步骤５．３．２．１试样犇犖犃的提取对于分离培养的可疑菌株，其总ＤＮＡ可采取酚／三氯甲烷法进行提取，提取程序参照ＧＢ／Ｔ１９４９５．３操作。对于粪便样品可直接采用ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ直接提取总ＤＮＡ，提取程序按试剂盒说明操作。５．３．２．２犇犖犃纯度和浓度的测定取５μＬＤＮＡ溶液加双蒸水稀释到适宜体积，用核酸蛋白分析仪分别测定２６０ｎｍ和２８０ｎｍ波长吸光度值Ａ２６０和Ａ２８０。ＤＮＡ的浓度计算见式（１）：犮＝犃×犖×５０／１０００…………………………（１）式中：犮———ＤＮＡ浓度，单位为微克每微升（μｇ／μＬ）；犃———２６０ｎｍ波长吸光度值；犖———核酸稀释倍数。当Ａ２６０和Ａ２８０比值在１．７～１．９之间时，核酸纯度适宜作ＰＣＲ扩增。５．３．２．３犘犆犚扩增检测过程应同时做阳性和阴性空白对照。２＋）５，ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）４，犜犪狇酶（５Ｕ／）ＰＣＲ反应体系：１０×ＰＣＲ缓冲液（含ＭｇμＬμＬμＬ０．５μＬ，１０μｍｏｌ／μＬ正义、反义引物各１μＬ，模板ＤＮＡ０．５μｇ～１μｇ，补加双蒸水至５０μＬ。ＰＣＲ扩增参数：９５℃预变性５ｍｉｎ；９５℃变性３０ｓ，５２℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，３５个循环；最后７２℃延伸５ｍｉｎ。５．３．２．４犘犆犚扩增产物电泳检测用ＴＢＥ缓冲液制备１．５％琼脂糖凝胶，加入ＥＢ至终浓度为０．５μｇ／ｍＬ（也可在电泳后进行染色）。取５μＬＰＣＲ扩增产物与２μＬ上样缓冲液混合后加入点样孔进行电泳，电压５Ｖ／ｃｍ～９Ｖ／ｃｍ，２０ｍｉｎ～３０ｍｉｎ。用凝胶成像仪观察分析电泳结果。５．３．２．５结果判定阳性对照扩增出３５２ｂｐ，阴性空白对照孔未见有ＰＣＲ扩增条带，表明试验成立，否则应重做。试验成立，样品孔如发现有３５２ｂｐ大小的扩增条带，则判定检样中含有Ｂ．ｈ，否则判为阴性；必要时可对该扩增产物作进一步的酶切鉴定或测序鉴定进行确认（ＰＣＲ产物序列参见附录Ｅ）。５．３．２．６扩增产物酶切鉴定ＰＣＲ扩增若产生约３５２ｂｐ的核酸条带，可利用市售胶回收试剂盒回收扩增产物，再利用ＡｆｌⅢ内切酶进行酶切，Ｂ．ｈ的酶切产物片段大小为１３９ｂｐ、２１３ｂｐ。４标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１附录犃（资料性附录）疾病概述犃．１猪痢疾（ｓｗｉｎｅｄｙｓｅｎｔｅｒｙ，ＳＤ），又称血痢、黑痢、粘液出血性下痢，是由猪痢疾短螺旋体（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ，Ｂ．ｈ）（以前又名猪痢疾蛇形螺旋体Ｓｅｒｐｕｌｉｎａｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ，Ｓ．ｈ，猪痢疾密螺旋体Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ，Ｔ．ｈ，）引起的猪特有的一种严重的肠道传染病。临床症状以消瘦、腹泻、粘液性或粘液出血性下痢为特征，病理学特征为卡他性、出血性、纤维素性或坏死性盲肠与结肠炎。ＳＤ最早报道于１９２１年，此后，世界多数养猪地区都报道了本病的发生，该病主要发生于生长发育期的猪，尤以２月龄～３月龄仔猪发病多，死亡率高，哺乳仔猪、成年猪发病较少，即或感染也不表现出典型的ＳＤ症状，猪群一旦感染本病将很难彻底根除，给世界各国的养猪生产造成较大的危害，国内外兽医界均十分重视此病的研究，在我国该病被列为我国进境动物二类检疫性传染病。犃．２本病主要经消化道感染，各种应激因素、阴雨潮湿、气候多变，均可促使本病发生，本病的发生无明显季节性，常呈缓慢传播，且流行持续期长，自然条件下，断奶仔猪ＳＤ的发病率可达９０％，死亡率达３０％，经药物预防治疗，多数病猪转为慢性，康复猪仍可在粪便中排出Ｂ．ｈ。Ｂ．ｈ的保菌宿主有猪、小鼠和犬等，虽然Ｂ．ｈ是一种厌氧菌，但其具有广泛环境的适应存活能力，在湖泊、粪坑中能存活６０ｄ以上。因而保持猪舍环境卫生、做好灭鼠工作对预防本病的发生具有十分重要的作用。犃．３粘液出血性腹泻是ＳＤ最典烈的症状，但不同猪只的染病程度有较大的差异，大多数自然感染病例，潜伏期在２ｄ至２个月以上，一般为１周～２周，根据病程的不同，通常把ＳＤ分为急性、亚急性和慢性感染。急性感染病例：猪只感染本病后，开始多排稀软的粪便，随即粪中出现大量粘液和血块，呈油脂样或胶冻状，粪色为棕色、红黑色不等，随着病程的发展，病猪排便失禁，迅速消瘦，弓腰缩腹，起立无力，极度衰弱，以至死亡或转为慢性，病程在１周～２周。在猪群暴发本病之初，部分最急性病例，甚至不表现出明显症状，在几小时内突然死亡。亚急性和慢性病例：猪只粘液出血性下痢时轻时重，粪便常含有均匀的黯黑色血液，俗称黑粪，病猪生长发育停滞，精神萎靡不振，部分康复猪经一定时间可复发，病程在４周以上。犃．４ＳＤ病变仅局限于大肠，小肠和其他组织器官均无特征性病变，在猪回肠结合处常见一条明显的分界线。急性期病例大肠壁和肠系膜呈充血和水肿，粘膜常被粘液和带血斑的纤维蛋白覆盖，结肠内容物质软或呈水样并含有渗出物。早期病变常出现在结肠襻顶部，随着病情的发展大肠壁的水肿程度可能减轻，但粘膜病变加重，蔓延至盲肠、整个结肠和直肠前段，粘膜表面出现广泛的浅表坏死，在整个发病期都可在肠腔中和腺窝内显微镜检观察到大量的Ｂ．ｈ。犃．５对于猪痢疾的检疫，可结合流行病学、临床症状及病理解剖检验结果，对猪只是否感染本病作出初步判断，病原的确诊还需进行病原的分离培养和鉴定，传统的检验方法有大肠组织切片镜检，Ｂ．ｈ菌株的分离培养，病原的确诊鉴定方法包括溶血试验、结肠致病性试验以及利用ＰＣＲ技术检测Ｂ．ｈ的特异核酸序列等。５标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１附录犅（资料性附录）猪痢疾病原体图谱图犅．１结肠腺窝和上皮组织中犅．犺（犠犪狉狋犺犻狀犛狋犪狉狉狔；×７５０）６标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１附录犆（规范性附录）试剂的配制犆．１犜犛犃基础培养基胰胨（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）１５ｇ植物蛋白胨（Ｐｈｙｔｏｎｅ）５ｇ氯化钠５ｇ琼脂１５ｇ犆．２猪粪抽汁的制备猪粪抽汁：一份健康猪粪加四份ＰＢＳ（０．０１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２～７．４），混匀，４℃磁力搅拌２０ｈ～２４ｈ，取混合物离心（７０００ｒ／ｍｉｎ～８０００ｒ／ｍｉｎ，１ｈ），吸取上清液，置－８０℃保存备用。犆．３犅犑培养基ＴＳＡ基础４０ｇ猪粪抽汁５０ｍＬ脱纤牛血或马血１００ｍＬ壮观霉素２００ｍｇ／Ｌ抗敌素６．２５ｍｇ／Ｌ万古霉素６．２５ｍｇ／Ｌ利福平１２．５ｍｇ／Ｌ螺旋霉素２５ｍｇ／Ｌ蒸馏水８５０ｍＬ校正ｐＨ７．３±０．１，分装于三角烧瓶中，１００ｋＰａ～１１０ｋＰａ高压灭菌１５ｍｉｎ，备用。临使用前溶解培养基，待其冷却至５０℃～６０℃时再加入无菌采集的脱纤牛血或马血和各抗生素贮存液。犆．４抗生素贮存液的制备方法壮观霉素、抗敌素、万古霉素可直接溶于灭菌蒸馏水中，用０．２２μｍ滤膜过滤除菌，置４℃冰箱保存备用。利福平、螺旋霉素则需先用适量无水乙醇溶解，然后加入无菌水，使乙醇终浓度为２０％，再用细菌滤器过滤除菌。抗生素贮存液可按每１０００ｍＬ培养基加１ｍＬ的比例制备。抗生素贮存液置４℃冰箱保存可使用６个月。犆．５犘犅犛（０．０１犿狅犾／犔，狆犎７．２）缓冲液的配制磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）０．５６ｇ磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）０．１４ｇ７标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１氯化钠（ＮａＣｌ）８．５ｇ去离子水加至１０００ｍＬ１００ｋＰａ～１１０ｋＰａ（１２１℃）高压灭菌１５ｍｉｎ后备用。８标准分享网www.bzfxw.com免费下载 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１附录犇（规范性附录）结肠致病性试验犇．１试样处理致病性试验需采用１０代以内的菌种，用接种环刮取血液琼脂平皿上的菌落到灭菌生理盐水管中，振荡溶解，低速离心去琼脂，使每毫升含５．０×１０７个菌体。犇．２口服感染试验取健康试验猪２头，先禁食２４ｈ～４８ｈ，然后每天一次胃管投服分离菌株５０ｍＬ或直接饲喂ＢＪ培养物每次１０皿／头～２０皿／头，连投两次，观察３０ｄ。也可用小鼠或豚鼠试验，每个菌株至少用６只，先停饲２４ｈ～４８ｈ后，每只每次灌服１ｍＬ，次日再灌服一次，１５天后剖检观察盲肠病变，感染后５０％出现腹泻和大肠病变者，表示分离株为致病性Ｂ．ｈ。犇．３结肠接种试验取健康试验猪２头，先禁食４８ｈ。全身麻醉后剖腹暴露结肠，先注入２００ｍＬ～４００ｍＬ灭菌生理盐水，用手将肠内容物向后推移，排空肠内容物，每隔８ｃｍ～１０ｃｍ肠段，每段间隔２ｃｍ，进行双重结扎，注意不要损伤血管。一头猪视需要可结扎６个～１０个肠段，能同时测定５个～９个菌株的致病性。每个肠段注入５ｍＬ菌液，另设一肠段注射５ｍＬ生理盐水作为对照。另一头接种相同菌株和菌量，但肠段部位的前后顺序与第一头相反。接种后缝合腹腔，禁食，隔３ｄ剖检。如接种段比对照肠段明显肿胀、肠内渗出液体增多、充血显著（见图Ｄ．１），涂片镜检的病原菌形态特征与自然病例一致，则认为该菌株有致病性。Ｂ．ｉ等螺旋体和对照肠段无上述病理变化。图犇．１猪结肠结扎试验反应示意图９ 版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１２０７—２０１１附录犈（资料性附录）犘犆犚产物测序结果ＡＣＴＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧＣＴＡＴＡＧＧＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＡＣＴＧＴＡＴＡＴＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＴＧＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＧＣＴＡＣＴＡＡＴＧＣＴＧＴＡＡＧＡＡＴＧＧＧＴＡＴＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＡＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＧＡＡＡＡＣＡＴＧＴＴＧＡＡＴＡＴＴＧＣＧＧＴ（Ｎ）ＡＣＴＣＡＡＧＧＴＴＣＴＡＡＴＧＣＴＡＴＴＴＧＴＧＴＡＴＴＴＧＧＡＴＡＣＡＡＴＡＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＧＧＴＴＧＧＴＣＴＧＡＡＧＡＡＡＣＴＧＣＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＧＡＴＴＡＡＡＡＧＴＡＡＡＡＴＣＴＡＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＡＧＡＴＴＣＴＧＡＡＡＧＡＣＣＡＧＡＡＴＴＴＡＴＧＣＣＴＡＣＴＡＡＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＡＡＡＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＧＴＴＴＡＴＴＡＧ１０ 版权所有·禁止翻制、电子发售１１０—２７０２１／犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准猪痢疾检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１２０７—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张１字数２１千字２０１１年１１月第一版２０１１年１１月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２６２１定价１８．００元'