全国艾滋病检测技术规范(试行)

'全国艾滋病检测技术规范（试行）甘肃省疾病预防控制中心性病艾滋病科赵煜君 艾滋病检测工作具有严格的科学性和政策性，为了加强我省艾滋病（AIDS）检测工作的规范化管理，不断提高HIV抗体检测实验室的检测工作质量，确保每一份检测的准确性和可靠性，及时有效地发现感染者和上报疫情，必须认真学习、贯彻执行《全国艾滋病检测工作管理办法》和《全国艾滋病检测技术规范》中各项规定。只有严格按要求开展检测工作，才能使我省HIV抗体检测各级实验室管理逐步规范化、制度化，更好地发挥HIV检测在艾滋病防治工作中的作用。 《全国艾滋病检测工作规范》卫生部1997年9月颁布《全国艾滋病检测工作管理规范》卫生部待颁布《全国艾滋病检测技术规范》（试行）中国CDC2003年5月颁布 全国艾滋病检测技术规范（试行）包括：1、样品的采集和处理2、HIV抗体、抗原检测3、HIV核酸检测4、艾滋病检测实验室安全防护5、艾滋病实验室质量管理6、艾滋病确认实验室质量考评办法7、HIV诊断试剂临床评估方案 全国艾滋病检测技术规范（试行）附件：1、HIV抗体筛查报告2、HIV抗体筛查阳性送检率3、HIV抗体检测确认报告4、HIV抗体检测数及阳性人数统计报表5、艾滋病职业暴露个案登记表6、职业暴露后预防HIV感染的评价和处理程序附录：1、HIVRNA测定 样品的采集和处理—样品的采集样品是血液（血清、血浆和全血）、唾液和尿液血清样品采集：抽取的静脉血，室温自然放置1-2小时，待血液凝固后，3000rpm/min离心15分钟，吸出血清备用。抗凝血样品的采集：用加有抗凝剂的真空采血管或注射器抽取静脉血，移至加抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 样品的采集和处理—样品的保存HIV抗体检测：血清或血浆存放于-20℃以下，短期（一周）内检测可存放于2-8℃。抗原和核酸的检测：血浆和血细胞存放于-20℃以下，如长期保存应置于-80℃。 样品的采集和处理—样品的运送血清或血浆（一般不运送全血）：置于带盖的塑料管内，有明显的标记（编号或姓名，采集时间）附送检单。短期内（≤48小时）可室温运送，较远或较热，应在2-8℃条件下运送。 样品的采集和处理—样品的接受样品由经过培训的工作人员接受。核对样品与送检单，检查有无破损和溢漏，记录有无严重溶血、污染等情况。自发荧光的样品不可用荧光测试。消毒处理被污染的盛器和物品。 HIV抗体检测—试剂1、筛查试剂要求国家食品药品监督管理局注册批准批批检合格临床评估质量优良在有效期内2、确认试剂要求国家食品药品监督管理局注册批准种类：免疫印迹、条带免疫、免疫荧光常用试剂：免疫印迹 HIV抗体检测—试剂严格按照试剂说明书操作防止交叉感染严格遵守实验室操作规程 HIV抗体检测—筛查试验检测程序筛查试验：（1）阴性反应，报告HIV抗体阴性（2）阳性反应，须进行重复检测重复检测：（1）采用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂（2）如两种试剂均阴性，报告HIV抗体阴性（3）如均阳性或一阴一阳，送确认实验室确认，新采标本和原标本一并送检 HIV抗体检测—筛查试验的流程图样品筛查检测重复检测筛查试剂阳性反应阴性反应一阴一阳均阴性反应均阳性反应阴性报告送确认实验室进行确认原有试剂加另外一种筛查试剂 HIV抗体检测确认试验试剂：有免疫印迹试剂HIV1+2混合型和单一型1.用HIV1+2混合型阴性，报告HIV抗体阴性阳性，报告HIV-1抗体阳性如不满足阳性标准，判为HIV抗体不确定2.如出现HIV-2型的特异性指标条带用HIV-2单一型阴性，报告HIV-2抗体阴性阳性，报告HIV-2抗体阳性如需鉴别，应进行核酸序列分析 HIV抗体检测确认试验流程图免疫印迹法（HIV1/2混合型）阴性反应HIV-1阳性反应不确定反应出现HIV-2指示条带免疫印迹法（HIV-2）阳性反应阴性反应报告HIV-2血清学阳性必要时测核酸不确定反应阴性反应阴性报告HIV-1阳性报告每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告；如随访期间出现阳性反应则报告阳性 HIV抗体检测—确认试验结果和判定1.HIV-1抗体阳性至少有二条Env带出现或至少有一条Env带和P24带同时出现2.HIV-2抗体阳性：同时符合以下二条标准符合WHO阳性判定标准，即出现至少二条Env带符合试剂盒提供的阳性判定标准3.HIV抗体阴性无HIV抗体特异带出现4.HIV抗体不确定出现HIV抗体特异带，但不足以判阳性 两种不同结构蛋白HIV-1HIV-2EnvGp160Gp140Gp120Gp105Gp41Gp36GagP55P56P24P26P17P16PolP66(65)P68P51P53P31P34 检测结果的报告和处理—HIV抗体筛查1.筛查试验阴性出具HIV抗体阴性报告2.筛查试验阳性可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1），不能出阳性报告。尽快进行以下处理：填写HIV抗体复查送检单（附表2）尽可能重新采集受检者的血样将两份血样（或原血样）连同复查送检单一并送HIV筛查中心实验室，转送确认实验室或直接送确认实验室确认 检测结果的报告和处理—HIV抗体筛查筛查中心实验室尽快用两种试剂复检。如结果均阳性或一阴一阳，则将标本和复查单一并送确认实验室确认如结果均为阴性，在HIV抗体筛查报告上盖上“HIV抗体阴性”，及时将结果反馈送检单位，不必再送确认实验室做好检测后咨询 检测结果的报告和处理—HIV抗体确认1、HIV抗体阳性应出具阳性确认报告（附表3），并做好咨询，保密和报告工作2、HIV抗体阴性应出具阴性确认报告，如近期有高危行为，为排除“窗口期”的可能，可以进行P24抗原或HIV核酸检测或2-3个月后再做抗体检测 检测结果的报告和处理—HIV抗体确认3、HIV抗体不确定，应出具HIV抗体不确定确认报告，在备注中应注明“3个月后复查”，同时进行以下处理：-随访复查：每3个月随访复查一次，连续2次，共6个月。仍呈不确定或阴性，则报告HIV阴性；如随访期间发生带型进展，符合阳性判定则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性-必要时可做P24抗原或HIV核酸测定，结果只作辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果-做好检测后咨询 HIV抗体检测情况报告流程图艾滋病筛查实验室艾滋病筛查中心实验室艾滋病确认实验室艾滋病确认中心实验室同级卫生行政部门国家艾滋病参比实验室省级卫生行政部门中国CDC性艾中心每季首月5日前报告上季检测情况每季首月10日前报告上季检测情况每季首月15日前报告上季检测情况每季首月20日前报告上季检测情况没有艾滋病筛查中心实验室的地区每季首月5日前报告上季检测情况 HIV感染监测工作中实验室检测策略符合以下三条，可按HIV感染报告疫情。1.艾滋病确认中心实验室条件：＊本年度质量考评成绩优良＊有严格的实验室质量管理制度2.HIV抗体筛查试剂条件＊经过国家食品药品监督管理局批准或注册，批批检验合格，临床评估质量优良＊复检用两种不同原理或不同厂家的筛查试剂（包括进口或国产第三代ELISA试剂） HIV感染监测工作中实验室检测策略3.HIV抗体阳性的判定条件＊两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA试剂复检样品OD值与临界值（Cutoff）的比值（S/CO）≥6.0＊两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA试剂复检样品S/CO比值在1.0-6.0之间，或两种试剂复检结果一阴一阳，应进一步确认 检测及疫情报告流程图送检样品用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括第三代ELISA试剂）第三代ELISA试剂复测结果的S/CO比值≥6.0第三代ELISA试剂复测结果的S/CO比值1.0~6.0之间确认试验判断阳性，上报疫情判断阴性阳性反应选用筛查试剂阴性反应两种均阳性一阴一阳两种均阴性阳性阴性 P24抗原检测1、适用范围：HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断第四代HIV-1抗原/抗体ELISA检测呈阳性反应，但确认试剂阴性者的辅助诊断监测病程进展和抗病毒治疗效果 P24抗原检测2、试剂：经批准注册的ELISA双抗体夹心法试剂3、操作：严格按照试剂盒说明书4、结果报告和解释：＊P24抗原阳性必须经过中和试验确认＊P24抗原阳性仅作HIV感染的辅助诊断依据，不能确诊＊P24抗原阴性只表示本试验无反应，不能排除HIV感染 HIV核酸检测—实验室条件功能分区：在不同的房间分别设有试剂准备区、样品处理区，扩增区和扩增产物分析区四个功能不同的独立工作去工作人员：必须具有艾滋病实验室的上岗资格，一并接受过安全及操作技术培训设施和设备：根据检测项目配备相应的设施和设备各区的设施和设备为区域性专用各区备有专用工作服、帽子和鞋套，必要时配备防紫外线眼镜或面罩 HIV核酸检测—方法和试剂分类：定性和定量检测两类定性：HIV感染的辅助诊断定量：监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果方法：定性：常用PCR或RT-PCR技术定量：常用逆转录PCR实验（RT-PCR）核酸序列扩增实验（NASBA）分支DNA杂交实验（bDNA）试剂：通用的扩增试剂，引物来自文献或自行设计 HIV核酸检测—检测程序样品的采集和处理核酸提取试剂配置加样和扩增扩增产物测定和分析定量检测 HIV核酸检测—结果的判定和报告1、定性检测：根据扩增产物的电泳图像判定阳性结果要进行核酸序列测定确定阴性：报告本次实验结果阴性，不排除HIV感染阳性：作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断报告定性检测结果时注明反应条件和所使用的引物序列 HIV核酸检测—结果的判定和报告2、定量检测：＊按照仪器读数报告结果，注明试验方法、样品种类和样品量＊注明最低检测限水平，低于最低检测限的结果不能排除HIV感染＊附上仪器打印的数据 HIV核酸检测—实验室管理制定严格的实验室管理制度，并严格遵照执行。生物安全严格执行分区制度仪器和材料的专用制度单向流向制度，不得逆向流动废弃物处理制度质量控制和评价 艾滋病检测实验室安全防护建立安全制度人员管理和培训安全保障措施-个人保健-带入或带出实验室的物品-减少利器的使用-HIV消毒方法实验室事故处理-紧急处理措施-事故登记（附表5）-报告和检测-HIV职业暴露后的药物预防（附表6） 艾滋病实验室质量管理质量保证（QA）质量控制（QO）质量评价（EQA） HIV确认实验室质量考评办法考评目的-评价HIV抗体检测和确认的水平，为各实验室提供外部质控机制，为检查和重新认定资格提供技术依据-促进实验室建设，逐步完善实验室功能-提高实验室技术和管理水平考评对象及组织单位-所有经正式批准的实验室为受考评单位-中国CDC组织并委托性病艾滋病中心负责考评工作-考评每年一次 HIV确认实验室质量考评办法考评内容和方式-内容：HIV抗体筛查和确认技术，结果报告和各项职能工作的完成情况-方式：实验操作；问卷调查；现场抽查考评工作程序-审评专家组确定考评的具体实施方案，问卷调查内容及有关事宜-制备考评血清（6-10份样），随机编号发给参评实验室，同时发给考评问卷调查表-参评实验室检测考评血清-按规定期限上报检测报告和问卷调查表-检测结果的评判-结果反馈 HIV确认实验室质量考评办法考评结果的判定考评结果的处理-对考评合格实验室的资格认证和鼓励-对考核成绩较差的实验室进行以下整顿：⑴考评不及格、核查确有质量问题的，上报组织单位转报卫生部疾控司，由卫生部疾控司发撤销实验室资格的通知⑵考评较差的，暂停确认资格，限期3个月整改，整改后仍不合格者按上述规定处理⑶暂停确认资格的，一年内若不申请再次考评者，撤销其资格⑷撤销资格的须重新培训，再次申请，批准后获得确认资格 HIV诊断试剂临床评估方案评估目的：对国内销售的国产和进口HIV试剂的敏感性、特异性、批间差异和适用性进行综合质量评估，及时发现和解决试剂质量问题为卫生行政部门提供有关的决策依据作为艾滋病检测实验室选择试剂的依据未参加评估的试剂一般不推荐使用 HIV诊断试剂临床评估方案评估组织及参加单位：1、国家级评估国家艾滋病参比实验室负责组织可选择部分具备条件的确认（中心）实验室参加评估每年组织1-2次，使其规范化、制度化2、省级评估省艾滋病确认中心实验室为主要职能单位选择省内确认实验室或有条件的筛查中心实验室参加评估每年组织1次，使其规范化、制度化 HIV诊断试剂临床评估方案评估程序：1、国家级评估（1）样品的组成和采集一般不少于50份，最好在500份以上，目前常用的是200份（已知和未知样品各半）已知样品必须经确认，100份已知样品由国家参比实验室和参评实验室各提供50份，一般阳性样品为10-40%100份未知样品，由参评实验室在本地区有HIV阳性者的高危人群中采集样品质量：考核样品必须保存良好，清亮、无溶血、无污染、无过多脂质，避免反复冻融 HIV诊断试剂临床评估方案（2）试剂的品种及抽检试剂种类应覆盖参评省临床使用的所有品种每个参评实验室评估的试剂至少为五个品种为避免出现重复和遗漏，由国家参比实验室协调试剂品种受评估试剂应在筛查实验室中抽检，避免厂家直接送检可用一种或一种以上高质量的第三代试剂作为参比试剂 HIV诊断试剂临床评估方案（3）质评样品的检测操作必须在最佳条件下进行，即同一仪器、同一时间、同一检测人员已知样品，可直接用受评估试剂检测未知样品，可使用高质量的第三代试剂，对其中筛查阳性和可疑样品进行确认 HIV诊断试剂临床评估方案2、省级评估各省确认中心实验室根据国家级评估方案及本省具体情况制定省级评估方案 HIV诊断试剂临床评估方案评估结果的分析及统计处理敏感性：真阳性/（真阳性+假阴性）*100%特异性：真阴性/（真阴性+假阳性）*100%假阳性率：假阳性/（真阴性+假阳性）*100%假阴性率：假阴性/（真阳性+假阴性）*100%功效率：是指不产生假阳性和假阴性结果的效率，是敏感性和特异性相结合的综合质量指标。（真阳性+真阴性）/（真阳性+假阳性+真阴性+假阴性）*100% HIV诊断试剂临床评估方案变异系数（CV）：是反映各次OD值相对于均值的离散程度的指标，用于衡量试剂的重复性或精密度变异系数（CV）=S/x*100%(x为均数、s为标准差)阳性预示值（PPV）：表示阳性检测结果为真阳性的概率阴性预示值（NPV）:表示阴性检测结果为真阴性的概率PPV=真阳性/（真阳性+假阳性）*100%NPV=真阴性/（真阴性+假阴性）*100% HIV诊断试剂临床评估方案评估结果和收集、分析、上报和反馈参与国家级评估的实验室应及时整理评估资料，上报并同时附上原始记录的复印件，原始记录本室存档备案国家参比实验室对收集的资料进行汇总和分析国家参比实验室定期将全国HIV诊断试剂临床评估结果上报并反馈各省、自治区、直辖市卫生行政部门、艾滋病检测实验室和试剂生产厂家每次国家级艾滋病诊断试剂临床评估的结果将在《艾滋病预防控制信息》上公布 HIV诊断试剂临床评估方案省级确认中心实验室组织的HIV诊断试剂临床质量评估工作，评估结果上报本省卫生行政部门和国家参比实验室，以便及时沟通情况，发现和解决问题 在《全国艾滋病检测工作管理办法》暂未颁布前，按《全国艾滋病检测工作规定》的规定执行 实验室设置—种类和分级种类：分为确认与初筛（或称筛查）实验室两类。每省可设立一个以上确认实验室，初筛实验室可设在卫生防疫防治机构、检疫机构、医疗机构、采供血机构、生物制品生产单位、医学科研教学等单位内。分级：国家HIV抗体检测参比中心，省级HIV抗体确认中心，HIV抗体确认、初筛中心和初筛实验室五级。 实验室设置—任务（1）HIV抗体初筛实验室初筛检测：提供检测前后的咨询服务初筛阳性标本送检确认作好标本登记，实验记录，定期报告HIV抗体检测情况 实验室设置—任务（2）HIV抗体初筛中心实验室HIV抗体初筛检测和咨询服务初筛阳性标本的复检及送检确认，以及技术培训，咨询服务，质量管理和质量控制等工作收集汇总本地区或本系统内初筛实验室的检测工作，上报省级确认中心HIV抗体确认实验室：略省级HIV抗体确认中心：略国家HIV抗体检测参比中心：略 实验室设置—必备条件1、人员条件初筛实验室：3名以上医技人员，其中中级1名以上从事病毒血清学检测技术工作2年以上接受过国家或省级确认中心举办的培训班并获得合格证确认实验室：略2、设备条件初筛实验室：有独立的实验用房（或至少有专用的检测台），污染区和清洁区要分开检测器材包括酶标仪、洗板机、精确的移液器、专用的普通冰箱、低温冰箱、离心机及各种消毒与污物处理设施，安全防护用品和恒温设施确认实验室：略 实验室审批1、设立HIV抗体初筛实验室的单位先报经当地卫生行政部门同意后，再向省卫生行政部门申请有省级卫生行政部门组织专家组按规范要求，就人员业务素质、实验室设置、场地、检测对象等进行实地考察和全面论证合格后发批准文件或证书，并报卫生部疾病控制司和国家HIV抗体检测参比中心备案2、设立HIV抗体确认实验室的单位：略 谢谢！'