天然产物vbe-1衍生物的结构改造及抗肿瘤活性研究

'中图分类号UDCR194610硕士学位论文学校代码10533天然产物垤E一1衍生物的结构改造及抗肿瘤活性研究StructuralTransformationandAntitumorBioactivityEvaluationofNaturalProductVBE一1Analogues作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：于淼药物化学天然产物合成修饰药学院周应军刘苏友论文答辩日期2Q!三生鱼旦三目答辩委员会主中南大学二。一三年五月 原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谓j．的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：互盏＆日期：竺!三年』月丛日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：亚!三年2L月_三上日 硕士学位论文摘要天然产物VBE_1衍生物的结构改造及抗肿瘤活性研究摘要：VBE-1为中药黄荆子VitexNegundo￡．的主要活性成分，具有较好的抗肿瘤活性，被证实能够通过抑制Akt-mTOR通路达到抗肿瘤作用。该化合物体外活性较强，毒性低，安全性高。但是在大鼠体内易经历代谢失活，导致其体内外活性差异显著。与天然产物VBE一1具有相似结构的鬼臼毒素和Etoposide已经作为经典的抗肿瘤药物，但是该类药物普遍存在着抗癌谱窄、水溶性差，严重的骨髓抑制及胃肠道反应等副作用。针对VBE—l的代谢失活，通过对4’位羟基和6位羟基进行甲基和其他基团的取代，能够有效地增强体内活性。本研究拟通过结构改造，使VBE类化合物的体内活性增强，毒性降低。并通过对鬼臼毒素及其衍生物的结构改造，使之类似于VBE类化合物，并通过对4’位进行修饰，降低鬼臼毒素的毒性，增加生物利用度。期望发现既具有鬼臼毒素活性，又具有VBE一1类似物高安全性的化合物。本课题以鬼臼毒素和VBE作为原料，设计和合成了三类24个化合物，它们分别为鬼臼毒素结构改造衍生物，VBE．1的4’位胺烷基化取代衍生物和Etoposide的4’位胺烷基化取代衍生物，完成了目标化合物的结构确认，采用平皿克隆形成法检测化合物对人肺癌NCI-H446细胞克隆形成能力的抑制活性，并初步探讨了VBE和Etoposide衍生物抗肿瘤活性的构效关系：4’取代侧链长短及含氮取代基的选择是影响活性的重要因素；2一醛基，3．羟甲基的结构是影响化合物活性的重要官能团：3位取代基为酯基时活性降低。上述研究为下一步寻找高效低毒的抗肿瘤化合物提供了重要的线索。本论文共计图35副，表l2个，参考文献48篇。关键词：VBE．1；鬼臼毒素；依托泊苷；结构改造；构效关系分类号：R914Il 硕士学位论文AbstractStructuralTransformationandAntitumorBioactivityEvaluationofNatureProductsVBE一1AnalogueAbstract：VBE·1hasbeenconfirmedasthemainbioactivecomponentoftraditionalChinesemedicineFructusViticisNegundo，whichexertedoutstandinganti-tumoreffect／nvitrobyinhibitingAkt—mTORpathway．However,pharmacodynamicstudyshowedthatVBE一1metabolitequickly／nvivo，leadingtoanobviousinconsistenceofactivityinvitroandinvivo．ComparedwithVBE-l，PodophyllotoxinandEtoposidehavesimilarchemicalstructuresandhavebeenusedasclassicanti-tumordrugs．Buttheseanti—tumordrugshavecommonproblems，suchasnalTowanticancerspectrum，poorwatersolubility,severemyelosuppressionandgastrointestinaldamages．AimingatinhibitingquickmetablisationofVBE一1，wetriedtomodifyVBE一1bysubstitutingC一4’andC一6hydroxylgroupstomodifyPodophyllotoxininthelightofthechemicalstructureofVBE-1，inordertoreduceitstoxicity．Therefore，theobjectoftheresearchistOfindaseriesofcompoundswhichhaveidealactivityasPodophyllotoxinandhighsafetyasVBE一1．Inthisobject．weusePodophyllotoxinandVBE-lasstartingmaterials．24targetcompoundsweresynthesized，which，Canbedividedinto3series：Etoposide4"-alkylationderivatives，VBE一14"-alkylationderivativesandPodophyllotoxinderivatives．Allsynthesizedtargetcompoundswereconfirmedbyspectroscopicmethods．AndweretestedfortheirinhibitoryeffectagainstNCI-H446celllinesusingplateclone．formationmethod．And19ofthemhaveanti-tumoreffect．Thepreliminarilystructure—activityrelationship(SAP)ofVBEandEtoposidederivativesweresummarized：thelengthofsidechainhadobviousaffectontheactivityofcompounds，2-aldehydegroupand3-hydroxymethylgroupwereimportantfunctionalgroups，ifissubstitutedbyester,activitywouldbereduced．Basedonliteratures，herein，couldlayasolidfoundationoffindingidealanti-tumordrugs．Thereare35figures，12tablesand48referencesinthispaper．III 硕士学位论文AbstractKeyWords：VBE；PodophyllotoximEtoposide；Structuralmodifications；StructuraltransformationClassification：I圆14IV 硕士学位论文目录原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一11目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一V符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯VIIl绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘11．1肿瘤与P13K．Akt．mTOR信号转导通路的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“21．2VBE．1来源和研究基础简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·31．3VBE．1体外抗肿瘤药理活性及作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·31．4VBE一1及其衍生物的体内活性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·41．5VBE．1类似物鬼臼毒素研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·52立题依据和实验设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1立题依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．1VBE类化合物的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．2鬼臼毒素衍生物的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·112．2目标化合物的设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．2．1目标化合物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·112．2．2目标化合物的合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·132．3活性筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯163．1实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯163．1．1合成的目标化合物以及对人肺癌NCI—H446细胞的抑制率⋯⋯⋯⋯⋯“163．2合成路线讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．2．1鬼臼毒素改造的VBE衍生物Compound1的探索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．2．2鬼臼毒素改造的VBE衍生物路线2的探索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯213．2．3鬼臼毒素改造的VBE衍生物路线3的探索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233．2．4VBE．14’位修饰的衍生物中间体Compound14的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·273．3构效关系讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303，3．1三个系列化合物及活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·30V 硕士学位论文目录3．3．2不同系列化合物的构效关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘323．3．4三类母核间化合物活性比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’343．3．4构效关系小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’344实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯354．1化学实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯355全文结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一60附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·64综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯107攻读硕士期间主要研究成果及获奖情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯123VI 硕士学位论文符号说明付丐现明编号英文全称中文全称LD50MedianLethalDose半数致死量TheHalfMaximalInhibitoryIC50半数抑制浓度ConcentrationHer-2HumanEpidermalGrouthFactor2人表皮生长因子DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜TLC111i11LayerChromatography薄层层析色谱HydrogenNuclearMaagnetic1H．NMR核磁共振氢谱ResourceSpectraCarbonHydrogenNuclear13C-NMR核磁共振碳谱MaagneticResourceSpectram．p．MeltPoint熔点TMSITrimethylsilylIodide三甲基碘硅烷TMSClTrimethylChlorosilane三甲基氯硅烷卫BDMSCltert-ButyldimethylsilylChloride二甲叔丁基氯硅烷UVUltravioletSpectra紫外光谱Hi曲PerformanceLiquidHPLC高效液相色谱法ChromatographyVII 硕士学位论文绪论1绪论黄荆子FructusViticisNegundo为鞭草科牡荆属植物黄荆VitexNegundoL．的果实。生物活性研究表明，黄荆子木酯素VBE．1具有较好的抗肿瘤活性，而且被证实能够通过抑制Akt-mTOR双靶点达到抗肿瘤作用。抑制该通路可以激活癌细胞凋亡、抑制肿瘤的发生和发展，并降低肿瘤细胞产生放化疗的抵抗性，与传统放化疗手段联用，还可以起到增敏的作用。鬼臼类木脂素主要作用于微管而抑制细胞的有丝分裂，使其停止于M期，即阻止微管蛋白形成微管，还可以通过DNA拓扑异构酶II而起作用，使细胞周期终止于G期(DNA合成前期)。鬼臼类木脂素还能抑制细胞对胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺嘧啶、鸟嘧啶等各种核苷的摄取，从而抑制细胞DNA、RNA以及蛋白质的合成。研究表明，鬼臼毒素母体化合物的毒性太大，限制了它在临床上直接应用，通过对其结构修饰开发的药物依托泊苷(Etoposide，VP．16)、替尼泊苷(Toniposide，VM．26)和依托泊苷盐酸盐(Etopophos)等已经在临床应用，但是它们仍存在水溶性差、易产生多药耐药性和毒性较强等缺点。同时，研究表明，VBE类化合物的毒性相对较低(小鼠I：1J]及LDso>2000mg／kg)，而鬼臼毒素的母核与VBE类的母核结构类似，鬼臼类化合物毒性较大(小鼠口服LD50>51．868mg／kg)，基于两者结构的类似性，本课题希望对鬼臼毒素类化合物进行结构改造，使之类似于VBE类化合物，保留鬼臼类化合物的活性，降低毒性，同时对VBE类化合物进行修饰，希望通过结构改造降低其体内代谢速率，增加生物利用度，找到活性更好的化合物。本课题以VBE类化合物的结构为基础，合成了一系列4。位羟基衍生物。同时以鬼臼毒素和依托泊苷作为原料，改造成一系列结构类似于VBE结构的化合物，并对目标化合物完成结构确认。本课题采用平皿克隆形成法检测化合物对人肺癌NCI-H446细胞株的抑制活性，计算化合物对于细胞的克隆形成抑制率IR％，分析化合物的抑制活性IC50。并初步讨论对于抗肿瘤活性的构效关系。为下一步设计和合成活性更高的小分子化合物提供了重要信息和基础。 硕士学位论文绪论1．1肿瘤与P13K-Akt．mTOR信号转导通路的关系肿瘤是最常见的恶性疾病之一，随着人们对肿瘤发病相关基因和分子机制认识的加深，引起细胞增殖和抑制凋亡的小分子逐渐成为癌症治疗的新靶点。细胞通路中的关键分子在信号转导过程中异常表达，导致细胞异常生长、增殖和分化，从而导致肿瘤的发生和发展【l】。P13K／Akt／mTOR信号转导通路(图1．1)在许多细胞功能调控中起到十分关键的作用，参与了很多重要的生物学过程，包括细胞生长、增殖及存活。但其持续性过度激活可导致肿瘤的发生。图1-1P13K／Akl／mTOR信号通路示意图有关研究表明【2】，P13K／Akt／mTOR通路在肿瘤细胞增殖、血管新生和转移、对放化疗的拮抗中起到重要作用。在癌症发生过程中，该通路经常被激活。通过抑制通路中的多个受体，可以抑制肿瘤细胞的增长、引起癌细胞的凋亡。因此，对该通路的研究在癌症的靶向治疗中发挥重要作用。癌症中P13K／Akt／mTOR通路的异常活化高达70％，这条通路最主要的基因变异是PTEN活性缺失13]。以乳腺癌为例，早期研究表明，超过33％的乳腺癌患者中存在PTEN的低表达或缺失，不同的乳腺癌亚型中PTEN丢失的水平不同：在LuminalA型或LuminalB型乳腺癌中约有29％--一44％，而在人表皮生长因子受体．2fhumanepidermalgrowthfactor2，Her-2)型和Basal．1ike型乳腺癌中分别为22％和67％。PTEN蛋白的低表达率以II期和Ⅲ期肿瘤为最高，提示PTEN的杂合性丢失与乳腺癌的恶性程度密切相关[41，在较大的肿瘤、较晚的肿瘤分级及激素受体阴性的乳腺癌中的PTEN基因多缺失或蛋白水平的下调；导致乳腺癌高度恶性、不良预后和PTEN的缺失相关PIK3CA激活点的突变，且PTEN的低表达与Her-2阳 硕士学位论文绪论性乳腺癌Trastuzmab治疗耐药相关。在癌症中，P13K蛋白通路异常活化导致下游PIK3CA的高频突变。该基因突变通过P13K／AKT途径，引发AKT持续活化，导致乳腺上皮细胞的生长和转化，抑制细胞凋亡IS]。同时当AKl撤活后，磷酸化TSC2，从而解除TSCl／TSC2对Rheb的抑制，Rheb在RNA水平上上调，导致mTOR直接活化161。使众多roTOR的调控因子均处于突变或激活状态。以上过程使整条P13K／Akt／mT0嘶直路处于持续性活化状态，导致肿瘤的发生和发展。1．2VBE一1来源和研究基础简介VBE．1是从黄荆子FructusViticisNegundo的活性提取部位EVn．50中分离得到的芳基二氢萘类木脂素化合物。本课题组周应军等人首先运用生物活性导向技术确定黄荆子抗肿瘤有效部位(EVn．50)，Evn．50被认为是一种高效、低毒的抗癌候选药物，处理MCF．7细胞48h，EVn-50的IC50为66．4I．te,／mL。进一步试验表明[71，EVn-50对7种不同的的肿瘤移植模型(乳腺、前列腺、肝以及卵巢肿瘤等)显示了广谱的抗肿瘤活性。从Evn-50中分离得到8个芳基二氢萘类木脂类化合物【8]，此类化合物为EVn．50中的主要活性物质群(含量为40％)。并得到EVn50中代表性芳基二氢萘类木脂素化合物VBE．119]，其化学名为6．羟基_4．(4．羟基．3一甲氧基苯基)．3．羟甲基．7．甲氧基．3，4．二氢(3R,4S)一2。醛基萘。结构式如图1．2所示。OH图1．2VBE．1的结构1．3VBE一1体外抗肿瘤药理活性及作用机制在体外细胞试验中VBE．1对多种肿瘤细胞表现出抑制活性(人卵巢癌COCl细胞，入小细胞肺癌NCI．H446细胞，人肝癌SMMC．7721、HepG2细胞，人白血病HL．60细胞，人乳腺癌MCF．7、MDA．MB-435S、T47D细胞，人宫颈癌HeLa细胞，人胃癌SGC．7901、MGC一803细胞，人肺癌A549细胞)，尤其对人乳腺癌MDA．MB435S细胞(雌激素受体和孕激素受体阴性)和人乳腺癌MCF一7细胞(雌激素受体阳性)均具有较好的抑制作用，且呈剂量依赖性【lOl，例如，在 硕士学位论文绪论对人乳腺癌MCF．7细胞、T47D细胞和MDA．MB-435S细胞的体外试验中发现，VBE．1对细胞的集落形成能量和锚定依赖性生长均具有较好的抑制作用(见表1．1)，且呈剂量依赖性。表明VBE．1是一个安全且体外效果显著的抗肿瘤活性的天然产物。表1．1VB．1对3种人乳腺癌细胞细胞的半数抑制率抗肿瘤作用机制研究表明【ll】，Evn-50通过诱导细胞凋亡，上调Bax并下调Bcl．2的表达，提高Bax／Bcl．2比值，抑制肿瘤生长。进一步研究表明，其中的主要成分VBE．1能通过抑制Akt的磷酸化使Akt活性下调，同时抑制mTOR的磷酸化使p70S6K不能活化，以此调节P13K／Akt／mTOR信号转导通路，从而对多种肿瘤细胞的生长产生抑制作用【121(图1．3，1-4)。wEl(煳一2510—41p-mrroR--I麟‘P．舭叠簟麟飘rnTOR豢鬃豢图1．3VBE-1对Akt磷酸化的抑制作用图1-4VBE．1对roTOR磷酸化的抑制作用(对照组；2州；5州：109M)(对照组；49M；1州)1．4VBE．1及其衍生物的体内活性研究VBE．1是一种新型的P13K／Akt／mTOR通路双靶点抑制剂【13】，本课题组研究发现VBE．1能有效逆转肿瘤细胞耐药【14】，增加化疗药物的敏感性。但是，对VBE．1进行体内抗肿瘤作用评价过程中，采用裸小鼠MDA．MB．435S实体移植瘤和裸小鼠MCF．7实体移植瘤抑制实验评价VBE．1的体内活性，结果显示VBE．1抑瘤效果并不显著【15】。研究发现VBE．1在大鼠体内转化为三个主要代谢产物M1、M2、M3(图1．5)，代谢产物M1，M2以及M3仅显示极弱的抑瘤活性。VBE．1药动学研究表明【”】，大鼠口服给药后，VBE．1在体内代谢过程符合二室模型，t1，2为69．315min表明VBE．1体内代谢迅速。不理想的药代动力学参 硕士学位论文绪论数成为VBE．1作为抗肿瘤药物的重大缺陷。VBE·I(MCF一7：lCsa=32¨h毋J唧GAHM-1(MCF一7：ICsa=1557．5IJM)M。2(MCF·7．ICso=19648pM)图1-5VBE-1在大鼠体内的代谢产物VBE．1体内代谢位点主要为4’．位酚羟基及2．位醛基，VBE．1代谢过程即失活过程，代谢失活是VBE．1作为抗肿瘤药物的缺陷之一[161。对VBE．1进行结构修饰具有十分重要的意义。课题组对VBE．1的4’位和6位进行甲基化得到化合物VBE．6(图1．6)，抗肿瘤活性研究表吲37J，VBE．6活性优于其合成前体VBE．1，且在体内代谢后，代谢产物依然具有显著的抗肿瘤活性，仅稍弱于原型药物VBE．6。OCH3图1-6VBE．6的化学结构通过构效关系的研究【14】，我们得知，VBE．6由于6位4’位甲基化，具有比VBE．1更好的活性，可见4’位和6位时影响代谢的主要位点。因此，基于以上VBE．1类化合物的缺陷，对VBE—l进行结构修饰具有十分重要的意义，试图对VBE．1的结构4’位6位进行改造，改善其体内代谢参数，克服药代动力学上的缺点，是本课题的重要研究目标之一。1．5VBE．1类似物鬼臼毒素研究进展鬼臼毒素是从小蘖科鬼臼属植物一华鬼臼(又称鸡苔素)的根和茎中提取到的木脂类抗肿瘤成份。鬼臼毒素及其衍生物由于结构的不同存在2种不同的作用 硕士学位论文绪论机理【17】：4’位为甲氧基的鬼臼毒素衍生物主要作用于微管而抑制细胞的有丝分裂，使其停止于M期，即阻止微管蛋白形成微管；4’位为羟基的鬼臼毒素衍生物则是通过DNA拓扑异构酶II而起作用，使细胞周期终止于G期(DNA合成前期)。鬼臼类木脂素还能抑制细胞对胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺嘧啶、鸟嘧啶等各种核苷的提取，从而抑制细胞DNA、RNA以及蛋白质的合成。目前人们以鬼臼毒素为先导化合物进行了大量结构修饰(表1．2)，大部分研究主要集中在A环，C环以及7．位的修饰和改造，通过对这些位点的修饰和改造，合成了一系列具有不同效果的抗肿瘤活性化合物。表I-2鬼臼毒素及其衍生物 硕士学位论文绪论NK-61lGL-33lTOP一539。．肜№2《∞≯南。o—V入076、9气磊Q港0。一《姗南。o—丫入07f占＼、N／、、、／，，^、《姗两。早Ar07O＼0≯H～l!I、《鲫9阜二‘0H0厶／＼鼢两。o∥≮入0-／2)H《姗南。9A丫入07’0H7抑制微管蛋C环【20】白的合成抑制微管蛋C环【21】白的合成抑制微管蛋C环【221白的合成抑制拓扑异C环【23】构酶II抑制拓扑异C环【24】构酶II抑制拓扑异C环【25】构酶II 硕士学位论文绪论8 硕士学位论文绪论研究发现，通过7位修饰的衍生物具有较好的活性，通过在引入7位糖基侧链可以增加水溶性，但是7位的修饰对化合物毒性影响较弱。因此，寻找毒性更低，体内活性更好的化合物成为人们关注的热点。鬼臼毒素与VBE．1在结构上存在一定的类似性，二者的母核比较相似，但是作用机制不同。鬼臼毒素的D环为内酯环，而VBE．1对应的结构为2．醛基，3．羟甲基，二者在结构上的区别造成了作用机制和活性的巨大差异，结合两个化合物不同的结构特征，将鬼臼毒素转变为类似VBE—l的结构，研究不同的取代基团对于活性的影响，是本课题将要研究的目标。本课题拟对鬼臼毒素进行类VBE．1结构修饰研究。一方面，可以进一步揭示不同结构的VBE类化合物作为P13K／Ah／mTOR通路双靶点抑制的构效关系，另一方面，通过对化合物活性的研究，为探讨鬼臼毒素结构改造为类VBE结构后活性和作用机制改变的原因。 硕士学位论文立题依据和实验设计2立题依据和实验设计2．1立题依据2．1．1VBE类化合物的研究前期研究表明，VBE．1具有较好的抗肿瘤活性。而体内外活性差异是对VBE．1进行结构修饰的主要依据，VBE．1在体内的代谢过程会导致失活，防止6．，4’．羟基葡萄糖醛酸化是改进其代谢失活、代谢参数不佳的主要策略。通过本课题组对已有VBE类化合物的构效关系进行的研究，推测此类化合物的构效关系(图2．1)如下【38】：①对应异构体对于活性的影响不大；②2．醛基，3．羟甲基取代的形式维持化合物较高的活性；③芳环上6．，7．，3’．，4’．甲氧基取代的化合物活性强于6．，4’．羟基，7．，3’．甲氧基取代的化合物；④芳环上6．羟基，7一甲氧基的化合物活性高于6．甲氧基，7．羟基取代的化合物；⑤芳环上4’一羟基，3’．甲氧基的化合物活性高于3’一甲氧基，4’．羟基取代的化合物。主◆图2．1VBE．1的构效关系课题组前期的研究证明VBE．1具有较好的抗肿瘤活性，试图以鬼臼毒素作为原料对VBE．1进行结构改造和结构修饰，进一步揭示A环不同取代基，C环羟基取代与化合物活性之间的关系，同时对4’位和6位羟基进行修饰，通过引入甲基和含氮侧链的形式，改善化合物的体内代谢参数。10 硕士学位论文立题依据和实验设计2．1．2鬼臼毒素衍生物的研究为了对鬼臼毒素进行结构改造，前期将其构效关系进行了归纳。对鬼臼毒素衍生物的构效关系研究[351发现4’．甲氧基，4’．去甲基鬼臼毒素的C．4p位是近年来的主要研究方向，研究发现C．413位能够影响其生物活性【36】。PodophyllotoxinEtoposide然而，鬼臼毒素及其衍生物普遍存在着抗癌谱窄、水溶性差、严重的骨髓抑制及胃肠道反应等副作用。对于D环和E环所做的结构修饰相对较少，同时，对4’．酚羟基进行结构修饰后的构效关系研究极少。因此，根据鬼臼毒素与VBE．1结构的联系，试图将鬼臼毒素C环改造为VBE．1的类似物，期望降低鬼臼毒素的毒性。此外，通过对4’．羟基进行修饰，引入含氮烷基侧链，希望改善化合物的水溶性。2．2目标化合物的设计2．2．1目标化合物设计本课题的目标化合物设计如下：①基于鬼臼毒素和VBE．1结构上的相似性，通过结构改造，使鬼臼毒素类似于VBE类化合物，设计目标化合物A(图2—2)，找到不同的取代基与和活性之间的关系。旷Q洲vR帮o：v洲鼗吣镦＼ 硕士学位论文立题依据和实验设计思路AA环二氧戊环的结构泓i。即呲叭c一＼目标化合物A图2-2目标化合物A的设计②通过对VBE类化合物4’．羟基和6．羟基进行甲基和其他基团的取代，设计目标化合物B(图2．3)，试图找到可以增强体内活性的化合物。思路B化合物体内代谢化合物体内代谢位点／＼目标化合物B0、cH2-(CH2)n-CH2一R改善化合物的体内吸收代谢参数图2．3目标化合物B的设计③对鬼臼毒素衍生物Etoposide的4’位进行修饰，设计目标化合物C(图2．4)，试图改善化合物的水溶性和副作用。思路c＼。舡／OH毒性大对4’为研究较少＼。卑。／⋯⋯O＼cHm删2～R引入含氨烷基侧链增加药物的水溶性，降低毒性图2-4目标化合物C的设计通过以上三类化合物的设计，探索4’位取代，以及4’位取代后碳链长度和取代基团的不同对于活性的影响，以及结构改变与作用机制和活性之间的关系。12 硕士学位论文立题依据和实验设计2．2．2目标化合物的合成路线设计2．2．2．1目标化合物A路线1的设计为了得到目标化合物A，设计了路线1(图2．5)，根据W．J．Genslerc，C．M．Samour等人采用的方法，利用EtOH：H20(1：10)作溶剂，浓硫酸脱水【3卅完成反应步骤i；根据FachuangLu和JohnRalph的报道，利用Mn02选择性氧化3·羟甲基【4们，完成步骤iii。最后z⋯I。一．以"于Compound9的2．醛基，3．羟甲基结构。Compound1图2．5目标化合物A合成路线12．2．2．2目标化合物A路线2的设计iiiiMn。0℃2啄鲫‘O＼为了得到目标化合物A，设计了路线2(图2．6)。根据Andrew等人采用的脱水方法[48】，在H2S04和MeOH作溶剂的条件下，达到糖基水解和内酯水解的双重目的，完成步骤i；根据StevenP．Forsey等人利用稀HCl在THF中对1．羟基一2．羟甲基结构的六元环进行温和脱水[4l】，完成步骤ii；然后利用Mn02进行选择性氧化【421，将C环转化为a，p不饱和醛，完成步骤iii。得到4’羟基的Compound11。南吣仉＼钟OfOHEtopmldeCompound2图2．6目标化合物A合成路线22．2．2．3目标化合物A路线3的设计为了得到目标化合物A，设计了路线3(图2—7)。根据MarinaGordaliza等人对鬼臼毒素的改造过程【43出】，首先对内酯环进行碱性开环，然后将羧基转变为乙酯，得至UCompotmd5；再通过Swem反应完成步骤ii，得至lJCompound6，然后通过醛基的二硫保护，得到Compound7；根据YvesGuminski等人【45】和专利中【46J脱除4’位甲氧基的方法，完成步骤访，得到重要中间体Compound10；利用LAH还原完成步骤iv，vjii，最后在HgO／BF3条件下通过对巯基进行脱保护完成步骤v，vii，分别得至1]Compound8-9和Compound11—13。w提Ⅱl|i；‘-M∞一伯潍№一卅w豢钟疆吣墅黑罐(／＼C-1n型0强 硕士学位论文立题依据和实验设计Compound5Compound6＼HoOBFsEt20O／90％O＼Compound9C矿¨。ClH。H—oOBF3EtaI。<＼。取；喘h＼o／、入O／"O＼CompoundSoHCompound12o＼Compound7v1Deme晰yla鼢45％OHCompound10OHCompoundII图2-7目标化合物A合成路线32．2．2．4目标化合物B合成路线的设计为了得到目标化合物B系列化合物，设计了以下路线(图2。8)。首先对VBE．1进行选择性甲基化，得到Compound14，然后根据KenyaNakata等人的方法【471，在4’位取代不同的溴代侧链，最后接入不同的含氮取代基，得到Compound17．Compound26。Compound14婴取代基为．，lN、，已，o，，p／＼／N、／／“√／N√其中n=o～n，，N√目标化台物B对应化台物tCompound17．26图2．8目标化合物B合成路线】4试蠹嗽瑚∞工＼≮∞∥＼o㈣≮～ 硕士学位论文立题依据和实验设计2．2．2．5目标化合物c合成路线的设计由于Etoposide和VBE-1的酚羟基较为相似，因此选取与类似的方法尝试目标化合物C的合成(阉2．9)。f八C．1inCH2)呼也＼o人少o／一占＼OH2．3活性筛选R的取代基为其中n=O-195％81％r，厂、r甲，N＼，，i√／N√／N√，o目标化合物C对应化合物：Compound29—38图2．9目标化合物C合成路线目标化合物c采用平皿克隆形成法，检测化合物对于入肺癌NCI-H446细胞株的毒性并迸行评价，样品选用DMSO溶解，采用50ng／mL紫杉醇作为阳性对照，DMSO作为阴性对照，计算化合物的细胞生长抑制率(瓜％)，并分析化合物的抑制活性ICso。 硕士学位论文结果与讨论3结果与讨论3．1实验结果3．1．1合成的目标化合物以及对人肺癌NCI．H446细胞的抑制率表2-1合成的目标化合物的结构16 硕士学位论文．竺墨兰堕笙Compound17Compound18Compound19Compound20Compound21Compound22Compound23／O＼O／N．^，OCHO’、OH0．／54．3713．681．029．4527．4817．9627．8l＼／N．^，0————————————————————————————————————————一17o一 硕士学位论文结果与讨论18 硕士学位论文结果与讨论Com舢d32Compo叻d33Compoulld34Com舢d35Compoufld36代乓oo＼．№≮∥T《姗!Oh＼o／、人o／o＼／＼N弋U气≮oo＼n帅≮矿uIiI《姗!On＼o／、入07o＼／、N7＼、～0飞惫s冒H0I《蛾!On＼o／N八0／．O、一，n、佩气nH0≮矿心，Y《嫩10h＼oⅣ0／r，O、^，^、／气≤oo＼nHo≮矿_／Y《姗OnAr0／厂、o、一．心√38．8764．4840．0319 硕士学位论文结果与讨论3．2合成路线讨论3．2．1鬼臼毒素改造的VBE衍生物Compound1的探索在路线1构建的过程中脱水反应是整个合成路线的重要反应，因此选取Compoundl作为反应路线的关键中间体进行探索。反应脱水的条件如下，100mg鬼臼毒素原料中加入10mlH20，lmlEtOH，0．6mlH2S04，100"C下回流lgh，得到较纯净的蓝色荧光点，产率80％。0H图3．1鬼臼毒素脱水反应图示化合物通过1H-NMR确认结构，在1H-NMR中，根据高场H的化学位移，可以确认四个芳基氢的化学位移出现在6．373(s，2H，At-H)，6．635(s，1H，At-H)，6．726(s，1H，Ar-H)，但是没有出现C=C双键氢的化学位移，l位氢在4．813处的化学位移为两个氢，因此表明脱水产物为8，8’位脱水产物Compound1一l(图3．2)，而非7．8位脱水的产物Compound1。对产物的分析显示反应失败(图3．1)。20、pQ旷∞尼删～，耋|星-鼋i邮翟 结果与讨论展开比例：CHCl3=MeOH10：0．5Compound1-1图3-2鬼臼毒素脱水反应实际产物根据其它类似反应的机理，中间体很可能发生重排(图3—3)，主要生成非目标产物，因此进行其他路线的摸索。《姗。一。A二6、CompoundI-I图3-3脱水反应重排可能机理3．2．2鬼臼毒素改造的VBE衍生物路线2的探索3．2．2．1Compound2的合成本反应以Etoposide作为原料，MeOH作为溶剂，在2MH2S04的条件下，D环内酯会发生酯交换，1位糖基同时水解，得到Compound2(图3-4)，产率为86％。展开荆CH2C12：M*OH20：1Compound2图3-4Compound2合成及TLC图帮一蛳管帮6、／bo＼＼o一掣帮 硕士学位论文结果与讨论从实验结果可知，采用加温的形式，对反应的产率无明显的影响。在保持反应时间不变的情况下，温度过高会使副产物增多，推测原因可能是由于H2S04的脱水作用使分子发生重排，而且4’位羟基的存在也会使产物存在一定程度的氧化。3．2．2．2Compound2氧化条件摸索在路线2中，涉及到8．醛基，8’．羟甲基化合物的合成，设计了两条路线(图3-5)，试图得到目标化合物。方法一：首先对Compound21．位脱水，然后利用Mn02选择性氧化，合成目标化合物Compound1l。方法二：利用Swem氧化，直接对Compound2进行氧化，试图得到化合物Compound1l。0HCompound2∞瓯、＼。雕OHCompound3Mn02JTHF嘶＼。舡≥图3-5Compound2氧化反应路线图方法一中，20mg原料滴加5滴浓盐酸，40℃反应1．5天，产率为53％。得到的产物过柱纯化后进行熔点测试，m．P．151．152。C(文献值153—154℃)，因此直接进行下一步反应。Mn02选择性氧化的反应中发现，对于含有酚羟基的化合物不能通过Mn02选择性氧化构建醛基侧链，Compound2在反应中通过Mn02选择性氧化完全得不到预期产物。TLC显示，并没有预期的明显产物点出现。3．2．2．3Compound2脱水产物合成中出现的问题对比反应的路线和推测可能的原因可以知道，这可能是因为Compound2脱水产物含有游离的酚羟基，使Mn02与酚羟基反应，生成了大量副产物。因此，尝试通过保护酚羟基然后脱保护的方式进行目标化合物A的合成。尝试的保护基有：OTMS保护：使用TMSCI在吡啶的催化下和Compound2脱水产物进行反应，但是反应极难进行，尝试通过提高温度，增加碱性，更换保护基的形式试图完成反应。温度提高至90℃，更换保护基为TMSI，TBDMSCI，利用KOH做碱，反应均不能进行，可能是由于位阻原因导致反应失败。②苄基 硕士学位论文结果与讨论保护：采用溴化苄与Compound2脱水产物进行反应，反应检测到两个产物点，可能溴化苄与4’位羟基反应的同时，也与C环上的醇羟基反应，导致副产物的出现，难以分离。方法二中，采取Swem氧化直接氧化Compound2，但是在实验的过程中，未得到预期产物。而在预实验中，采用Compound5作为原料进行Swern氧化(图3．6)，成功的得到了Compound6，但是Compound2在反应中，产生了大量的杂质点(图3．7)，选取了最可能的点做结构确认，结果显示并非期望得到的产物，可能是酚羟基对Swem氧化反应的影响。0＼／Oc·～c：Ms。CH2C12．55℃O＼Compound5(00W．，．A．，盯CHO。v＼。舡0图3-6Compound5的Swem反应鉴于此步反应同样出现了保护基不能接上去的情况，而且Swem氧化不能按照预想的情况进行，因此选取别的路线进行目标化合物A的合成。3．2．3鬼臼毒素改造的VBE衍生物路线3的探索3．2．3．1Copmound4的合成Podoph)’IloloxinO＼Compound4图3-7Copmound4的合成反压图在制备Copmound4的过程中(图3—7)，采用5％的KOH和MeOH溶液，并且控制反应温度在40。C，反应4h，TLC监测并无原料点存在，考虑到所得产物在MeOH中以盐的形式析出，因此在反应中加入少量的水(1mlH20和20mlMeOH)，反应进行得更迅速，仅需1．5h便可进行完全。加入原料时反应体系有大量的白色固体析出，随着反应的逐渐进行，白色固体溶解，最后反应结束时，反应体系呈淡黄色澄清透明体系。反应后处理时应注意pH的调节，pH调节过程中会出现两个问题：①pH调节至临界点(5左右)时，体系会变为琼胶状的透明块状，处理较为麻烦，一 硕士学位论文结果与讨论般采用超声处理。②pH调解时晟低限度为4，pH偏低会造成开环产物复环。3．2．3．2Compound6的合成在反应过程中，首先将DMSO的无水CH2C12溶液逐滴加入草酰氯的无水CH2C12溶液中，用冷阱保持温度在．55。C以下，温度的升高会导致副产物的增多，反应过程应保持无水无氧。3．2．3．3Compound10的合成和分离＼o／CompoAtCt3CH2C12Me3SiC!KICH2C12Me3Si-I＼。取。，OHCompound10图3-8Compound7的脱甲基化反应考虑到化合物的脱甲基反应基本是在酸性或强酸性环境中进行，因此选取中间体Compound7作为脱甲基反应的原料(图3．8)，在反应过程中醛基被保护，可以最大限度的避免副产物的产生。脱甲基试剂为CF3COOH／MeS03H：AICl3：既r；Me3Si-I；KI／Me3Si．CI，下面按照脱甲基试剂的种类分类讨论。3．2．3-3．1A1C13体系在使用A1C13作为脱甲基试剂的过程中，根据A1C13脱甲基的机理，影响反应选择性的原因主要有两个：①电子云密度，电子云密度大，则更容易和AICl，结合成为配合物。②空间位阻，空间位阻大的地方，脱甲基会更加容易进行。综合考虑到两方面的因素，4’位甲氧基处于相邻两个甲氧基的邻位，其电子云密度较大，而且处在中间的位置使之具有较大的空间位阻，因此选取AICl3作为脱甲基试剂。但是，在实际反应过程中，通过三氯化铁／铁氰化钾显色和Rf值的差别，发现脱1个甲基的产物和脱2。3个甲基的产物同时出现，主要产物为脱除一个甲基的产物。因此分离主要产物点，HPLC分析，60％MeOH：I-t20等度洗脱，图谱上显示，保留时间15min为两个很难分开的主峰。换取其它梯度，依然不能分离，因此推测产物可能是脱4’位甲基和脱3’位甲基的混合物。通过改变AICl3的投料比(1eq．20eq)，期望获得满意的反应条件。但是发现A1C13的投料比对反应产物的比例并无明显的影响，三种脱甲基产物依然同时生成，且反应很不完全。可以得出结论，A1C13在此步反应中的选择性较差。24pjcia 硕士学位论文结果与讨论3．2．3．3．2Me3Si．I和Me3Si-C／Ⅺ体系本反应试图利用MeI的键能强于MeO的键能，容易离去的性质，对4’位甲基选作行脱去。通过反应过程监测，反应中主要出现两个产物点(Rf0．15和Rf0．35)，在365nm下有强烈的黄色荧光出现，但是通过三氯化铁／铁氰化钾的显色，并无酚羟基的特征蓝色。使用Me，Si．C／KI体系，产物出现类似的情况因此判断此种方法不适用于甲基的脱除，因此选取其他途径探索4’去甲基的方法。3．2．3-3．3三氟乙酸和甲磺酸体系根据YvesGuminski，MartialGrousseaud等人对脱甲基反应的研究，反应中可能形成了一个碳正离子的过渡态，此过渡态使试剂在进攻4’位甲氧基时更加稳定，因此反应趋向于具有一定的化学选择性。实验中，100mgCompound7加三氟乙酸2mI溶解，向体系中加入100mg(4．83eq)D．L甲硫氨酸和O．15mL(4．83eq)甲磺酸，40。C反应45min，得到粗产物，经过上柱分离后，得到的产物进行结构确认，结果发现是两者的混合物(图3-9)。二者的结构极其相似，无法分离。10。Compound7Compound103’去甲基产物图3-9脱甲基反应实际产物图示因此调整脱甲基试剂比例(表2-2)，试图得到产率和纯度均较高的Compound表2-2不同试剂比例和条件下去甲基反应的产率 硕士学位论文结果与讨论经过上述一系列反应的研究可知，CF3COOH：MeS03H：Methionine的体系产率最高，而且相对于其他路易斯酸体系，原料：CF3COOH：MeS03H：Methionine的比例为leq：6exl：45eq：5eq时反应的产率最高。产物点在三氯化铁／铁氰化钾下显色，呈现明显的蓝色点(图3．10)，证明甲基已经被脱除，点板发现产物点主要有两个，Rf0．45的点为Compound10，另一个在原点，推测后者为脱除2．3个甲氧基的产物。展开剂比例CH2012．"PE：EtOAc5：3：0．5＼。舡，OHCompound10图3-10Compound10脱甲基反应TLC情况以及产物图示主要产物的1H-NMR和”C-NMR如图3．11所示，通过Etoposide对照品图谱的数据，我们可以看到，3，5二甲氧基的化学位移出现在3．782处，单峰，因此可以判断，3，5二甲氧基的化学位移极其相近，在1H-NMR上基本无差异，因此，如果只是4’位甲基脱除，产物的1H-NMR所显示的甲氧基应该对应为单峰，积分为6H。通过1H-NMR研究发现，实际情况和推测的结果吻合(图谱中用O．CH3的H积分作为标定，显示为3H，但是实际为6H)，根据13C-NMR可以发现，60．172处的OCH3碳的化学位移消失，而61．092处两个OCH3碳的峰依然存在，因此断定是4’位甲基被脱除。26 硕士学位论文结果与讨论≈!：～～“∥：⋯。“Z‘#．嚣’≮嚣∥⋯；，X：等⋯嚣i’；94。善萎未誊罄囊；嚣；餐i“强i￡h譬霉鼯拿菪誉鞠，～!《i{|；l疆菇。茎善．tx笔O晷；ran量蕊美p产^西∞鸯冀瓣鲻一j．。。‘．．．．．‰．。．．。．．。．。．．．1．。．．，一●t●●“●_图3-111H．NMR和13C-NMR谱图数据通过上述途径，我们找到了一种较好的脱除4’位甲氧基的方法。反应中MeS03H的用量会对反应产生比较大的影响，但是通过控制反应条件，可以对4’位甲氧基选择性脱除。3．2．4VBE．14，位修饰的衍生物中间体Compound14的合成OHVBE．14·．单甲基化产物Compound14图3-12不同甲基化试剂反应图示CHO，／OH0／O＼VBE．6|I”西∞u¨12∞．3∞黯≮N∞133mm％驾470|Iuu．7西西．I参∞oN．I．Iq茜心口一M—l—D2一饕l妣堕删一％一羔孚 硕士学位论文结果与讨论在反应中，采用Me2S04和MeI两种甲基化试剂(图3．12)，并讨论不同的甲基化试剂对反应的影响。在反应中发现，二者的选择性不同，甲基化过程也存在着较为显著的差别。3．2．4．1MeI甲基化反应在反应的过程中，尝试摸索了不同比例MeI加入情况对于反应产物的影响(表2．3)，结果如下：表2．3不同反应时间和反应物料比对产物的影响2345670℃15．3％(混合物)30．6％22．7％(混合物)45．9％70℃10．3％(混合物)77．2％700C4．9％(混合物)86．5％70℃92．O％70℃O％93．0％通过反应时间和反应物料比的对比可知，随着反应时间的进行，产物会逐步趋向于生成双甲基化产物，当投料比大于1：4时，反应生成比较完全的双甲基化产物。在反应过程中，双甲基化产物和单甲基化产物同时生成，而且单甲基化产物为混合物(4’位甲基化和6位甲基化)。反应的选择性较弱。3．2．4．2Me2S04甲基化反应在反应中，控制Me2S04的投料比，可以获得较为纯净的6．羟基单甲基化产物(表2_4)。过量的Me2S04加入会导致4’羟基，6羟基双甲基产物的出现 硕士学位论文结果与讨论表2-4不同反应时间和反应物料比对产物的影响产物比例方法原料：Me2s04比例时间温度——I===：：==五_————了F1：0．5eXl2h70。C47．6％(纯度91．2％)O％2l：leq0．5h70。C35．8％(纯度93．1％)0％31：leqlh70"C67．9％(纯度93．9％)3．2％4l：leq1．5h70"C80．2％(纯度93．9％)5．5％51：leq2h70。C89．7％(纯度94．3％)6．0％61：2eq0．5h70。C79．8％(纯度92．O％)14·2％7l：2eqlh70。C17．3％(纯度90·l％)72．6％_—I_--●__-—___—--_●_________l__--l________-__一与MeI甲基化的反应过程不同，当加入leqMe2S04后，6羟基单甲基化产物点的浓度随着时间的延长逐渐升高。当Mc2S04的用量逐渐增高，反应最终会生成双甲基化产物，Me2S04过量1．5eq以上时，单甲基化产物和双甲基化产物也会同时生成，但是仍然以6．羟基单甲基化产物为主(图3·13)。展开比例CH2Ch,MeOH40：1。。芝∞嚣OHCompound14图3-13Me2S04甲基化反应过程和产物选择Me2S04作为甲基化试剂，可以避免由于无差异甲基化造成的化学异构，而导致难以分离的情况，经过UV监测其吸光度，配制10u鲈IlL样品的MeOH 硕士学位论文结果与讨论溶液和10Il幽nL样品5％KOHMeOH溶液，如果甲基化位点为6位时，由于6．羟基被甲基化，在碱性溶液中不能形成负离子，导致长共轭结构在254nm，355nm的吸收峰不会发生大的改变。如果甲基化位点为4’位，长共轭结构在254nm，355nm的吸收峰会造成明显的红移现象。实际检测中发现，碱性溶液中与中性溶液对比并无明显的红移现象出现，仅在4’羟基的吸收峰处发生了红移(图3．14)，因此断定此产物主要为6位甲基化产物的Compound14。图3-14Me2s04甲基化产物的UV图谱Me2S04甲基化反应为选择性单甲基化路线提供了可行性，同时其较高的产率也为后面的中间体积累提供了可行性。《硬坛哚＼肆，＼。舡≥O＼OHCompound9Compound11Compound13Compound14图3．15目标化合物A结构目标化合物系列A的活性如表2．5。30哥洲卢Ⅵ掰洲oVo 硕士学位论文结果与讨论表2-5系列A对人肺癌NCI．H446细胞株抑制IC50系列A活性如肺癌NCI．H446ICs0(ug／mL)Compound9Compound11Compound13Compound1421．5716．5510．8210．88目标化合物系列B的结构如图3．16：o、cH2-(cH2)n—CH2～Rn=0n=XCompound17,22Compound18，23Compound19，24Compound20,25Compound21，26图3．16目标化合物B结构目标化合物系列B的活性如表2-6。袁2-6系列B对人肺癌NCI-H446细胞株抑制IC503lRkLDop， 硕士学位论文结果与讨论Comp。und26、，、o14．95目标化合物系列C的结构如图3．17：＼／1"4＼／，N、／厂、，N√，oCH2)n-CH2、R，N√0，Compound29,34Compound30·35Compound31，36Compound32，3"／Compound33，38图3．17目标化合物C结构目标化合物系列C的活性如表2．7。表2．7系列C对人肺癌NCI．H446细胞株抑制Ic503．3．2不同系列化合物的构效关系目标化合物系列A和系列B的活性列表如图3一18，目标化合物系列C活性列表如图3．19。32 结果与讨论lC＆lag’mL60—·u-一一r50一～一40——------------一30o一一I一目标化合物系列A&B一：图3．18目标化合物系列A和系列B活性图3-19目标化合物系列C活性根据比较可以得知：①基于鬼臼毒素为基础改造的三个化合物Compound9、11、13，与VBE-1对照药物相比，以13的活性较好，为10．82llg／mL，表现出较好的抑制活性。而4’甲氧基，2．醛基、3．羟甲基及2．醛基，3．乙酯的化合物活性与VBE．1相当。②Compound13、14活性相当，与VBE．1对照药物相比活性较高，说明6位取代后活性明显增强，化合物的稳定性增加。Compound13与Compound9相比活性较高，表明4’为羟基时活性高于4’为甲氧基的化合物。③基于VBE为母核的化合物Compound17．26中，2碳吡咯取代的Compound19的活性最好，达到1．02ug／mL其次为3碳吡咯取代的Compound24和2碳哌啶取代的Compound20，分别为8．62|lg／mL和9．45lIg／mL：Compound17，18，21，22，23活性较弱。总体而言，无论碳链的长短，含氮取代基的活性顺序为吡咯>哌啶>吗啡啉。④基于Etoposide为母核的化合物Compound29．38，二乙胺取代的一}|囊孔鼗量囊羹蕾量船一邋羹疆囊孜一鏊量鬟—曩羹囊a■■■■■■■■■∞～～■■■■■■_∞一～||一■■■■■瓠i二二二∞二二二二一弘■■■■■I∞一一一■|l醒_|一||一一■I∞j|；一一～一～一l■l始班一～～～{|～■■■■美已．驰∞阳∞弱∞Ⅺ如伯。 硕士学位论文结果与讨论Compound35的活性最好，达到1．86ug／mLgCompound29，30，31，32，36活性较弱；Compound33，38基本无活性。其中含氮取代基的活性顺序为吡咯>哌啶>吗啡啉。3．3．4三类母核问化合物活性比较三种不同母核的化合物中，以VBE系列Compound18活性最好，其次为依托泊苷系列Compound35，再次为鬼臼毒素系列化合物Compoundl1、13，且VBE系列衍生物较相应依托泊苷系列活性要强。3．3．4构效关系小结因此，构效关系初步小结如下：①Etoposide衍生物中，4’位羟基的化合物活性普遍高于4’位取代的化合物。可见4’位羟基可能是重要的活性官能团，通过合适的修饰可以得到活性较好的化合物。②鬼臼毒素为原料改造的VBE衍生物中，A环二氧戊烷的存在可以使活性增强：2．醛基，3一羟甲基的结构对活性影响重要；4’位羟基对于化合物的活性有直接的影响，通过合适的修饰可以得到活性较好的化合物。③以VBE为母核修饰的衍生物中，4’位对活性有重要影响，通过适当的修饰可以得到活性更好的化合物。34 硕士学位论文实验部分4实验部分4．1化学实验部分(7研l一羟基-7，7’二氢-9’·羰基·9一氧甲基一a—apopicropodophyllol(Copmound1)掣《姗南。√≮令√6＼ConcentrateD2S04EtOH100℃Compound1250ml三口烧瓶中加入90m1H20以及10mlEtOH，将原料1。00(2．41×10。3m01)缓缓倒入体系中，均匀搅拌，待原料完全溶解后，加热至101℃回流。5min后加入H2S0410瑚，反应18h过夜。反应结束后冷却，过滤不溶物，加入50m1蒸馏水，用CH2C12萃取水层(40ml×3次)，萃取完毕后收集CH2C12层，用等体积水洗涤至中性，收集CH2Ch层，用无水Na2S04干燥1h，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound1粗产物O．85g。纯化：O．859粗品上259200．300目硅胶柱进行分离，洗脱剂为二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯(二氯甲烷：石油醚：乙酸乙酯=5：3：1)，得到Compound1纯品0．689，不纯品0．129，白色固体，产率80％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)53．81(dd，1H，西=4．0Hz，Jz=20．1Hz，CH2·O)，3．86(dd，1H，山=4．OHz，沪19．1Hz，CH2一O)，3．78(s，6H，O—CH3)，3．79(s，3H，O-CH3)，4．81(d，2H，J=4．8Hz，Cl—H)，4．93(d，IH，3"--8．0Hz，C—H)，5．96(dd，2H，西=3．2Hz，d2=1．2Hz，O-CH2-O)，6．37(S，2H，Ar-H)，6．64(s，1H，Ar-H)，6．73(s，1H，hr-U)，13C-NMR(100MHz，CDCl3)629．2，42．7，56．1，60．8，71．0，101．3，105．4，107．7，109．5，123．7，128．1，129．6，136．9，138．3，147．0，147．2，153．2，157．3，172．2MS(m／z)：【M】+396．12(豫)7一羟基一8一羟甲基一4‘一羟基一9’一羰基一9’一甲氧基-a—apopicropodophyllol(Compound2)35 硕士学位论文实验部分h＼o／4、／＼o／，OHEtoposide2MH2SO·彳H叩《蚴～h＼oⅣo／OHCompound2将Etoposide700．1mg(1．19×100m01)置于100ml三口烧瓶中，加入MeOH10ml，升温至40℃，搅拌5rain后，迅速加入5mol／LH2S0412ml，反应12h，反应用TLC监测。原料点消失，停止反应，低温旋干MeOH，加入30mlI-t20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(30ml×3)，然后用H20洗涤EtOAc层，至水层pH7，萃取完毕后EtOAc用无水MgS04干燥30rain，减压旋蒸除去溶剂，得到粗品407mg。纯化：粗品上200．300目硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound2纯品385．3mg，产率75％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)62．82(dd，lH，山=4．8Hz，J2=18．4Hz，CH2-O)，2．90(m，1H，J=6．8Hz，C2-H)，3．42(s，3H，O—CH3)，3．49(d，1H，J=2．4Hz，O—CH3)，3．48(d，1H，J=4．8Hz，Ct—H)，3．77(s，6H，O·CH3)，4．12(d，1H，J=4．8Hz，C-H)，4．59(dd，IH，力=4．OHz，J2=19．2Hz，CH2一O)，4．60(s，1H，C—H)，5．97(dd，2H，乃--1．0Hz，J2=3．2Hz，O-CH2．O)，6．38(s，2H，雠H)，6．51(s，IH，Ar-H)，7．05(s，1H，A卜H)，¨C_NMR(100MHz，CDCl3)fi36．8，43．2，44．6，54．6，55．2，56．1，56．2，71．1，79．4，101．5，106．6，108．5，109．7，130．8，131．2，132．6，134．9，147．1，147．2，147．4，174．7MS(m／z)：【M．H20]+414．12(瑚7．羟基．8．羟甲基一9’．羧基-Ⅱ一apopicropodophyllol(Copmound4)《姗两。早／≈^07O．x苎!兰!竺竺!b．2“HCIPodophyllotoxia将鬼臼毒素4．029(9。70×10—3m01)Compound4置于100ml圆底烧瓶中，加入20ml5％KOH／MeOH溶液，40℃反应5h。停止反应，旋蒸除去溶剂，加入H2040ml，10％HCI调节pH至4．0，用EtOAc分三次萃取水层(40ml×3次)。收集EtOAc层，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound4白色固体3，88g，产物直接进行下一步反应。36 硕士学位论文实验部分(7固7-羟基-8·羟甲基-9’．羰基-9’一乙氧基-Ⅱ-apopicropodophyllol(Compound5)Compound4Compound5将39Compound4(6．94X10-3m01)和K2C031．19((11．57×10。m01))溶于干燥的的DMF8“，室温搅拌30分钟，加入EtBr2．07ml(13．88×10’3m01)，室温搅拌2h。停止反应，向体系中加入40mlH20，用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，用饱和NaCl40ml洗涤两次，最后用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得Compound5粗品4．219。纯化：粗品4．21g上259200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound5白色固体4．02g，产率90．74％1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．15(t，3H，．／--7．2Hz，CH3)，2．47(m，1H，CI-12一H)，3．35(dd，1H，山=3．6Hz，J产4．8Hz，C—H)，3．63(dd，1H，山23．6Hz，J2=7．2Hz，O．CH2)，3．76(m，1H，O-CUE)，3．82(s，3H，O-CH3)，3．78(s，6H，O-CH3)，4．06(dd，2H，山=3．6Hz，护7．2Hz，O．CH2)，4．26(d，1H，J=-8Hz，Ct—H)，4．85(d，1H，J=4．8Hz，C．H)，5．09(s，2H，O—CH2一O)，6．36(s，3H，A卜H)，6．85(s，1H，A卜均，13C-NMR(100MHz，CDCl3)643．5，45．3，46．8，56．0，60．8，62．，69．4，77．0，101．0，106．0，108．3，109．1，109．2，129．8，130．7，136．4，139．9，146．6，147．5，152．9，174．3MS(m／z)：[M-H20]+442．29‘．羰基．9’一乙氧基一Ⅱ一apopicropodophyllol(Compound6)Compound5Compound6将草酰氯1．55ml，溶于CH2C125ml，加入lOOml三口瓶中，通入N2保护，一55℃预冷并搅拌，待温度恒定。5min后将DMS02．31ml(12．54×10一m01)，的CH2C12溶液逐滴加入草酰氯的CH2C12溶液中，搅拌5min，N2保护。5min后向体系中缓缓加入Compound52．59(5．43×10。3m01)的CH2C12溶液，反应30min。然后逐滴加入Et3Y7．57IIll，缓缓升至室温(至少1h以上)。1．5h后反应结束，37 硕士学位论文实验部分用H2030111l淬灭反应，并收集CH2C12层，次)。合并CH2C12层，用无水NazS04干燥，6粗产物2．15g。水层继续用CH2C12萃取(20ml×2减压旋蒸除去溶剂，得到Compound纯化：粗品2．15g上259200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound6黄色固体2．04g，产率85．3％1H．NMR(400MHz，CDCl3)61．150，3H，,／--7．2Hz，CH3)，3．74(s，6H，O—CH3)，3．79(s，3H，O．CH3)，3．98(d，1H，J=4．0Hz，C-H1，4．08(m，2H，O—CH2)，4．61(d，1H，J----4．0Hz，C-H)，6．01(d，1H，J=7．2Hz，A卜H)，6．03(d，1H，J=7．2Hz，A卜H)，6．22(s，2H，O-CHE—O)，6．66(s，1H，Ar-H)，6．90(s，3H，At-H)，7．36(s，1H，C=C—H)，9．614(s，1H，CliO)，¨C—NMR(100MHz，CDCl3)fi44．6，46．3，55．9，56．O，60．7，61．3，76．6，77．0，77．3，101．7，104．6，108．8，109．9，llO．0，125．0，133．2，133．7，136．8，137．2，145．5，147．2，150．3，153．0，171．6，191．3MS(m／z)：[M】+440．2，[M+1]+441．29’．羰基-9’-乙氧基．Q-apopicropodophylloI．硫缩醛(Compound7)乞。儿一UvCH。O√：II取，0＼Compound6HS～sHCISiMe3CH2C1200／0＼Compound7将Compound62．00g(4．54×10dt001)置于100ml三口烧瓶中，加入lOmlCH2C12溶解，通N2保护，5rain后加入1，2乙二硫醇2．29lnl(6eq)，CISiMe34．03ml(31．78×10。3m01)。室温反应20h停止反应。向体系中加入25mi稀释CH2C12反应液。用H20洗涤CH2C12层(30ml×3次)，用无水Na2S04干燥CH2c12层，旋蒸除去溶剂，得到Compound7粗品纯化：粗品2．05g上259200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=200：1)，得到Compound7淡黄色固体1。90g，产率81．1％1H蝴(400MHz，CDCl3)61．18(t，3H，3"--7．2Hz，CH3)，2．98(m，1H，S—CH)，3．12(m，2H，S-CH)，3．21(m，1H，S-CH)，3．60(d，1H，J--2．4Hz，C—H)，3．76(s，6H，O—CH3)，3．78(s，3H，O—CH3)，4．10(m，2H，O—CH2)，4．38(d，1H，J--2．4Hz，C—H)，5．35(s,1H，S-CH-S)，5．29(s，1H，At-H)，5．93(s，1H，At-H)，6．28(s，2H，0一CH2-O)，6．58(s，1H，Ar-H)，6．70(s，1H，At-H)，6．73(s，1H，C=C—H)，13C-NMR(100MHz，CDCl3)638．3，39．2，47．5，49．1，56．0，57．0，60．8，61．1，76．6，77．O，77．3，101．O，104．8，107．3，】09．3，126．8，】27．2，129．O，】30．5， 硕士学位论文实验部分136．7，138．1，146．6，147．3，152．8，172．4MS(m／z)：[MI+516．29’·羰基一9’一去氧一Q—apopicropodophyllol一硫缩醛(Compound8)L弧IHkTHFr^}弋《迂酡l鳓9丫o／O＼Compouud7Compound3将Compound71．00g(1．94×10‘3m01)置于100ml三VI烧瓶中，加入10IIll干燥的THF溶解，通N2保护，5min后加入Li灿H4183．8mg(4．85×10一m01)，反应1．5h。停止反应，按照13的比例，依次加入2．6mlH20，2．6ml10％NaOH，7．8m1H20，这是有大量的偏铝酸盐析出，过滤，滤液先用15ml水稀释，然后用EtOAc萃取(20ml×3次)，合并EtOAc层，用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound8白色固体895．7mg，产物直接用于下一步反应。9’一羰基一9’一去氧一Q-apopicropodophy]lol(Compound9)千弋j?飞、飞r{、o—足办／、／OH∥O＼Compound8H．《嬲gOBFEt3zO07＼∥＼／’’／”。THF／H20¨。Q／6、将HgO1．00g，BFffEt206．25ml加入10mlTHF和H20的混合物(85：15)中，5min后加入Compound81．00g(2．11×10。3m01)，通入N2保护，室温反应3h。停止反应，向体系中加入H2030ml，搅拌，过滤，并用少量EtOAc洗涤固体，所得滤液用EtOAc萃取(30ml×3次)，收集EtOAc层，用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound9粗产物839．5mg。纯化：粗品700，5mg上259200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=200：1)，得到Compound9淡黄色固体620．1mg，产率73．9％。1H-NMR(400MHz，CDCls)83．25(q，1H，J--5．0Hz，C-H)，3．41(q，2H，J=8．1Hz，O—CH2)，3．65(q，1H，J=8．1Hz，O—CH2)，3．73(s，6H，O-CH3)，3．77(s，3H，O—CH3)，4．30(s，1H，C-H)，6．03(s，2H，O-CH2一O)，6．18(s，2H，Ar-H)，6．71(s，1H，Ar-H)，6．88(s，1H，Ar-H)，7．29(s，1H，C=C—H)，9．56(s，1H，CHO)13C．NMR(100MHz，CDCl3)842．4，44．8，56．0，56．0，60．7，63．3，76．6，77．0，77．3，101．7，104．4，108．6，108．7，110．8，110．9，125．0，134．0，】35．5，l39．2，39q 硕士学位论文实验部分146．5，147．2，150．4，153．0，192．8MS(m／z)：[M】+398．I4’羟基一9’一羰基-9’-乙氧基一a—apopicropodophyllol一硫缩醛(Compound10)}弋}1《螺燃喇《姊氏。竺竺竺竺一Aoo／、／ko／a。嘶1e=H201：1o／≮／＼o／6、6HCompound7Compound10将Compound7100．0mg(1．93×104m01)，D．L．methionine216mg(9．65×10‰01)置于100ml三口烧瓶中，加入0．15mltrifluoroaceticacid溶解(1．16×10-3m01)，通入N2保护。加入methanesulfonicacid0．81ml(8．68×10弓m01)，反应升温至40℃，反应45min。反应结束后，向体系中加入丙酮：水l：l混合物30ml，搅拌，缓缓加入K2C0380mg，调节pH6．5，然后用EtOAc萃取(30mlx3次)，收集EtOAc层，并用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，Compound10粗产物76mg。纯化：粗产物76mg上129100-20目硅胶柱，洗脱剂体系为H20饱和的二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯(二氯甲烷：石油醚：乙酸乙酯=5：3：1)，得到Compound10浅黄色固体45mg，产率43．5％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．20(t，3H，J=4．0Hz，CH3)，3．01(q，1H，J=4．1Hz，S—CH2)，3．12(q，2H，J=4．0Hz，S-CH2)，3．20(q，2H，J=4．1Hz，S—CI-12)，3．59(s，1H，,／=-5．0Hz，C-H)，3．77(q，1H，d=4．1Hz，O—CH2)，3．79(s，6H，O·CH3)，4．10(q，1H，J=4．1Hz，O—CH2)，4．18(s，1H，C—H)，5．35(s，1H，S-CH-S)，5．92(d，2H，O-CH2—0)，6．28(s，2H，Ar-H)，6．57(s，1H，C=C—IO，6．69(s，1H，Ar-H)，6．72(s，1H，Ar-H)，”C-NMR(100MHz，CDCl3)814．0，29．6，38．4，39．2，47．5，49．2，56．3，57．9，61．094，101．0，104．，6，107．2，109．3，126．8，127．3，129．3，130．4，133．，133．7，146．6，147．3，172．5MS(m／z)：[M】+502．64j羟基-9’一羰基一9’一乙氧基一a—apopicropodophyllol(Compound11)h。o／飞十八07HgOBFaTHFr0HoHCompound10Compound1将H9040mg置于100111l三口烧瓶中，加入2mlTHF和H20的混合物(85：15)， 硕士学位论文实验部分迅速加入BF3／Et200．2ml，待体系变为淡黄色时逐滴加入Compound1040mg(7．95X10。5m01)的THF和H20的混合物(85：15)2ml，N2保护，室温反应3h。停止反应，向体系中加入H2025ml，然后用EtOAc萃取(25ml×3次)，收集EtOAc层，并用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物34mg。纯化：粗产物34mg上109200—300目硅胶柱，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯(石油醚：乙酸乙酯=3：1)，得到Compound11黄色固体26mg，产率76％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．14(t，3H，J=5．6Hz，CH3)，3．77(s，6H，O·CH3)，3．96(d，1H，J=3．6Hz，C．H)，4．07(dd，2H，山=3．2Hz，J2=8．8Hz，O—CH2)，4．57(d，lH，户3．6Hz，C．H】，5．41(s，1H，OH)，6．02(dd，2H，J／=1．0Hz，J2=5．6Hz，O—CH2．O)，6．23(s，2H，As-H)，6．88(s，1H，As-H)，6．90(s，1H，Ar-H)，7．332(s，IH，C=C．H1，9．594(s，1H，CHO)，¨C．NMR(100MHz，CDCl3)645．0，46．3，56．3，61．2，101．7，104．6，108．8，109．9，125．1，132．6，133．4，133．9，134．1，145．4，147．0，147．2，150．3，171．7，191．1MS(m／z)：【Mr426．24’羟基一9’一羰基．9’．去氧．Q．apopicropodophyllol-硫缩醛(Compound12)早弋《烈√。0，詈。OH0／。0HUHCompound10Compound12将L认1H430mg(7．95×10‘4m01)置于100ml三ISl烧瓶中，加入5ml干燥THF，待气泡不再产生后加入Compound1080mg(1．59×10。4m01)，反应1．5h，反应结束后用少量H20淬灭反应，按照1：13的比例，依次加入0．4mlH20，0．4ml10％NaOH，1．2mlH20，这是有大量的偏铝酸盐析出，过滤，滤液先用15ml水稀释，然后用60mlEtOAc分三次萃取，合并EtOAc层，并用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物73mg。纯化：粗产物73mg上109200．300目硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=70：1)，得到Compound12黄色固体66mg，产率90％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)82．80(m，1H，J=-6．5Hz，S-CH2)，3．12(m，1H，乒4．0Hz，O—CH2)，3．21(dd，1H，山=1．2Hz，J2=6．5Hz，S-CH2)，3．44(q，2H，J=6．5Hz，S-CH2)，3．77(q，1H，J=4．1Hz，O-CH3)，3．81(s，1H，C—H)，3．86(q，1H，J=4．1Hz，O—CH2)，4．19(s，1H，C-H)，5．22(s，1H，S-CH-S)，5．92(d，2H，O—CH2一O)，6．24(s，2H，AS-H)，6．59(s，1H，C=C-H)，6．61(s，1H，AS-H)，6．59(s，1H，Ar．H)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)838．7，39．3，45．7，47．2，56-3，57．9，64．1， 硕士学位论文实验部分101．0，104．8，107．0，110．1，126．5，126．9，129．8，133．3，133．4，134．8，146．5，146．7，147．4MS(m／z)：【M】+460．14’羟基一9’一羰基一9’一去氧一(I—apopicropodophyllol(Compound13)《耐≥《∞：『HoOH．．H．．．g．．O．．．．．B，．F．．3．．．．E．．t．2—0．0／THFf·t·Compound12Compound13将HgO30mg置于100ml三口烧瓶中，加入2mlTHF和I-120的混合物(85：15)，迅速加入BF3／EhO0．15ml，待体系变为淡黄色时逐滴加入Compound1230mg(6．51x10’5m01)THF和H20的混合物(85：15)2ml，N2保护，室温反应3h。停止反应，向体系中加入H2025ml，然后用EtOAc萃取(25ml×3次)，收集EtOAc层，并用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound13粗产物25mg。纯化：粗产物25mg上109200．300目硅胶柱，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯(石油醚：乙酸乙酯=2：1)，得到Compound13黄色粉末20mg，产率80％。1H．NMR(400MHz，CDCl3)63．26(m，1H，J=-5．0Hz，C．H)，3．42(q，2H，J=4．1Hz，O—CH2)，3．64(q，1H，d--4．1Hz，O—CH2)，3．75(s，6H，O—CH3)，4．72(s，1H，C．H)，6．02(s，2H，O-CH2一O)，6．19(s，2H，Ar-H)，6．70(s，1H，Ar-U)，6．87(s，1H，Ar-H)，7．28(s，1H，C=C—H)，9．55(s，1H，CHO)，”C-NMR(100MHz，CDCl3)642．6，44．7，56．3，63．4，101．7，104．3，108．7，110．8，125．0，133．6，133．4，134．7，135．7，146．5，146．9，150．4，192．8MS(m／z)：[M】+384．2(3S,4S)．6，7．二甲氧基．4．(3一甲氧基一4一羟基苯基)．3，4一二氢．3一羟甲基一2萘醛(Compound14)OHVBI■1CHO，／．OHMe2S04DMF70℃0／OHCompound14将VBE一1500mg(1．41×10。m01)以及无水K2C03195．8rag(2．82×10。m01)置于100ml三口烧瓶中，加入DMF5ml，油浴加热至70℃，待回流开始后，加入Me2S040．14ml(1．41×10。3m01)，反应2h，至TLC板上的原料点消失。反映结束后加入蒸馏水30ml，稀释DMF层，然后用10％稀HCL调节水层pH至7．0，再用30mlEtOAc分三次萃取水层，收集EtOAc层，用等体积H20洗涤三次，除去DMF，旋蒸除去溶剂，得到Compound14粗品521mg。42争洲O／＼吼∞ 硕士学位论文实验部分纯化：粗品521mg上209200．300目硅胶柱分离，沈脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound14黄色固体450．2mg，产率87．4％。1H小mⅡl(400MHz，CDCl3)63．275(dd，1H，山=4．8Hz，J2=14．6Hz，O-CH2)，3．318(dd，1H，西=4．8Hz，J2=15．2Hz，O-CH2)，3．46(s，1H，OI-I)，63．62(q，1H，J=-5．2Hz，C-H1，3．68(s，3H，O·CH3)，3．84(s，3H，O—CH3)，3．93(s，3H，O-CH3)，4．39(d，1H，J=5．2Hz，C-H、，6．56(d，1H，户8．0Hz，At-H)，6．66(d，1H，J=8．0Hz，Ar-H)，6．73(s，1H，At-H)，6．91(s，1H，At-H)，7．34(s，1H，C=C—H1，9．50(s，1H，CHO)，¨C-NMR(100MHz,CDCl3)642．9，43．5，55．6，55．9，55．9，62．9，110．O，111．5，113．0，114．O，119．8，123．8，132．4，135．O，135．6，144．0，146．4，147．0，148．0，151．7，193．0MS(m／z)：[Ⅶ+370．2(3s,4s)一6，7-二甲氧基．4一(3-甲氧基-4-(2一溴．乙氧基)苯基)．3，4一二氢一3一羟甲基一2萘醛(Compound15)OHCompound14Br～BrKOHMat；N70"120v八BrCompound15将Compound14500．1mg(1．35x10"3m01)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH190mg(3．37X10弓m01)，MeCN10ml，通入N2，升温至70℃回流，加入1，2二溴乙烷3ml(33．75×10‘3m01)，反应10h，反应完毕后冷却至室温，低温旋干MeCN，向体系中加入H2030ml，用10％HCl调节pH5．5，然后用EtOAc萃取(30ml×3次)，收集EtOAc层，用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound15粗产物520mg。纯化：粗品520rag上209200—300目硅胶柱分离，沈脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound15黄色固体470．2mg，产率79％。(3s,4s)．6，7-二甲氧基-4一(3．甲氧基-4一(3-溴．丙氧基)苯基)．3，4．二氢一3．羟甲基-2萘醛(Compound16)OHComimand14将Compound14500．1mgBf＼／＼，町KOHMeCN70℃Compound16(1．35×10‘3t001)置于100ml三口烧瓶中，加入43 硕士学位论文实验部分KOH152mg(2．70×100m01)，MeCN10ml，通入N2，升温至70℃回流，加入1，3二溴丙烷2．47ml(27．11X100t001)，反应10h，反应完毕后冷却至室温，低温旋干MeCN，向体系中加入H2030ml，用10％HCI调节pH5．5，然后用EtOAc萃取(30ml×3次)，收集EtOAc层，用无水Na2S04干燥，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound16粗产物664mg。纯化：粗品563mg上209200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=100：1)，得到Compound16黄色固体597．2mg，产率88％。(3s,4s)-6，7．二甲氧基-4．(3．甲氧基4∽N二甲基-乙氧基)苯基)·3，4-二氢一3一羟甲基一2萘醛(Compound17)O、／＼N／lCompouad14Compolnd17将VBE一1148．1mg(O．41×10。3m01)置于100ml三口烧瓶中，立刻加入DMF5“，待原料溶解后，通入N2排去空气，加入30mgKOH(0．62×10。3m01)，升温至70℃，搅拌5min后，加入ⅣⅣ二甲基1．氯乙胺43．6mg，反应14h过夜，停止反应，向底物中加入H2020IIll，然后加入EtOAe，进行萃取，30ml×3次，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥2h，旋蒸除去溶剂，得到Compound17粗品120mg。纯化：粗品120mg上159200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound17淡黄色固体87mg，产率46％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)83．12(s，6H，N—CH3)，3．62(t，2H，J--5．6Hz，N—CH2)，3．88(s，6HHz，O—CH3)，4．06(s，3H，O-CH3)，4．17(dd，2H，力=1．6Hz，,／2=5．6Hz，O-CH2)，4．52(d，2H，J--4．0Hz，O—CH2)，3．47(q，1H，J--4．0Hz，C-H)，7．50(s，1H，C=C．H)，4．45(d，1H，J=4．1Hz，C．H)，7．05(d，2H，J=6．4Hz，Ar-H)，7．26(s，1H，Ar-H)，7．74(s，1H，Ar-H)，8．20(s，1H，At-H)，10．12(s，lH，CHO)¨C-NMR(100MHz，CDCl3)615．1，28．7，44．6，56．0，57．3，64．2，64．9，104．9，108．0，113．5，115．2，122．1，122．7，129．1，131．2，131．8，132．2，135．2，139．2，146．1，149．8，150．1，152．1，192．1MS(m／z)：【M】十441．2(3S,4S)．6，7．二甲氧基一4-(3．甲氧基一4一∽N二乙胺一乙氧基)苯基)一3，4一二氢-3·羟甲基．2萘醛(Compound18) 硕士学位论文实验部分芝《囊：琶Compound15c。mpo叫d18L、。将原料Compound1550．1mg(1．04X10。4m01)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH10mg，DMF4ml，升温至70℃，搅拌5min后，迅速加入二乙胺0．10ml，反应16h。停止反应，向体系中加入H2030ml，并用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥1h，旋蒸除去溶剂，得到粗品36mg。纯化：粗品36mg上149200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=15：1)，得到Compound18淡黄色固体20mg，产率40．8％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)62．60(m，4H，N-CH2)，2．82(t，2H，d=6．0Hz，N·CH2)，3．64(q，1H，J=5．2Hz，C-H)，3．19(t，4H，J=4．8Hz，O-CH2)，3．75(s，3H，O-CHs)，3．87(s，3H，O-CHa)，3．94(s，3H，O-CH3)，4．08(t，2H，J=6．0Hz，O—CH2)，4．35(d，1H，房5．2Hz，C—H)，4．35(d，1H，,／--4．1Hz，C—H)，6．32(dd，1H，山=2．0Hz，J2=6．4Hz，Ar-H)，6．58(d，IH，,／--2．0Hz，Ar-H)，6．67(d，1H，J=8．0Hz，At-H)，6．72(s，1H，At-H)，6．91(s，lH，，心H)，7．33(s，1H，C=C-H)，9．53(s，1H，cno)，13C-NMR(100MHz，CDCl3)642．8，43．7，53．8，55．8，56．0，57．3，63．2，66．3，66．6，111．3，111．5，112．9，113．2，119．4，123．8，132．2，135．1，136．9，146．6，146．7，148．1，149．2，151．7，192．8MS(m／z)：【M]十469．3(3s,4s)．6，7一二甲氧基-4-(3-甲氧基_4-(2’-吡咯乙氧基)苯基)一3，4一二氢一3一羟甲基-2萘醛(Compound19)Compound14H厂＼CI～N√KOCompound19将Compound14148．1mg(0．41×10—3t001)置于100ml三口烧瓶中，立刻加入DMF5ml，待原料溶解后，通入N2排去空气，加入30mgKOH(0．62×10。3m01)，升温至70℃，搅拌5min后，加入氯乙烷2一吡咯43．6mg，反应10h过夜，停止反应，向底物中加入H2020ml，然后加入EtOAc，进行萃取，20“45 硕士学位论文实验部分×3次，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥2h，旋蒸除去溶剂，得到粗品lOOmg。纯化：粗品100mg上159200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound19淡黄色固体70．6mg，产率37％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．85(m，4H，J=3．2Hz，CH2一CH2)，2．81(m，4H，N·CH2)，3．00(t，2H，乒5．6Hz，N-CI-Iz)，3．18(s，2H，0一CH2)，3．72(s，3H，O—CH3)，3．81(s，3H，0一CH3)，3．88(s，3H，0一CH3)，3．49(q，1H，．／--4．0Hz，C-H)，4．17(t，2H，J。_5．6Hz，0一cI-12)，4．45(d，1H，J三4．1Hz，C-H)，4．4501H，削．1Hz，C—I-1)，6．69(d，2H，。户6．4Hz，A卜H)，6．75(s，2H，Ar-H)，6．85(1H，At-H)，7．12(s，1H，Ar-H)，7．50(s，1H，C=C-H)，9．47(s，1H，CHO)13C-NMR(100MHz,CDCl3)624．9，44．6，45．2，49．1，49．3，49．5，49．8，50．050．2，50．4，56．3，56．6，57．2，63．3，69．4，113．1，114．4，115．4，116．4，121．6，126．6，134．6，137．3，140．4，148．6，149．4，150．6，151．8，154．3，195．0MS(m／z)：【M】+467．2(3s,4s)-6，7-二甲氧基-4一(3一甲氧基-4-(2’-哌啶乙氧基)苯基)一3，4．二氢一3一羟甲基一2萘醛(Compound20)0HCompound14r，、ClI-VN．．,jI(OHDMF70℃将Compound14100．1mg(O．41×10。3t001)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH25．5mg(0．62×100t001)，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70℃，搅拌5rain后，加入氯乙烷2．哌啶74．56mg，反应10h过夜。停止反应，向底物中加入H2020ml，然后加入EtOAc，进行萃取，30ml×3次，再用H2030ml萃取2次，最后用无水Na2S04干燥lH，旋蒸除去溶剂，得到粗产物90raga纯化：粗品90rag上129200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇--20：1)，得到Compound20淡黄色固体40．6rag，产率35％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．46(m，2H，CH2)，1．61(m，4H，．／=-5．6Hz，CH2一CH2)，2．60(m，4H，N-CH2)，2．78(t，2H，J--5．6Hz，N-CI-12)，3．19(m，2H，0-CH")，3．49(dd，1H，力=1．2Hz，J2=4．OHz，C—H)，3．70(s，3H，0-CH3)，3．81(s，3H，0-CH3)，3．88(s，3H，0一CH3)，4．04(t，2H，J=5，6Hz，0一CH2)，4．44(d，1H，J--4．146 硕士学位论文实验部分Hz，C—H、，6．36(da，2H，,Ii=1．2Hz，,／2--6．8I--Iz，Ar-H)，6．84(s，1H，AM-I)，7．1l(s，1H，Ar-H)，7．49(s，1H，C=C—I-i)，9．46(s，1H，ci-[o)，”C-NMR(400MHz，CDCl3)622．9，24．2，42．8，43．7，54．3，55．8，56．0，56．9，63．2，65．1，111．2，111．6，113．O，119．5，123．9，132．1，135．1，137．6，145．9，146．8，148．2，149．2，151．8，192．9MS(m／z)：【M】+481．3(3s,4s)．6，7．二甲氧基．4．(3．甲氧基4一(2’一吗啉乙氧基)苯基)-3，4-二氢一3-羟甲基．2萘醛(Compound21)／＼Ov^BrCompound15DMF75℃o＼／＼N八Comlleund21L,vo将Compound1550．1mg(1．04×104t001)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH10mg(6．2×10‘4t001)，DMF4ml，升温至70℃，搅拌5min后，迅速加入吗啡啉0．10ml，反应14h。停止反应，向体系中加入H2030rnl，并用EtOAc萃取(30ral×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥1h，旋蒸除去溶剂，得到粗品36mg。纯化：粗品40rag上149200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=20：1)，得到Compound21淡黄色固体25rag，产率49．6％。1H-NMR(400MHz,CDCl3)61．21(t，6H，．／=-7．1Hz，CI-13)，3．03(q，4H，,／=-7．1Hz，N—CH2)，3．16(m，2H，N—CH2)，3．32(m，2H，HO-CH2)，3．49(dct，1H，以=1．OHz，Jz=4．3Hz，C-I-I)，3．74(s，3H，O-CH31，3．81(s，3H，0-CH3)，3．89(s，3H，0一CH3)，4．12(t，2H，,／--5．6Hz，0一CI-12)，4．460，1H，J=4．3Hz，C-H)，6．37(dd，1H，山=O．8Hz，J2=6．4Hz，心H)，6，72(d，1H，户2．0Hz，Ar-H)，6．77(d，tH，,／--6．4Hz，A卜H)，6．85(s，1H，A卜H)，67．13(s，1H，AM-I)，7．51(s，1H，C=C-14)，9．47(s，IH，cno)，13CNMR(100MHz，CDCl3)611．5，45．3，45．8，53．8，58．1，63．9，68．0，“4．2，115．O，116．0，117．3，122．2，127．2，135．1，137．9，141．5，148．8，150．1，151．3，152．4，154．9，195．7MS(m／z)：[M】+483．2(3s,4s)一6，7．二甲氧基-4-(3-甲氧基-4一∽Ⅳ二甲基胺丙氧基)苯基)一3，4-二氢-3一羟甲基一2萘醛(Compound22)47 硕士学位论文实验部分HN＼KOHDIVlF75℃O、～BrCompelzld16CompoRRd22将Compound16100．0mg(2．03×10。4t001)置于100ml三El烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH12rag，DMF5ml，升温至75℃，搅拌5rain后，迅速加入二甲胺0．21ml，反应15h，停止反应，向体系中加入H2040ral，并用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥1h，旋蒸除去溶剂，得到粗品70mg。纯化：粗品70rag上159300—400目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=15：1)，得到Compound22淡黄色固体56mg，产率60．3％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)60．90(t，2H，J=4．8Hz，CH2)，2．13(m，2H，N-CH2)，2．49(s，6H，N-CH3)，3．48(t，1H，d=4．0Hz，0一CH2)，3．53(t，1H，崩．0Hz，0-CH2)，3．64(q，IH，．／=-5．2Hz，C—H、，3．75(s，3H，0-CH3)，3．87(s，3H，0一CH3)，3．94(s，3H，0一CH3)，3．99(dd，IH，正=1．2Hz，J2=5．4Hz，0一CH2)，4．37(s，IH，C-H)，6．32(dd，1H，西=1．OHz，以=7．2Hz，At-H)，6．59(d，1H，户6．4Hz，Ar-聊，6．65(d，1H，．／--7．8Hz，Ar-H)，6．73(s，1H，AM-I)，66．91(s，1H，Ar-H)，7．33(s，1H，C=C-H)，9．53(s，1H，CI-IO)，”C-NMR(100MHz，CDCl3)626．0，42．8，43．7，44．2，56．0，63．2，66．8，111．4，111．6，113．4，113．4，119．5，123．8，132．3，135．2，137．0，146．6，146．7，148．1，149．3，151．8，192．8MS(m／z)：【M】+455．2(蟋萌印-6，7．二甲氧基4(3-甲氧基-4一(ⅣN二甲基胺丙氧基)苯基)-3，4一二氢-3．羟甲基一2-萘醛(Compound23)／＼HN,／-KOHDMF75℃O．v八／BrCompouud16Comoomld23将Compound16100．0mg(2．03×10‘4t001)置于100ml三IS]烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH17rag，DMF5ml，升温至75℃，搅拌5rain后，迅速加入二乙胺0．11ml，反应lOh，停止反应，向体系中加入H2030ral，并用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ral萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥lh，旋蒸除去溶剂，得到粗品67mg。纯化：粗品67mg上159200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=lO：1)，得到Compound23淡黄色固体40mg，产率40．5％。∽∥＼o～瑶～ 硕士学位论文实验部分1H-NMR(400MHz，CDCl3)61-44(t，2H，d--4．8Hz，CH3)，1．80(m，4H，N—CH2)，2．34(m，2H，,／--3．6Hz，CH2)，3．16(m，4H，J=4．4Hz，N-CH2)，3．28(m，1H，J=-6．4Hz，C—I-I)，3．40(dd，1H，力=1．OHz，倒．3Hz，0一CH2)，3．65(dd，1H，山：1．OHz，J2=4．3Hz，0-cI-12)，3．75(s，3H，0-CH3)，3．87(s，3H，0一CH3)，3．95(s，3H，0一CH3)，4．04(t，2H，,／--4．0Hz，0-CH2)，4．36(s，1H，C-I-I)，6．30(dd，1H，山=1．6Hz，J2=7．8I-Iz，At-H)，6．60(s，1H，Ar-H)，6．64(d，1H，乒7．8Hz，Ar-H)，6．72(s，1H，At-H)，6．91(s，1H，At-H)，7．34(s，1H，C=C—I-I)，9．54(s，1H，CHO)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)623．8，42．8，43．7，46．8，49．2，56．0，63．3，66．3，111．2，111．6，114．0，119．6，123．9，132．1，135．0，137．7，146．0，146．9，148．2，149．4，151．8，192．8MS(m／z)：[M】+483．2(3S,4S)．6，7．二甲氧基4．(3．甲氧基-4．(2’．吡咯丙氧基)苯基)-3，4-二氢-3-羟甲基-2-萘醛(Compound24)Compound16Compound24将Compound16100．0mg(2．03×10‘4t001)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH17mg，DMF5ml，升温至75℃，搅拌5rain后，迅速加入吡咯O．11m1，反应10h，停止反应，向体系中加入H2030ml，并用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥1h，旋蒸除去溶剂，得到粗品77mg。纯化：粗品77mg上159200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=15：1)，得到Compound24淡黄色固体49mg，产率50．1％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)60．89(m，2H，CH2)，1．29(m，4H，CH2一CH2)，1．59(t，2H，户5．2Hz，N-CH2)，1．92(m，4H，J=4．2Hz，N-CH2)，3．39(q，1H，削．0Hz，C—I-I)，3．55(dd，2H，以=1．3Hz，以=4．6Hz，O-CH2)，3．75(s，3H，O-CH3)，3．87(s，3H，O—CH3)，3．95(s，3H，O-CH3)，4．34(t，2H，J--4．0Hz，O—CH2)，4．37(s，1H，C．H)，6．31(ad，1H，力=1．0Hz，dz=7．8Hz，At-H)，6．60(s，1H，At-H)，6．69(d，1H，J--8．0Hz，舡H)，6．72(s，1H，Ar-H)，6．91(s，1H，At-H)，7．34(s，1H，C=C．H)，9．54(s，1H，cno)，13C．NMR(100MHz，CDCl3)622．4，23．6，29．7，30．1，42．8，43．8，54．1，55．7，55．8，56．0，56．6，63．3，64．9，111．3，111．3，111．6，113．O，114．4，119．6，123．9，132．1，135．1，138．1，145．7，146．7，148．3，149．5，151．8，192．8Ms(rn／z)：[M]+481．249 硕士学位论文实验部分(3s,4s)一6，7．二甲氧基-4-(3一甲氧基一4一(3’-哌啶丙氧基)苯基)-3，4一二氢-3-羟甲基-2·萘醛(Compound25)／＼O．x／-＼／BrCompound16将Compound16100。0mg(2．03X104m01)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH12mg，DMF5ml，升温至75℃，搅拌5min后，迅速加入哌啶O．15ml，反应10h，停止反应，向体系中加入H2040ml，并用EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥1h，旋蒸除去溶剂，得到粗品85mg。纯化：粗品85mg上159200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=15：1)，得到Compound25淡黄色固体62mg，产率61．3％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)GO．89(m，2H，CH2)，1．29(m，4H，CI-12一CI-12)，1．570，2H，CH2)，2．20(t，4H，乒=4．2Hz，N-CH2)，2．35(m，2H，J=5．2Hz，N-CH2)，3．55(q，1H，J=5．2Hz，C—i-r)，3．66(dd，2H，以=4．0Hz，J2=12．2Hz，O-CH2)，3．78(s，3H，O—CH3)，3．86(s，3H，O-CH3)，3．93(s，3H，O-CHa)，4．08(t，2H，J=4．0Hz，O—CH2)，4．41(s，1H，C-H)，6．nod，1H，西=O．8Hz，J2=7．8Hz，Ar-H)，6．56(s，1H，Ar-H)，6．68(s，1H，Ar-H)，6．72(s，1H，Ar-H)，6．92(s，1H，Ar-H)，7．99(S，1H，C=C-H)，9．53(s，1H，CHO)，¨C—NMR(100MHz，CDCl3)822．0，23．4，24．3，28．1，40．O，43．9，54．9，55．0，56．1，64．2，67．8，1lO．O，110．5，112．0，118．7，122．8，130．9，134．0，145．9，192．2MS(m／z)：【M．2]+493．4(3S,4S)一6，7一-rf氧基一4-(3一甲氧基-4一(3’一吗啉丙氧基)苯基)一3，4一二氢-3一羟甲基-2一萘醛(Compound26)o／DM’75℃O．^一BrCompound16CHO，／OH将Compound16100．0mg(2．03x104t001)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH12mg，DMF5m1，升温至75。C，搅拌5min后，迅速加入吗啡啉0．2lml，反应12h，停止反应，向体系中加入I-12040ml，并用瞌 硕士学位论文实验部分EtOAc萃取(30ml×3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥Ih，旋蒸除去溶剂，得到粗品90mg。纯化：粗品90mg上159200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=15：1)，得到Compound26淡黄色固体70mg，产率70．O％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)62．21(m，2H，CH2)，2．60(m，4H，d=4．2Hz，N-CI-t2)，3．26(t，2H，,／--5．2Hz，N-CH2)，3．41(t，4H，J=4．2Hz，O-CH2)，3．32(m，2H，d=4．3Hz，HO．CH2)，3．36(m，1H，d=4．3Hz，C-H)，3．76(s，3H，O-CH3)，3．87(s，3H，O．CI-13)，3．95(s，3H，O—CH3)，4．01(t，2H，,／--6．0Hz，O·CH2)，4．34(d，IH，J--4．3Hz，C-m，6．3l(dd，IH，力=1．2Hz，Jz=4．0Hz，At-H)，6．58(d，1H，J=2．0Hz，肛H)，6．66(d，1H，J=4．0Hz，Ar-H)，6．72(s，1H，At-H)，6．91(s，1H，Ar-H)，7．34(s，1H，C=C-H)，9．54(s，1H，CHO)，¨C—NMR(100MHz，CDCl3)627．8，40．1，45．3，50．7，53．6，54．1，55．9，56．1，56．5，63．3，66．7，66．9，67．0，111．1，112．2，113．3，115．6，121．7，128．0，131．2，135．6，140．7，144．4，147．2，148．1，149．2，150．2，193．9MS(m／z)：[M】+497．37’．(3，5-二甲氧基．4．(2-溴乙氧基))一依托泊苷(Compound27)佩o、。帅～产l『《咖!Oh＼oⅣo／oHElopositleo、／hCompouatl27将原料Etoposide800．1mg(1．36X10‘3mob置于100ml三口烧瓶中，加入KOH70．1mg，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至60℃，搅拌5min后，迅速加入l，2二溴乙烷2．50ml，反应20h，停止反应，向体系中加入H2040ml，并用EtOAc萃取(30mlX3次)，合并EtOAc层，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水NaES04干燥lh，旋蒸除去溶剂，得到粗品800mg。纯化：粗品800mg上129200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=50：1)，得到Compound2-／淡黄色固体740．6mg，产率78．3％。7’．(3，5一二甲氧基-4-(3-溴丙氧基))一依托泊苷(Compound28)51 硕士学位论文实验部分强H?H03，—，——扩Y0l=!竺《撕=!型．、足八人尸叫¨们＼A二将原料Etoposide500．1mg(0．85×100m01)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH70．1mg(0．85×10刁t001)，通入N2排去空气，立刻加入MeCN15ml，升温至60℃，搅拌5min后，迅速加入1，3二溴丙烷1．73ml，反应24h。停止反应，加入40mlH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(40ml×3)，用无水Na2S04干燥30min，浓缩EtOAc层，得到粗产物550mg。纯化：粗品550mg上129200．300目硅胶柱分离，流动相为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=50：1)，得到Compound28淡黄色固体485．6mg，产率80．3％。7’一(3，5．二甲氧基一4．(N,N二甲基胺-乙氧基))-依托泊苷(Compound29)＼肆y70℃＼做，EtoposideCompoundz，将Etoposide50．0mg(6．84×10弓m01)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH5．2mg(6．84×10一m01)，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70V，搅拌5min后，加入MⅣ二甲基l一氯乙胺8．1mg，反应用TLC监测，反应10h，向底物中加入H2020ml，然后加入EtOAc，进行萃取，20ml×3次，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥2h，旋蒸除去溶剂，得到粗品35mg。纯化：粗品35mg上109200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound29淡黄色固体20．6mg，产率44％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)61．28(t，2H，J=4．8Hz，CH2一N)，3．03(s，6H，CH3-N)，3．82(s，6H，O．CH3)，4．20(t，2H，J--4．8Hz，O-CH2)，4．230，1H，J=5．2Hz，C—H)，4．410，1H，J=5．2Hz，C．H)，4．73(dd，1H，山=1．4Hz，J2=5．2Hz，C2-H)，4．82(d，1H，J--4．4Hz，C1一H)，5．91(s，1H，Ar-H)，5．92(s，1H，Ar-H)，6．38(s，IH，Ar-H)，6．60(s，2H，O—CH2．0)，7．09(s，1H，Ar-H)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)640．7，43．7，44．8，46．3，56．5，58．3，67．2，67．5，69．1，70．1，74．8，75．8，52o、oe；舡洲一＼oE 硕士学位论文实验部分76．6，81．5，100．7，102．5，102．8，106．7，108．9，110．0，129．8，133．6，135．3，140．5，148．0，149．2，154．6，181．7MS(m／z)：[M+1】+660．37’．(3，5．二甲氧基-14-(2’．吡咯-乙氧基))一依托泊苷(Compound30)；On＼07≮^07OHEtoposide鲰?c．～D∞。《翰一＼A二Compou。nidD30V将Etoposide100．1mg(1．70×10‘4t001)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH10．0mg，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70℃，搅拌5min后，加入1．氯乙基吡咯22．7mg，反应用TLC监测，反应10h后，停止反应，向底物中加入H2020m1，然后加入EtOAc，进行萃取，30ml×3次，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥lOH，旋蒸除去溶剂，得到Compound30粗产物68rag。纯化：粗品68rag上109200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound30淡黄色固体17．6mg，产率17％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．28(t，4H，J=4．8，CH2-CH2)，2．07(t，4H，J=4．8Hz，N—CH2)，3．17(t，2H，,／--5．2Hz，N—CH2)，3．60(m，2H，O-CH2)，3．81(s，6H，O—CH3)，4．07(q，1H，J=4．8Hz，C—H)，4．16(t，2H，O-CH2)，4．73(q，1H，,／-"--4．8Hz，C2一H)，4．81(m，1H，Cz·H)，5．91(s，IH，Ar-H)，5．92(s，1H，At-H)，6．40(s，IH，舡H)，6．58(s，2H，O-CH2-O)，7．10(s，1H，At-H)，”C-NMR(100MHz，CDCl3)620．5，23．9，40．7，44．8，46．3，48．3，49．6，55．3，55．9，56．6，67．5，69．2，70．1，74．7，75．8，76．5，81．5，100．6，102．5，102．9，106．6，108．9，110．0，129．9，133．5，135．8，140．2，148．0，149．2，154．6，181．7MS(m／z)：[M+1】+686．37’-(3，5一二甲氧基-4一(2’-哌啶-乙氧基))一依托泊苷(Compound31)n＼o／』、人07OHEtop∞ide将Etoposide100．1rag(1．70×104m01)置于100ml三口烧瓶中，加入KOH10．0mg，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70"C，搅拌5min后，53叉飞矽融； 硕士学位论文实验部分加入1一氯乙基哌啶22．7mg，反应用TLC监测，反应10h后，停止反应，向底物中加入H2020ml，然后加入EtOAc，进行萃取，30mlX3次，再用H2030“萃取2次，除去DMF，最后用无水Na2S04干燥10H，旋蒸除去溶剂，得到粗产物68mg。纯化：粗品72mg上109200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound31淡黄色固体20。lmg，产率22％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．47(m，2H，J=4．8Hz，CH2)，1．62(m，4H，J---4．8Hz，N．CH2)，2．61(m，4H，N·CH2)，2．770，2H，d--5．6Hz，N—CH2)，3．76(s，6H，O-CH3)，4．06(t，2H，J=5．6Hz，O·CH2)，4．26(d，IH，乒8．0FIz，C-H)，4．34(t，2H，3---4．0Hz，O．CH2)，4．39(d，1H，J--4．8Hz，C-H)，4．70(dd，1H，西=1．2Hz，．／z=4．8Hz，C2．H)，4．80(m，1H，Cl-H)，5．88(dd，2H，力=1．2Hz，垆6．8Hz，A卜H)，6．45(s，1H，Ar-H)，6．53(s，2H，O-CH2-O)，7．13(s，1H，At-H)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)fi20．6，24．9，26．2，40．5，44．9，46．3，48．3，48．5，48．7，49．O，49．2，49．4，49．6，55．5，56．6，56．6，59．3，67．4，69．1，69．9，71．0，74．6，75．8，76．2，76．3，81．4，100．5，100．6，102．4，103．1，106．6，106．7，108．6，110．0，129．9，133．2，136．8，139．1，148．0，149．0，154．7，181．5MS(m／z)：[M+1】’700．17’．(3，5一二甲氧基．4．∽Ⅳ二乙基胺一乙氧基))-依托泊苷(Compound32)Compound27气瓮≈?Ho≮矿心／，‘『b删《姗DIdF70℃＼。Q／0＼／、N八c口m弦und32L＼将Compound27100．1mg(1．43×104t001)置于100ml三口烧瓶中，加入K2C0340mg，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70℃，搅拌5min后，迅速加入二乙胺0．10ml，反应7h。加入30mlH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(30mlX3)，再用H2030砌萃取2次，除去DMF，用无水Na2S04干燥30min，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物90mg。纯化：粗品90mg上129200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(--氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound32淡黄色固体78mg，产率80％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)81．49(t，6H，．／=-7．2Hz，CH3)，3．10(m，2H，N—CH2)，3．24(t，2H，户5．2Hz，N—CHE)，3．24(t，2H，J--5．2Hz，N—CHE)，3．81(s，6H，O．CH3)，4．14(q，1H，J=4．8Hz，C．H)，4．27(d，IH，J=4．8Hz，C—H)，4．40(t，2H，J=4．8Hz，O．CH2)，4．510，2H，3--5．2Hz，O—CH2)，4．72(q，1H，J--5．8Hz，殴叩 硕士学位论文实验部分C2-H)，4．92(d，1H，,／--3．2Hz，CI—H)，5．950，2H，户6．0Hz，Ar-n)，6．35(s，1H，At-H)，6．45(s，2H，0．cI-12—0)，6．82(s，IH，Ar-H)，13C-NMR(100MHz，CDCl3)820．2，29．6，39．4，44．1，44．2，47．4，73．0，74．4，75．3，79．7，99．1，99．5，101．3j134．3，140．0，146．3，148．5，153．2，179．950．8，56．1，66．2，66．6，68．1，69．3，105．5，108．5，109．3，126．3，132．6，MS(m／z)：[M+1】+688．27’一(3，5．二甲氧基-4-(2’-吗啉一乙氧基))-依托泊苷(Compound33)将Compound27100．1mg(1．43×10‘4t001)置于100ml三口烧瓶中，加入K2C0340mg，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至70"C，搅拌5rain后，迅速加入吗啡啉0．15IIll，反应6h。停止反应，加入30ralH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(30ml×3)，再用H2030m1萃取2次，除去DMF，用无水Na2S04干燥30rain，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物80rag。纯化：粗品80rag上129200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound33淡黄色固体68rag，产率68％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)62．62(t，4H，J=4．8，N—CH2)，2．81(t，2H，J=-5．6Hz，N—CH2)，3．14(m，1H，,／--4．8Hz，C2-H)，3．20(q，1H，J=4．8Hz，C-H)，3．76(t，4H，J=4．8Hz，0-CH21，3．78(s，6H，0-CH3)，4．49(m，2H，J=4．8I-Iz，0一CH2)，4．72(dd，1H，^=1．1Hz，J2=5．6Hz，Cl—H)，4．91(d，1H，,／--3．2Hz，C-I-D，4．51(t，2H，,J=-5．2Hz，0-CHz)，5．96(a，2H，J--6．4Hz，A卜啪，6．38(s，1H，Ar-H)，6．42(s，2H，0-CHz—O)，6．82(s，1H，Ar-H)，”C-NMR(100MHz，CDCl3)620．2，39．4，44．0，44．5，53．8，56．135，58．3，66．1，66．8，68．O，69．3，70．1，72．9，74．3，75．2，79．7，99．1，99．5，101．2，105．7，108．3，109．5，126．2，132．8，135．9，138．7，146．2，148．4，153．6，180．1MS(m／z)：[M+1]+702．47’一(3，5-二甲氧基-4-(N,N二甲基胺·丙氧基))一依托泊苷(Compound34)55 硕士学位论文实验部分0h＼oⅣo／o、^．Bt叫F70"CF～＼。／kp。／．o＼／^＼／自、Compound28Compountl．，4将Compound28100．1mg(1．41x10‘4m01)，KOH45mgleq，置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，升温至75℃，搅拌5min后，迅速加入二甲胺O．21“，反应12h。停止反应，加入30mlH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(30mlX3)，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，用无水NaES04干燥30rain，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物72mg。纯化：粗品72mg上129200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound34淡黄色固体50mg，产率53．1％。1H—NM承(400MHz，CDCl3)62．18(m，2H，CH2)，3．19(m，6H，N-CH3)，3．79(s，1H，C2·脚，3．82(s，6H，O—CH3)，4．08(d，1H，J=4．8Hz，O—CH2)，4．40(s，1H,O-CH2)，4．41(s，1H，C-H)，4．73(d，1H，3=4．8Hz，O—CH2)，4．82(d，1H，J=4．8Hz，C—H1，5．92(s，1H，Ar-H)，5．92(s，1H，At-H)，6．37(s，1H，At-H)，6．60(s，2H，O—CHE—O)，7．09(s，1H，At-H)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)621．5，27．0，31．7，41．7，44．9，45．8，47．3，57．7，59．7，68．5，70．1，71．1，73．7，75．8，76．8，82．6，101．7，103．8，107．7，109．9，130．8，134．7，141．0，150．2，155．4，182．7MS(m／z)：[M+1】+674．27’．(3，5．二甲氧基．4．(N,N--7,基胺一丙氧基))一依托泊苷(Compound35)iO＼砧。，，O＼／＼／BrCompound28Compound35将Compound28100．1ing(1．41X104m01)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，加入K2C0345mg，升温至70"C，搅拌5rain后，迅速加入二乙胺0．1ml，反应10h。停止反应，加入40mlH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(40ml×3)，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，萃取完毕后用无水Na2S04干燥30min，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound35粗产物84mg。 硕士学位论文实验部分纯化：粗品84mg上129200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound35淡黄色固体67mg，产率68．3％。7"-(3，5．二甲氧基一4．(2’．吡咯一丙氧基))一依托泊苷(Compound36)Compoanfl勰Compoand两将Compound28100．1mg(1．42×10’4m01)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH45rag，DMF4ml，升温至80℃，搅拌5rain后，迅速加入吡咯0．10rIll，反应12h。停止反应，加入30mlHEO稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(30ml×3)，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，萃取完毕后用无水Na2S04干燥30min，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物74mg。纯化：粗品74rag上129200．300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound36淡黄色固体62mg，产率62．84％。7’．(3，5．二甲氧基-4-(2’．哌啶一丙氧基))-依托泊苷(Compound37)冉二叫唧℃＼牟，n6v、／BroV、／^√Compound28CompoⅡ“d37将Compound28100．1mg(1．42X104m01)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入KOH45rag，DMF4ml，升温至80℃，搅拌5min后，迅速加入哌啶0．10111l，反应11h。停止反应，加入30mlH20稀释反应液，然后用EtOAe分三次萃取(30ml×3)，再用H2030“萃取2次，除去DMF，萃取完毕后用无水Na2SO。干燥30rain，减压旋蒸除去溶剂，得到粗产物88mg。纯化：粗品88mg上129200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound37淡黄色固体70mg，产率69．0％。1H—NMR(400MHz，CDCl3)60．89(t，2H，J=6．8Hz，CH2)，1．24(m，2H，CH2)，1．35(rn，4H，CH2)，1．45(t，2H，J=6．6Hz，N—CH2)，2．05(m，2H，N-CH2)，3．150d，IH，山=1．0Hz，以=5．2Hz，O—CH2)，3．98(d，1H，J=3．0Hz，O-CHE)，4．15(m，57 硕士学位论文实验部分2H，0·CH2)，4．28(d，1H，,／=-5．2Hz，C2一H)，4．40(d，1H，户3．0Hz，0一CH2)，4．53(d，1H，,／--5．2Hz，C-H)，4．93(d，1H，户2．8Hz，C—H)，5．55(s，1H，C1-H),5．96(d，2H，J=-6．0Hz，A卜H)，6．36(s，IH，Ar-H)，6．46(s，2H，0一CH2-O)，6．82(s，1H，Ar．H)，”C_NMR(100MHz，CDCl3)620．3，23．3，24．7，25．1，29．1，30．1，39．5，43．5，44．1，52．9，55．9，56．2，66．3，68．1，69．4，72．9，73．1，74．6，79．7，99．1，99．6，101．3，105．6，109．4，126．4，132．8，139．5，146．3，148．5，153．1，180．0MS(m／z)：『M+1]十728．237’-(3，5-二甲氧基一4-(2’一吗啉一丙基氧))一依托泊苷(Compound38)i0h＼o／。≈／、07o、^，H(≥DMF研O＼／＼／ComouJtl28Comlmuud37将Compound28100．1mg(1．41×104t001)置于100ml三口烧瓶中，通入N2排去空气，立刻加入DMF5ml，加入K2C0345mg，升温至70℃，搅拌5rain后，迅速加入吗啡啉O．12ml，反应lOh。停止反应，加入40mlH20稀释反应液，然后用EtOAc分三次萃取(40mlX3)，再用H2030ml萃取2次，除去DMF，萃取完毕后用无水Na2S04干燥30rain，减压旋蒸除去溶剂，得到Compound38粗产物80mg。纯化：粗品80mg上129200—300目硅胶柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到Compound38淡黄色固体62rag，产率61％。1H-NMR(400MHz，CDCl3)61．97(t，2H，J=7．6Hz，CH2)，2．61(t，2H，J=7．6Hz，N—CH2)，2．97(m，1H，J=1．6Hz，C2一H)，3．14(d，IH，,／--4．8Hz，N—CH2)，3．20(q，1H，,／--4．8，N—CH2)，3．74(t，4H，J"-"-4．8Hz，0一CH2)，3．80(s，6H，0-CH3)，3．92(d，1H，乒7．6Hz，C—H)，4．03(t，2H，J=6．4Hz，N—CI-12)，4．22(d，lH，J=4．8，COO·CH2)，4．49(d，1H，,／--7．6Hz，C-H)，4．55(d，1H，J=1．6Hz，C．H)，5．96(d，1H，J--1．6Hz，CI-I-I)，5．97(s，1H，J--6．0Hz，Ar-H1，6．38(s，1H，Ar-I-I)，6．42(s，2H，0．CH2．o)，6．79(s，1H，Ar-H)，¨C-NMR(100MHz，CDCl3)620．2，27．0，39．4，43．9，44．3，53．6，55．7，56．2，56．2，66。2，66。8，68．1，69．4，71．6，72．9，74．4，75．4，79．7，98．9，99．6，1013，105．9，108．5，109．7，125．9，133．0，136．1，138．8，146．3，148．6，153．7，180．2MS(m／z)：[M+1]+716．258o 硕士学位论文全文结论5全文结论本课题以寻找具有抗肿瘤活性的VBE衍生物并研究其构效关系为目的，设计合成了24个化合物，他们分别是依托泊苷4’位含N取代的衍生物，VBE一14’位含N取代的衍生物，鬼臼毒素结构改造的VBE．1类似物。通过1H．NMR，uC．NMR，MS进行了结构确认，采用平皿克隆形成法检测化合物对于人肺癌NCI．H446细胞的抑制活性，计算IC50，寻找到一些具有抗肿瘤活性的化合物。通过总结化合物结构和抗肿瘤活性之间的关系，本研究证明：4’位侧链的取代对活性的影响较为明显，但是通过引入合适的取代基，可以得到活性较好的化合物：6，7位改造为二氧戊环后活性增强，化合物的稳定性可能会因此而增强。研究进一步证明，2．醛基，3．羟甲基是VBE类化合物的重要活性官能团之一。上述研究为下一步寻找体内活性更好的抗肿瘤化合物打下了基础。 硕士学位论文参考文献【1】Vivanco1，SawyesrCL．Thephosphatidylinositol3-kinase-AKTpathwayinhumancancer[J]．NatRevCancer,2002，2(7)：489-501[2】2NohEM，LeeYR,ChayKO，eta1．PTENandtheP13Kpathwayincancer[J]．AnnReviewPathol，2009，4(2)：127—150【3】LopezKnowlese，OtooseLA，McneilCM，eta1．P13Kpathwayactivationinbreastcancerisassociated、析tIlthebasal-likephenotypeandcancer-specificmortality[J]．hatJCancer,2010．126(5)：1121—1131[4】BoseS，CranneA，HibshooshH，etal，ReducedexpressionofPTENcorrelates诵n1breastcancerprogression阴．HumPathol，2002，33(4)：405—409【5]KangS，BaderAGVogtPK．Phosphatid)rlinositol3-kinasemutationsidentifiedinhumancancerareoncogenic叨．ProcNatlAcadSciUSA，2005，102(3)：802—807[6]UranoJ，SatoLMatsuoLeta1．PointmutationsinTORconferRheb—independentgrowthinfissionyeastandnutrient-independentmammalianTORsignalinginmammaliancells[J]．ProcNatlAcadSciUSA，2007，104(9)：3514—3519[7]ZhouYJ，LiuYE，CaoJGeta1．Vitexins，nature—derivedlignincompounds，induceapoptosisandsuppresstumorgrowth．Clin．CancerRes．，2009，15(16)：5161-516【8】ZhouYJ，TanGS，ZengGY．AnaryldihydronaphthaleneanditsderivativesChina：1990445A【P】，2005-10—13【9】申璀，曾光尧，谭健兵，等．黄荆子抗肿瘤有效部位化学成分研究，中草药，2009，40(1)：33—36【10]ZhouYJ，TanGS，ZengGY，eta1．AnfitumorcompositionscontainingaryldihydrogennaphthalenelignanderivativesisolatedfromVitex：China：1990445[P]．2007—07·04【ll】LiXQ，ChenZD，ZhouYJ，eta1．EffectsofinducingapoptosisoftheacetoacetateextractofVitexnegundoseedenhancescisplatinonthehumanovariancarcinomacellsCOCI[J]．MMJC，2009，11(5)：5—8【12】ZengFX，ZhouYJ，TangAQ，eta1．InductionofapoptosisinovariancancerCoClcellsbyneolignanVB一1[J】．JHunanNormalUniv,2011，8(1)：40-42．【13】ZhouYJ，TanGS，ZengGY．AnaryldihydronaphthaleneanditsderivativesChina：1990445A【P]，2005·10-13[14]周美辰，P13剐Akt／mTOR及JNK双通路调节剂芳基萘类木脂素衍生物 硕士学位论文参考文献VBE．6的合成及其在大鼠体内的代谢研究【D】．湖南：中南大学，2009【15】周应军，申璀，曾光尧．VBE．1在大鼠体内的代谢研究，第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集【R】．2007[16】SaladinoRGualandGFarinaA，eta1．AdvancesandChallengesintheSynthesisofHighlyOxidisedNaturalPhenolswithAntiviral，AntioxidantandCytotoxicActivities[J]．CurrentMedicinalChemistry,2008，15(15)：1500-1519[17】王莉莉，周应军．抗癌物质鬼臼毒素及其衍生物研究进展【J】．国外医药，2006，21(1)：6-9【18】SegawaJ，KitanoM，KazoilOK．Studiesonpyridonecarboxylicacids．1．Synthesisandantibacterialevaluattioof7-substituted．6-halo．4．OXO．4H一[1，3】thiazeto【3,2-n】quinoline[J]．JMedChem，1992，40(11)：1020-1031【19]ZhongDT，ShiCM，ChenQ，eta1．Etoposide，vincristine，doxorubicinanddexamethasone(EVAD)combinationchemotherapyassecond·linetreatmentforadvancedAIDS-relatedKaposi’Ssarcoma[J]．JCancerResClinOncol，2012，138(3)：425-430[20】YouYPodophyllotoxinderivatives：currentsyntheticapproachesfornewanticanceragents[J】．CurtPharmDes，2005，11(13)：1695·1717【21】KamalA，SureshERamaiahMJ，eta1．Synthesisandbiologicalevaluationof4Dsulphonamidoand4p一【(4’一sulphonamido)benzamide]podophyllotoxinsaSDNAtopoisomerase-llaandapoptosisinducingagents[J】．BioorgMedChem，2012，20(6)：2054-2066．【22】GentryAC，PittsSL，JablonskyMJ，eta1．InteractionsbetweentheetoposidederivativeF14512andhumantypeIItopoisomerases：implicationsfortheC4sperminemoietyinpromotingenzyme-mediatedDNAcleavagem．Biochemistry,20I1，50(I5)：3240-3249【23】DucaM，Guianvarc’hD，MeresseP，eta1．Synthesisandbiologicalstudyofanewseriesof4"-demethylepipodophyllotoxinderivatives[J]．JMedChem，2005，48(2)：593-603【24】KamalA，KumarBA，SureshP’eta1．Synthesisof4B-carbamoylepipodoph)7llotoxinsaspotentialantitumoragents[J]．BioorgMedChem，2011，19(9)：2975—2979【25】Xiang凡ZhangFM，NiJM，eta1．Synthesisandstabilityevaluationof5-FU-aceticpodophyllicesterasanti-tUlTlOragent[J]．JChinPharmaSci，2007，16(1)：47—50[26】YuPF，ChenH，WangJ，eta1．Design，synthesisandcytotoxicityofnovelpodophyUotoxinderivatives[J]．ChemPharmBull，2008，56(6)：831-8346l 硕士学位论文参考文献[27]ReddyDM，JadaS，GousiaC，eta1．4p·【(4一Alkyl)-1，2，3·triazol-l—yl】podophyllotoxinsasanticancercompounds：Design，synthesisandbiologicalevaluation[Y]．EurJMedChem，2011，46(6)：1983—1991[28】BhatBA，ReddyPB，AgrawalSK，eta1．Studiesonnovel413．[(4一substituted)一1，2，3-1riazol-1一yl】podophyllotoxinsaspotentialallCfllceragents[J]．EurJMedChem，2008，43(10)：2067—2072[29】ZhangFM，YaoXJ，TianX，eta1．Synthesisandbiologicalevaluationofnew4p·5-Fu-substituted4"-demethylepipodophyllotoxinderivatives[J]．Molecules，2006，11(11)：849·857【30】DucaM，ArimondoPB，LeonceS，eta1．Novelcarbamatederivativesof4-B—amino·4’-O—demethyl-4-desoxypodophyllotoxinasinhibitorsoftopoisomeraseII：synthesisandbiologicalevaluation[J]，OrgBiomolChem，2005，3(6)：1074-1080[31】XiWL，CaiQ，TangYB，eta1．Designandsynthesisofnovelcytotoxicpodophyllotoxinderivatives；川．ChinChemLett，2010，21(10)：1153-1156【32】WangL，YangFY,YangXC，eta1．Synthesisandbiologicalevaluationof4p—anilino-4’一0一demethyl-4·desoxypodophyllotoxinderivativesaspotentialanfitumoragents[J]．EurJMedChem，2011，46(1)：285—296[33】CastroMA，MiguelJM，GarciaPA，eta1．Synthesisandbiologicalevaluationofnewpodophyllicaldehydederivativeswithcytoloxicandapoptosis-inducingactivities[J]．JMedChem，2010，53(3)：983—993[34】JinY，LiuJ，HuangWT，eta1．Synthesisandbiologicalevaluationofderivativesof4-deoxypodophyllotoxinasantiturnoragents[J]．EurJMedChem，2011，46(9)：4056—4061．[35】张仕金，朱雄，徐云根．鬼臼毒素衍生物的构效关系分析及相关新药的研发思路【J】．药学进展，2012，36(11)：494-500[36】刘杰．天然抗肿瘤药鬼臼毒素及其衍生物研究进展忉．天津化工，2011，25(5)：8-11[37]HengmiaoC，ShubhaB。DiscoveryofthehighlypotentP13K／mTORdualinhibitorPF-04691502throughstructurebaseddrugdesign[J]．Med．Chem，Commun，2010，1：139-144【38】GuerramM，JiangZZ，ZhangLY．FructusViticisNegundo，amedicinalagentofplantorigin：past，presentandfuture[J]．ChineseJournalofNaturalMedicines2012，10(3)：0161—016962 硕士学位论文参考文献[39】GenslercWJ，SamourCM，WangSY,etal。CompoundsRelatedtoPodophyllotoxinXSynthesisofPicropodophyllin[J]．SynthesisofPicropodophylin，1960，82(7)：1714·1727[40】LuF，JohnR．Noveltetrahydrofuranstructuresderivedfromb—b-couplingreactionsinvolvingsinapylacetateinKenaflignins[J]．Org．Biom01．Chem．，2008，6：3681-3694[41】StevenPF,DayanandaR．ComprehensiveSyntheticRoutetoEightDiastereomericPodophyZZumLignans[J]．J．Org．Chem．，1989，54(18)：4280-4290【42]AhmedRLehrerM，StevensonR．Synthesisofthomasicacid[J]，Te廿odon，1973，29(23)：3753-3759[43]Marina13IAngelesC．PreparationandCytotoxicityofPodophyllotoxinDerivativesLackingtheLactoneRing[J]．Tetrahedron，1997，53(46)：15743．15760[44】MaAC，JoseMM，SynthesisandcytotoxicevaluationofC·9oxidizedpodophy’llotoxinderivatives[J]．Bioorganic&MedicinalChemistry,2007，15(4)：1670．1678[45】YvesGMartialGPracticalDemethylationofPodophyllotoxinandEfficientPreparationof4-amino-4-deoxy-4’一demethylepipodophyllotoxin[J]．SyntheticCommunicationsl，2012，42(18)：2780—2789【46】GumsinkyYGrousseaudM，ImbertTetal。表鬼臼毒素的抗癌性(多)氨基烷基氨基乙酰胺衍生物的合成方法．法国：101809022A[p]，2010-08—18[47】KenyaN，YoshiyukiS，IsamuS．SynthesisofLasofoxifene，NafoxidineandTheirPositionalIsomersviatheNovelThree—ComponentCouplingReaction[J]．Molecules，2010，15(10)：6773—6794[48】赵昱，丁红霞，巫秀美等，芳基四氢萘类木脂素化合物及其制备方法和用途，中国：CNl01092363B[P]，2007—12-26 硕士学位论文附录化合物的1H．小瓜偶，13C一卜心很，MS烈：．。：；：=；；：：：：≯．m：嚣≈”；兰。“l曲i==i’烈强6．0●}．艘—J口eL⋯：：⋯；!灞ij镬。轰拇41皇曼nM’’；。’77’．=¨一。i’一琵i篓i篱co—un叭l粼黼笮i￡一～}一一．，二。+。Z’2—0⋯’。’；；i1’。17’‘j；i’一’；’，；．：一’一tj；’。’：’‘j；≯～2ij·+。≮⋯。’’’；≮’’⋯’：’矗：’’’”’j0。⋯”⋯一i’。蠢：攀≮0。麓．：Ⅲ豢{l一=巍菇器冬嚣基氛～引《iijj}jji=≤ 硕士学位论文附录麓一t⋯’。镶黧：：麓ComDound2；亨i{!掣琴i；l；．i|一^|．．i。一．～奠一遣-o、nL袅一一。．t．．”。一。987。§，。4。3、2inpmi；：；；笮≈o<4dl～一⋯⋯●t¨：¨IMtf·p3-c：m㈣■．rt2洲1㈣⋯t●to’Yt●^捕钟岫In’0¨’t～■■●n口^0呻，si㈣hn●u口■t-：洲44删■●12^0●^t1．t㈧lf●?●●●●j坩‘e0●tfL瞄f1．I■O●々，I“口$⋯ndjt删●d■●n㈨h"lm‘t‘’‘p■OCt船I”1t^■S■ltrt^，b}a●t，‘_：⋯h⋯"t■；；i霉==、≮Compound2{|⋯。1～40‘一一一。矗’、一。磊。⋯’⋯一磊7’⋯⋯⋯。：r’7：‘⋯～470⋯一～：，一⋯’一；品lZOiOe8-6口Z口ppm65 硕士学位论文n’J●、¨l：po●^‘■rL●8pl⋯⋯●⋯÷2e”I⋯⋯●d●u"⋯㈨"S删，●r●t●⋯⋯●～：¨，‘1㈣hte¨●-。‘"．●．I一"0#¨●●t々0⋯"t^‘6●●●”2，●￡●㈣●b■6⋯1u}●●^“I●e¨仲yflI‘⋯‘Ⅲ’ct¨O≈nt∞嗍1nl■rnI，t●rttn*t0t，九ATrr●，¨II，5‘■·●，Ilof’⋯q‘I"’●tPw¨fl7，^4州●●t●rf●●㈣C●’，JP^●■^Ct31十J4自t●MH⋯*?，■一c：cd“o¨’I‘t啊r，"●⋯hJ㈣口h口，篱；i；二!；蓉：嚣≯21’”“1⋯””～“⋯”Pu’㈧⋯n‘"：一}pu’’。【●r-·’一⋯：-：。，：。：：’5．●464．64．4j．2：=i!型；、弧。。i}≯，。雏蕊．。●、，‘．；一，．一∥耋毫’一熹ij引Comloound5；-_=}t一’一一t一_¨Zli：^tComoound5f；；。。镰～l『q饵鹱¨i}lll《_i．～S-々～，||；|}；l一．～I．_¨2口。。。≯。～．”～≯。一．k薹：砖餐麓i峨强携，，一?≈t；l{|一一B=L{}：=』～～3■≯～¨≈-=．．o；_．～+∥孽：_．一i焱≤．，卜；陵h|l，i≤；缸；。蘩r萝i．：¨．‰Z；．秘■、"，0i^寰．^jf一，增馐㈧隆雌螨辩．蠊，巍x 硕士学位论文附录Comnound56Izhd-zh-130306-460●14RT252T=+CElFullms【4950-500SO]10n■o0■。，?、，“91掣叩。，：。⋯26『2：。，33923512薪：。。帮I下篙：唧：67 硕士学位论文附录ii；●t●。j荨+Compound6h删}{|^i．1～州J⋯一一!’r⋯’：’”’r’’1+"t一，87，ls，。女，32=：=；i；g麓蕊☆_e●“H“一．j‘i．⋯一⋯。⋯猫⋯⋯一≥F’。忑⋯⋯⋯’“：；ii；{i慧帮簦：÷?!ComDound6；㈦；{^，_，ijJ、⋯一、，捧”叩^抻¨钾0∞曲¨雌球，””aom～虬三=：：：孵：¨J“¨J：J¨．im¨●c∞“；．¨"：t：1■-I●州坤蚰甜M咿，#m帕酏簿；。"e∞他。re。¨忡叭_三⋯wn呻俳H“m¨协．三州忡∥舳村I-枷州^-●．∞；--“_～．Fw竹。t”j：裹眦d●a¨8¨嚣¨卅鬈¨㈨骚2口_t．。。扎：i．．沁燃一；。；∥^一。■||。～^4 硕士学位论文附录塞l童{㈧i"ii鬻{霄l；；ii=j弘，!j；l，：i|i|』i{il-|㈠||⋯一1一r～’+⋯焉⋯’1：’；矗zhd-zh-130306-440114RT：242AV：1NL：146E6T：+cElFu／Ims【4950．5005q。Qc●苫：直《．皇；；E 一==攀i．．二=：=∥§，7I～}。y≥聂三二：蓉：、．．毫==：Compound7’+崩1⋯’。泓’‘⋯⋯一焉⋯：。磊’jif一；⋯。丽’⋯77’一磊一’一。焉’⋯’1’’i。⋯：’一磊?e=。；，jl～一=_■，一；-_；一，h一～一、K；：，。姨一遴℃{|10— 型型坠堕J墨———————————————————————————————————————————————————————一rm：：⋯。，、Compound9ji1日j鹾i：袁；1j≮{{i㈠-i{。～一丸～．i二⋯．=27。毒盖。==0；!：：}Compound97‘。试⋯”蕊⋯：’。⋯矿：’矗⋯一一≯”T⋯一西⋯⋯焉————————————————————————————————————————一～¨。ⅢⅢⅢ；Mm：=¨¨，¨¨m。Ⅲ。杆撼¨‘’暑筝兰Ⅷ譬。。{{m攀：Ⅲ。!；¨ⅢⅢ。¨纂潞茹¨，兰簪：基一～一，；；㈠，，：_：__¨㈠：：二：：==一川==¨=】；．3Z笼}|||一；q-；：¨0‘．_=_，t≥÷●o一铀。一一一。。，"。一一～～～～～～啪。Ⅲ，M；m—m㈨．"：．m¨咻mH砷p：■●懈州引⋯硝州”协神¨Ⅶ{[印岬Ⅲ嘶坤m仳"¨非慷jo一”制”；．，；。n¨“。。：～～～～Ⅲ一Ⅲ㈨㈨“～～协协Ⅲ～*一；；；。”。雌㈣馁墨：m㈨№峰‰ⅢⅢ№m。”。庙帅m。，Ⅲm～～一"；。：。m。¨wM。w。Ⅳ．∞Ⅲ“川m川ww札邮伸¨¨札讣”⋯Ⅲ伊w扣耐抽触岫村O4I¨e；l8i‘i￡ 硕士学位论文附录zh6-zh-130306-398●18RT：307AV：1NL：137E5T=+c曰Fullms【49．50-500SO]Wm十“：，：：豁}’。’：⋯。}。’’’：“。7⋯：1’7。．6。5，4．，⋯，3曹：；：；：霉嚣：==：二；j二；二嵩；e一；Compound10：。垂!§暑c皇《．主■i叱，^：i≤一l艾．"净臻；一。；l儿秘《||。；；-<蚤．～!{；=^，。．，；0。lAh引¨¨娘 硕士学位论文一一—!!墨——————_——————●———-●———_——————__---_——————-●—’●———————-——————————_———————●——————————————————一ii兰兰；!}爨；；i；i．i}1。l|．Compound10___________-I_________l_--_-__—————___————___—_—————-_—_———————_————————_———————————————————————————————————————————一一一zhd-zh-130516-502#21RT：O95AV．1NL：831E5T：+CESImsl5000-2000：00]603073啼m"!o"¨#嚣g臻器嚣”X0■毳-‘惜～一～～Ⅲ～m～～¨小～一m蛳～驰m刚．踯。。～。cm_1_“{，”””4。^．m：；："”KHb协pn聃附㈨五l}蚺M搿甾．嚣嚣黔嚣二兰三j}w淼器嚣≈．=一餐§㈠㈡；鹱簦．．强弱。uc_可c：直《。，!l辱一。芷 硕士学位论文附录Compound11嚣薰，二0j／罾誊营誊誊熹系弓毫l。渺!／耋衰iii鲢i：飞N刍彳夕。；＼∥b牿P曲∞IBB—l一“蠡蕊溢蠡漱蕊茹赢黼辨删嘲—蕊j弋、^fN0／7Compound11i㈡i?遥委釜；二蔓叠V一‘：onj，—⋯——————r—V⋯r¨一一1一⋯+f～一一T一一?一⋯一⋯⋯一一r柏18016014012010080604020ppm74#xPI抡‘Ptod0l№2(I】二051’T一。9．O§：■stX"Jl,I⋯c；o耕州F⋯F^目∞nB-P；IL。§t淞2々}～34f06"5"S￡o；v：料i：z二；sj116PM‘s#}I一9’∈l‘04H2}二徘￡s9．4^‘；，：h￡∞：1C17，{＆⋯P6，oj0w：6eoa⋯0￡●50⋯·j#Z99iK01：O；000￡=c⋯*i‘00：㈣cOC⋯’二、poDM一5一一一～一一一一一仕～蚶拈洲一w蜘州雌忭％弧一≯‰‰"百黑毽港絮∞盔l0n，0．¨，b”，"。锄～、．Ⅲ意Ⅲ■一一H；：!一一孙汀m{!}培∞"■斡～r雏一，会一一8一F一暑霹B一”oo℃．I一一一Ⅲ一～一～一一班"槲蠹|滤∞N 硕士学位论文附录zhd-zh-130516-426#35RT：604AV：1NL383E4T：+cEIFullms【4950-50050lp。，”柏12711811‘232431023252351337235323812■41221∞150350：：ii；i琏iii麓誓+：、蔓。：≯i!嚣强基美镰强10~^v’fj～，、“⋯7。’、、。一“一-：7“·一K一⋯～、i：{／|、：、、“4璃蜊灞旃逡；》遘、ji蟛管涵盔豳泓一：／叠．i．I畚。’’’’’’””。’7}⋯’11⋯’’‘⋯一‘～+一1。7．S7．06．56．05．55．04．S4．03．5}k、||、、／翟葛：嚣’g、誊；’高8蜀鲁嚣06d““奇。中“∞rComoound123．02．52．01．51．0ppm75日蠢一pi!●女■t暑《o^l茸-口Z”：：b“～“：MM，"P■、^、，‘ep、，ⅣL～～‘"，．．强_薯％K㈣1．{∞，～“州oi∽．， 硕士学位论文附录∞～州12W对秒前?渺fiii?V：}l|；⋯i。．!．。ii．i一；⋯。一⋯一一一I⋯㈦j{|⋯一日yo一Ⅲ⋯i；0S’6=弹q3C⋯⋯，t?，拳N}皑Ltj一一“}”Rt《ijJ0Pt9．e0㈣：，’：：2B0J女，L二x÷2．辑6#tj5x*370!■："0ti●3“h2zhd-zh-t30516-460#22RT：390AV：1SB：3135-169NL：168EST：+cEIFulIms『4950-500so]76 硕士学位论文附录蒌翳ih薹4{{㈣|一萨铲^c州l‘，㈣坼t⋯}_‘⋯=；!；o!=‰．t=洲t?¨￡一{}¨7々t；。．：0j!；’；；：=!“=“tlt1^}Od’佰fHlt，二’：*二^．’：，、_*z{”自flmo’～。?：*●～”tb删1’n=≈#!=¨⋯It!“·t}；I‘"r，j{l0●B却，in，i；a。：2nia●‘哪．{{lo、‘t’㈨¨1wl；l!}：；“。㈣¨￡tnl●⋯】；‘t!：：；T{l。{zn*l毗帮I^Y{。i!j；}“{{，‘·，¨．，}{’p一●3‘1．-if{l：；协，¨●∞坤■4；e{。o{翁‘Ⅲ嚣签㈣。’{’s：‘‘si4I2：pp；’。-’：。’：一!’。’r’”一：鱼．i一葺。63·￡．a^48．33，2pp_i=葛：；暑善：：1i；-‘●●薹芝；§；i|鼍j；：?il|i!j一!i一L，{、I^‘．。’：一‘+：’r’”i98i7iii；～r一5i4巍ii3。1⋯4j二，一__§‘．二二一8∥。⋯。e‘#一‘7一’焉’71’2f。一p二 硕士学位论文附录zhd-zh-130516-384●27RT：473AV："NL=164E5t+cElFullms【4950-500SOlV-l一；。￡"；Comz)ound143■帆I$Mci^L翻t●㈣t¨12t_■f●n⋯d‘ojⅢ㈨*1030t●’●㈣r‘^-■¨一p㈣t■¨dy，r?捕rI-012州卜R·t口’楚㈨●¨re0删3xTl(■^¨■●．‘●a钳●23i●，L^菡tt】¨●¨M224¨n"f●3々●●●pyb●●■‘”d●l¨●摊∞￡姑t黼f，t々¨fnnot■；Ⅵn^^O：￡^^Y¨№黼■|TT￡*；n·Ie5，tn¨I岬d52Il‘“●3●，●¨¨，蛇ltot●¨●‘，●t⋯，，一-e0．‘tv5●}e1■-，e聪coeHt★R盯l●38旷：≥。麓。一”≥≮。⋯。一5．1pp-渤⋯零挚㈣，．I』矗，量一⋯||j0『I侧10I』一⋯～0』liJ量一⋯1．：土舅上k～⋯～，7、⋯。6，=i书；?oi78’一”’一。4⋯．．3，：；=拳：===§⋯#“口EnEnE啊—bEH奠 硕士学位论文附录§兰主￡∈itijComloound1．1．4{零辩；霈．i穗ji：I：，I|W}!r；ij；；{|{}|{}i㈡：i。⋯一～。。。⋯一；．i。。一。．．．～。|：。!|l。．}J～．iJLJL～卜⋯⋯一▲一一tzhd+-z。h-。121。12慧漪k器蔷“’18““”3‘”““8”5㈨一～～Ⅲ～{喜一～。一～ⅢⅢ一～M—m。蝌，¨一●c巾川硼¨{，械¨”．≈，馑，n”n2H，H嚣罨羔mⅢM。愫mⅢm∞蛳川川州押n冲伯姓们札nmm州枷盖_岫Ⅳ--蛐州●■j曹；}一苜歪 硕士学位论文"，，扑，j。‘“q#气。m””¨“嚣?i：：。#7。器紫。#群“．4鎏寰l：。6,¨1。。e：=；j：i．ik，L●，一1‘：暑臻^：鼎；：：：：：s曼：耋ii‘||霎；ilComDound17；霉j?§f■』!!睁71习附录Compound17=-．tlI。。^，，碡营||；。殳誉一≯{|0、t签，。i载臻；罐ii；；』一警～一；p3”。．蕞：l_r5一L：F，8_tA一_、∞～"‘．"一-f；畔；．-2r蛩《引．：_：ii摅婷“io+；a●‘_●oH●口o●●_=I．=-／-=H^_，《．-；-，●●1．=．H．z"～_H、l～●c*__：￡．●：囊焉露馐 型型堕L一．．堕茎———————————————————————————————————————————————————————————————一rIJm辫罗}麓搿器⋯’苎⋯嚣心：篓翌{篓；i：耋i：：：iyo冀⋯”‘謦罐：yr。一‘：：i：：墨器。⋯l!⋯。’冀0mn“：：：：盏；一‰撼“”：嚣i吼⋯，■亨。、‘嗣㈣-pj“：，：61。量。．．冀鎏。。，。书o*●⋯4，：；；il4-●_弦!、lCompound18翳i{一囊|、j㈦i8lr廊一，：．，S5～"：h^一．2ait一釜靠一§咔鞲一，：．：S6v；m一墓．7 1+。町“”l4裟枷删冀1721501∞2AV1NL=898E5，52116}118f’217,1249L11、2H?27}2．3％2：}232．j曲237P21∞3《秘。，山一。．～一m；M一一～～～。～一m。～，札州。¨¨啡一叭“ⅢⅢH．：‘"～一q斗燕麓让虬2最警器鎏；．．0i●i●；．"■I●{7Ⅲ娜一一m¨卅mⅢ¨ⅢⅢmmm¨”mM。m。札wno，¨“．妻抽鸬M¨，n≈tm¨，n"眦≯j|；～一～一～一～帕w_；帷_暑¨玳札n儿¨一坩一坩。{|州-“一蛳痤卷鲤．始≯≯，h●"_tH；疆冀√囊■㈠二二㈡3e昙孟《●2葛—●叱 硕士学位论文附录i㈣⋯^i⋯Jull㈨●l-t雄p，_⋯●d‘口lYt，=t啦JOO呻tj々，’1●●⋯#⋯：I二⋯埔0¨t§IiJ埘b#}々．4"■‘4■"￡■计Cll?●"^t0㈨”^‘#"4no，j●t；●L^辩f0●e⋯t"l‘n^tlP⋯pYntt㈣‘nnli¨㈣∞㈣1rTI，¨t_；日j、nH10IM‘，f‘S¨”㈨15：Otqr40‘●竹^4aS3⋯57rfl2l¨，7州’．$"_p：31●●：，lCm期f‘’■·In●l翻12”14一‘j自，●M“⋯：}●～‘；te⋯㈨‘l^3啊‘t’¨口tn^⋯h囊!i：ii；，_，≯，i’一=。i¨。’70⋯。∥0。s!：：黧!!；i。l㈧!虬bCompound19。’’’Zlup_：¨：。㈣1j●_#2‘2u¨‘‘辅n￡Sp￡CT^l抽川⋯，2t；￡t⋯tq{}d"，⋯nCn，∞蚋t¨10fI，■●”pI¨e∞_∞015"l¨"●●e^；vz：l●I4卅々¨-tO^tIl"1．¨●2B●e0忡u43¨H^c3r∞I●●0●¨¨埘l●th^Il●0●郇yn’#0㈧o，mct¨㈩㈣Sl■：t脚S■jTrC^"02t0t$C‘3t¨⋯utd¨r々l{口、5±，0：3PI甜’ntl々{‘々i●一：，■4t州’E，啪≯24，^，州4s$●“1‘，；^’0ICmIp¨^一f■‘口a●"t■H‘n·13，3却r；，n一々¨S岫订，HOT■-vw￥’OdH+¨f0-●¨‘⋯5}●‘t^‘⋯■Compound19。7一’‘’_：‘：’*’⋯：f1’r．‘’’’’f々j1’|Y’’_tO§8B6●jl20Dn_一簪誓．=．．．：．=．=．=．=．==．餐。羚㈠|：．．．．殍一百一¨一k：■一：{；，，。}。●。。t，Ti^：；；，ll。。，j．。。～毳薯i：攫：一0口0，b嚆：1：u-1：q：^；_；-l^0．-■#_：¨。：gm■=t2““H；!鼍≯p：一+，-一{口{一；，．—■=’．iH^；n≈¨^_，Ij：；．u■￡日；_．dHT=■；一；，．二¨■；t}一r‘，一_一h¨一=，：*簟 硕士学位论文附录zhd-zh-121128-467姻Rt143AV：1NL160E6t+cElFullms【4950-500S01。t{li蠢{Coml：．ound20o譬矗奠盖《●三萼《，～．葛．1-fi≮uJ≮；。，u；j+；．h，r．1；磊落瓤一_0j#．一目澍灞糍一醯：；i。一o≈一，_；土蠢“。r；，；、；^～ 硕士学位论文附录：。’。r：7一一～11’’’一。⋯。1’‘’，tv。。v-：-．：t一”，：，：lZ●1●l806n4●2ap呻譬譬笔“2“翟-21121cFullms4950-50嚣0碥2“=1“2“6t+Ef∞l85EFK：=J酎瞄臼目国 臻；。I}，i鬈镯ij；l豫i嚣；}餮、|：iCompound21篱．；iI’"ll～≥‘i一。一≥”一_乏≥。_}’⋯‘一F一：’：～4：’=：一■⋯’_⋯～_一⋯⋯湍198=7i鬻j65ii誊卷jj3ii≥‘-⋯湍”。一一一e‘⋯。¨"“一～k一～，二=娃一_"，“：“”．!j。ijijjjii二iiii‰j，，●●，，；ji啪麓～蔓。}6一"H‘k￡56～钆2一臻；6一。一～一～；。。一～～～。～一m．m。鼍，m麓。。m。舯n州州，舯～～～柑一帅¨垭啐；；，伽叩畔mm坤”)i托¨h～。～～溉一Ⅲ～～～～。～Ⅲ。m。～～。～。m。；ld～。=：慧一M麓舞}l一～=翁ll。冀委＆“，孙扩莹争婷蕾 硕士学位论文附录zl坩-zh·12"213-483#25Rt433AV：1NL"55E6T+cEIFu¨msf49∞-SCO50l1m1叩116÷178}12”，2351267l2昝913’}23391370，；蹦#l【祥￡cl^l㈣■0■：，：c州⋯nus目d‘oI¨呲钟C13“I∞30f1’⋯FporI，h舯}p⋯㈨-，d"订／f竹卜e：±，"^cph{t●}9}■ltjd坩●●¨，e●A咖“‘TIO■t"I●‘‘0●■v#■¨．Bn^酶dt1￡口●I’，m：3^々OIn^．b{}●●邮yb‘^h}nfdll●■●P∽‘，$jK“t2●●rn●t⋯‘e口0t5SpISH州"M辅I’Ttk{t*特}tnhl垤445"，e‘rr●±，●}。5IfI●外，t删‘9●．er●●t竹rS’f■-iO：7州5‘5e’■§●0￡脚uP“!thnTd￡￡l々蚺}’0doi-5tE0-⋯13，hc¨li；tw‘4：⋯㈨■“j“e0一?一‘一‘：’。+。‘⋯⋯_。～6疆l—s-506．3ippm=l2：嚣嚣三i；ij?t!·；；．i＆：㈩筘”。。“t々’‘。⋯’一’ll¨98．7．，60：：黼；；i且酞』一iComlx)und22S43=嚣：；誉2=0==；矗茹；二二：t：二：二87io，t●融茧b强_雏疆，k臻t*^●^餐rj；。iH、_t__，lj■：￡t口it*^h，．}l=：】=1．i一。㈠：；；；『 嚣翟。21128。-4。515．。12*2R∽T：3删,82“=1“：46”6‘Il‘。L，—L：·。⋯．～羹⋯。}⋯．⋯一～。。e●__H，．绺蛾㈠孙。甜疆。～4．．*=，象谈㈡i㈡口FJ!，叠皇葛爰 硕士学位论文附录⋯gh￡’Y’㈨poI㈣M1m⋯⋯：●⋯Ⅷ4“t々l⋯㈨’J⋯j§r’’t，㈣⋯t●，Ⅷ⋯●，‘●■～WJ-0IPm㈨t●●e∞啦·f■H，●l"，5e^c㈣jTIBH⋯●●9●‘o●■●口．t㈣^ti≈●e‘1n●#"8●2In●h^t#●d■ye‘8h‘帕●Ji．9≈9H㈣wl¨2州n舢‘●￡lj●㈣^Yr■^■3■ln‘P‘，一，3，tn⋯44，?●，"”qP¨"，，r●"‘一；I●lnI●●{●●r●●t●w”●一，I，●v5⋯■¨4呲嗍ltPl●’^·c⋯2S●曲●●‘《t^⋯I，r-t“19unH4⋯¨■●●，々!i4●汪；j蔷；l⋯三一⋯～一L⋯——尘～渣一L⋯一一⋯i．：——一————，：一——．。一——————。。1．．一⋯——．姐——城一L——⋯一一———，——。．i一，1；2_⋯⋯、。tr⋯。。i≯?’。∥⋯‘≯⋯。≯，’，⋯；!：i!登j扪嚣”一Compound23=_．1／i^-^t．H一；l}i，{i●●l●^I一==‘=|"，，t、?譬E_、L●；_羚“¨止 zhd-zh-121128-483#26RT=443AV1NL117E6T+cElFullms【4950500SO]Compound23721稿72懈2LL旦’1．j1J【置，·口．．咒≈翟譬!。毪：2止79．1—311,1j33气13—54。．1卫》j．吩：嘤f萱2JI皿∞r≤；嚣：；奎箬：：：：3l寥m。：、《!?i强。∽扩}i餮!∥lii：2：耋：：Compound247i萋i651笺篓霸2弧i1i”日目目野巴睁E％一投一l}；■；l；强∞0；。I，一溢一擎●S=¨ 硕士学位论文翡l琴附录Com∞und24㈤⋯‰if；㈠㈠i；5l{，；。、⋯狮’。’：‘j品’、赫’、7’‘-搿’。：赢’，。∥⋯。。矗⋯⋯’磊。。⋯⋯。iiZ11d-Zh-12112鲁481#24RT：412AV：1NL=293E6T：+cElFullmsl49∞Ⅷ．so]501∞450nR}箸嚣嚣：三{薹船讣嚣巧坤嚣砼恤笼争鼍港”。滁¨。。Ⅲo；汀n吨时ntH，¨；；啪嚣堇三Ⅲ洲一￡h!，^w，r～唧黔茹．嚣芤嚣嚣‰龆蠹_赫：等，．，=_o：-：w=o=_=_=一霉，．IHf{-‰“=_#：；_．2_0¨；一Compound2411222672工1．E一麓uJ瓮三L拦山。。监L盥2．置三者盟～一鬯强慨：～蛩：篁_登z掣。。，。。懊签2气茹。日HHd引口U目目 硕士学位论文附录v#-Rx’；，-：●t⋯‘口uIes^Hnfs}￡cJ蛆由ttbtc’：e}：t铆胂t口‘t●；olv“n激、"15n"n，enI．，㈣“／h●⋯P㈣t¨‘t¨y“，*j·●12，Ⅶ·f}*“a●≈en{fId"til700^Ⅻ：3l，IHtIT■‘．●teIv￡’D●．I珏^僻●t18●●ttn402^^"：Inn‘o^●●4卸yH●htn^●jl●#●脚O旺赫l∽nI2t{ln呻t蚪●d‘t：^DlsH^Y”㈣tTTtt‘●-‘：，：n#j计5I伯I“r‘"，，，，75i-¨‘3I、?}or■q●●rn-●u_rE，fp·l●}●“5●：●；p：．，强CmI叽t^Pt0，anC13蚌2Sd曲r●●c口-⋯●¨，一‘t■li■Mdl㈣c#h辨ft-’}●765L．一}；；毒霉牟甍=：c—H日⋯v^-I：、■■CI}c×’1‘：≯“t㈣tm，￡‘^^l⋯l⋯t●⋯⋯‘⋯●‘o}⋯⋯㈨15●‘●I"●，⋯?tj■⋯々■●¨●俐2竹”¨拚?矗}饕k，：嚣；删sl删●"f●{●．●0ewr’l●：●懈■‘t⋯InI∞¨⋯nh¨，t‘09●■●rLI15h"●mtl±40々P^口啦锚n∞_‘0}¨．0{．0●‘t?：⋯p⋯td⋯*：71I^}：‘h^YtnC"‘t一‘7"．2●●f●180’●●呻i¨：4，toril‘‘．●rr’¨{^{叫5Srr，●p^、；㈩‘-●“t㈣“nmt7I5dnH】nQ{柏r●眦々’●-⋯r■一v■‘’=7⋯⋯^l●--IJ㈣7mCompound25．。2、～一，l，ppnCompound25川一l轧；引洲⋯缴ii∥|L 硕士学位论文附录zhd-zh-121220-495#22Rt414AV：1NL：422E5T：+cEIFUrlms【4950-6005014217225522512『J了释㈨”．6．8。§．}64．，PpmCompound26㈦L一一⋯～上一刖L～一—～√上一』934．詈|mIl一疆：¨j；．．jlk：。，～强《，；。一一≯甾∽㈡一⋯r．．=。㈠≯。：●●一。：蛆|；．㈡一l；；!U；^h一 堡主兰垡笙塞—————旦18a．z：hd+-z。h-。1．2，1。2。20。-4。#。2．7。：：品褊“。：1”。77265口HH日目口U日尉 硕士学位论文嚣：：枞。。：：寥!i≯!、’：；i’⋯涵。⋯⋯’赢⋯1赫lZO95：、；-≤j’Compound29附录Comf)ound29’’⋯一⋯一⋯T。11：。。一’T’’。604820ppJ—m一，l；●j；*～一二一^0日，‘I“^爱⋯}}^，me．∥ii=：===i¨，iHHHi．i¨ii“¨¨H¨i¨；；泌Aw；．-"．；，，；．建缴，|{。％H√”-mkJ2^0HtJ_}I．"口r：～r，；●●￡#：、2^rd__to“l。ll；；；：；．．．__i_Ⅵ，=¨il_d氆_；；，t一，一。一漆浓‘●}●H呻}m¨“!{．”●”5‘}；{SGi；■t；．n1Sn●，时婚^油LCSrOiP*0P¨"冲nⅣ“¨川却h∞仲”呻．：H坤啼“¨¨¨憎，磐7～癌，餐．釜驾：器爨：。§‘#：窜麓 硕士学位论文商d-zh-121130-659般1RT：O剧舟￡1NL3垃日t+cESIFUIms【5000-2000．00]l嚣：：3；并．5；嚣：i；：p．i5，：¨M3●12．Lpp‘12：11．氧『67。，tComoound30瞪∥=；i：：1’‘、’一。“’、I‘5”一‘’⋯‘’“’⋯‘5、¨曼～．，．，3墨一lpp●==00={：≈≈窑0：#：=2jo二j；二二矗。二⋯j二二≮∞oc日口c30《∞，眷一一m芷～一～～。，～一～～。～Ⅲ¨。m一～"一Ⅲ．一。。～鼍黧y。一。=耢一。嚣罂麓，¨嚣：釜努一^唑，一{～h-一，^～～一醍tv，l|：l^强-；f，Hi?lliii=≤kI～E●l+；；：|A一 硕士学位论文ii；。i?搿⋯⋯墨’⋯⋯I。6iI‘⋯’函。’l2i’蕊附录Compound30￡0ppm-_-__-_-___---__--__-——————————————。———————————_——————————⋯⋯一一⋯～～～一⋯⋯⋯一一⋯一一⋯——～一一一一一曲d·巾·121130-687#26RT：O．78AV：1SB：2011-014NL：422E6T=+CESImsJ5000-2000．oo]“¨。¨¨¨}M¨“J^，～J。jⅥ．“。¨．oH：“¨"”¨孔”oo。．”¨w，．蚶""q■越岫5川肿时：，茄岫“札∞兰；“呲玳，冲I●tP■I●t●f，■仙驴坤¨州¨¨m如融m埘坤虾¨_=坤∞H“¨仆雌．，{jl：!；e}-l十¨“*扣¨：¨”褂o¨¨呻m孙九。牡H叶。雌o”‘¨；¨～“"牿””，哺"一h。甜扣玎H^芷坤柚船m∥拈”刚¨，^呲一对椰埘批扣。。¨。一砩张。，o，㈧嘶枞川¨懈坩n烽仆“小吼“¨mw帅毫．帅槲^_忡_蠹蛰甏．●“¨2一蛩翌∞uc∞-c，丘《o，；∞一。叱 硕士学位论文附录""”Ⅳr．12嚣嚣r攀⋯，．器065赴Compound32f，’二、，{哥_|二五一j?”j二j一、。，一耋、’．t，、i，一·文／≯22●2●●18O16●140■2●t●O6●6l4●2日Dpm-L—————————-———————————————————————●——————————-—————●—————————————_-—-_——————————-●_●●_____--●_—_——————__________-____—————————————-——_—__H_●——_——__——_^_——————一⋯98^毒。吁，、●0jHo；靛琶r}tt-‘t．=Hh。一_i=‘一^^!iutH．¨j、一～，^撇酸 硕士学位论文附录才ld．才p121130-685#19AT：0聃^M1SB：1014NL：205E7T．+cESIms【5000-200000]，。”“。”。■￡li|囊1．，：心-l；|～，≯A羔：j!i--_--●__--___●-_____------●__-_-___-。--●。_。。。。。。。。。。。。。。。。。。‘‘。—————————____-__H__————————————————————。_——___--—_————_———————-————_——⋯⋯⋯一一一一⋯～一一。uc日口cjo《o，；∞一。芷峨|l：_==址。l■¨燃强l5，；．．|㈣h#．裂旺S 硕士学位论文瓢盏．洲一l己i{}l!{氆附录Compound33Compound3318IlE01口Ol?0l80ilO402apDill’’’r101．雒毫}=．"1l：；jj；ii=：．^H=n^；。o^，=t*j，，。；麓．．：㈡；．．÷．。h疑：，m，，●a&i．“∞¨¨¨¨iM¨JjooJ．．¨o；：”舭nJJ^w"扑虻轴¨o；lt。“I¨．．H脯，．．曼宅"∞薹{!!l“”㈣。=；m恤州川⋯时Ⅲ¨m印n¨”婶⋯巾¨m!iK"伯懈～～一～¨～一～一。一Ⅲ¨眦啪～"Ⅲm。一。椰一，口m}*＆：oH=!：。：乞蠢；；||一～_}一～～～“扣“忡¨¨nm¨，”一Ⅲ坩p帅州-栅枷耕o：^圣_⋯．，澎引1|；^t=“31纛一．_^_：^一。nEhnp：41一=*∑-¨；H～；_t#口l，t}8一“¨o“¨¨；Ⅲ"¨；；，*．"o螂』A。k蚺”¨H"””o●；0；7}ti2●，．i，_．M舯s钉坤舯：，“船硌^”ft：r^辩。帅毗∥P睁k岍。”n，，善饕玎臻彗芏未”}tH臻嚣嚣_Isppd；；i9}{；；11‘-：●BDl904lBI：y，d●r群虻*∞，¨：时¨，"¨c—n；，¨。cmp““；!n¨”，，。：；：!●n峙”}"●¨P■口●●^IPt净H“舯“搏蝉{；辨；，m肛时删州B2，‘”‘“舯％々，#H帅m引ⅢⅢw¨坤仆““n““卅Ⅲ伽P{：槲_一蛐蜊2一=_-n．-、=““☆Hc*～、√●_Ff^‘}-*．噩1-#_●ntKH^屯簪。㈡罄毪i，㈠ 硕士学位论文zhd．zh．121203*701#25Rt073舭1SB：3O130．19NL：5柏髓t+cESImsI∞00．200000]附录Compound34102蕾uc毋口c，直《。，；∞一。叱●=H麓，、鼍。U玎“小≤“r¨-^“∞¨*¨¨i”H』；，J∞。m^_u“””¨n{鼍“黧一"鼍二。～■冁孰茹羔品净：嚣兰mmm¨mmm．ⅢⅢmmm¨”；|m．一。mm，～∞一m。“．。一Ⅲm"浮一～一舞～～～～w．；婶n¨¨mn，¨⋯坩州一帅_巨__一“=t■r{；，，=强玎强强?i二强，一～一蛩誓，={一§．1“●．．●，一：|～，；；k￡℃2* 硕士学位论文附录t·cmIⅢi_、p4{}tq}mn￡#￡Ci^I抽tr0●·2{tt¨P⋯t”‘ed‘oIvtInc*9ntal40f¨●黼㈣⋯●{R0y珂，n，j‘●12／l，脚h“0●口‘lct㈣●㈣e0删；j㈣●If●￡0，●4口w2sl^：●rL心ttIi●’}lII，口㈨●，nn’ol{-●●dpyn#I#”n^4lI¨●H∞Es㈣ntt口¨●lb2女0n抖¨㈨⋯，Wd㈣ITTE^b15PI舯tnC|3#，-45．3¨’；lelS≈Sv，20"l^It。l：s^^川"‘"1tSt弹r5{rf■50z#，7一^，，B7#一：：i§0￡帕0plCp10—2，：§^’Hlhoi-州÷饥2SO_”yioD∞_uv’2{05dDw●i仆，h，lI●¨●¨Compound34小d-才卜121128-673#17RT=051肘1SB：2006-009NL：1A5日t+cESIms【5000-200000lCompound34鹫5．3点76369197321!!嗥21鸲三4蹄⋯～31．8．2。36。21⋯。绺!．豫1．，够．嗲?。l。L【—型■呷?。胖哗7．I．023。．6．．；720．4．11牛8103ooc日口c；D《o，}1日一∞E ⋯tet川￡-0I口■”t￥㈣，n帆洲z■”●●却⋯¨d¨_n；⋯pH’!；茹；篇；强；：冀警兰i：一眷囊■：牡13lf’O■●lfa●●et“．．●■．●r}Ⅻd"I●⋯In∞：}●⋯Itfb4￥⋯6，址●h●_，*Il￡e}⋯⋯nt，⋯n⋯t4n’‘n⋯m㈣㈣‘’3t●"“¨"E々7B“ft，．"’¨fI●⋯’ot‘{t}rr，●⋯⋯■一，a13函删-’55+“H．T‘’’“c⋯}‘●∞t■‘c●-⋯●Il●一n¨●w一⋯-“‘ph—t2¨●’：7．．电Compound37∽．A⋯⋯￡撒Ij”⋯1’5ii豢ij：j鞭疆分2，一，t，．ppu一———————————————————————-——————___—————__———●——-_——●———___——_-—●—__—————_———————一104澎j∥H一√-㈠∥¨¨rl_嚏t{；ijji!；l＆》r∥=．a。沁●●●●●●●●●●．●●●●●●●●●●．●●●●●●，|；!iH～f|0■；|一譬。-≤pi；二二，；；^一：；；㈠：；I=二二魄 硕士学位论文附录削-zh．121128-713#18RT：053AV：1SB：2007田10NL：932E6T：+CESImsl5000-200000]7283；菇：茹j骂澎嬲￡案矿’g拳!。l互：弑’：i!!；善§∞二≯!I氮．^j||；j盍“L。～?1“一=。～?⋯’⋯’⋯⋯。⋯一。一1“一198765．⋯，，．．～，。妻；摹；2i；妄簪麓：!：葺；{：事i105Compound38：0、⋯8c∞口c，正《掌譬里oE*-#|■；，节i．ii；，2”"qttv{‘．々t宣"r。、**tt～n2．r、#‘．1t一i8l一等～一8}‘‘．。一t”。；．-，L¨S6 硕士学位论文附录+高”⋯?～淼⋯一⋯描‘⋯1+Ⅲ⋯1。’矗：。ZePDmzhd．曲-121203-715#27RT=0．79AV：1SB：3O19-025NL：295E6T：+cESIms【5000-2000．00l106∞oc日口c30《o，；日一∞r 硕士学位论文牡荆属植物中芳基萘类木脂素研究进展摘要：芳基萘类木脂素是牡荆属植物中的重要成分之一，具有多种药理作用。但是这些化合物在植物中含量很低，我们需要多种途径对化合物进行合成和改造，获得和制备具有显著活性的化合物。本文从药理活性，全合成，以及生物合成几个主要方面对这类化合物的合成手段和研究热点进行综述，旨在促进对木脂素类化合物的研究和开发。关键词：木脂素，氢化芳基萘，合成途径，药理作用，综述ResearchProgressinarylnaphthalenelignansofVitexnegundoL．Abstract：HydrogenatedarylnaphthalenelignansisoneofthemostactivecomponentinVitexnegundoL．，Scientificstudieshavedemonstratedthatthesekindsofcompoundshasvariouskindsofactivities．Avarietyofbeneficialfunctionshasbeenreported，suchasanti—hypertensive，anti-hypedipidemic，anti-inflammatory,anti．oxidant，anti—tumor,andimmuno—modulatoryactivities．However"detailedsynthesisstudiesofthisseriesnatureprouductsarestillrare．ThisreviewsummarizesthelatestpublishedSynthesismethodsresearch，focusingonthebi01．andpharmac01．activitiesofthecrudeext．andknownconstituentsofarylnaphthalenelignans．KeyWords：Lignans，Arylnaphthalene，Synthesismethods，Pharmac01．activities，review1牡荆属植物中芳基萘类化合物的结构特征木脂素类化合物是牡荆属植物主要的特征成分之一。迄今为止，国内外学者从牡荆属植物中共分离得到54个木脂素类化合物(Scheme—1)，其中包含：芳基(二氢)萘类木脂素33个n’2，引，二芳基丁烷类木脂素1个H1，双四氢呋喃类木脂素15个瞄，q”，四氢呋喃类木脂素1个∞3，苯骈呋喃类木脂素3个旧1，苯骈二氧六环类木脂素1个。牡荆属植物中含有丰富的木脂素类化合物，尤其是芳基(二氢)萘类木脂素及其衍生物，衍生化结构较新颖，种类繁多，为我们构建新型木脂素化合物的提供了大量重要的资源。 硕士学位论文RIR2R3凡R，R6R7R8Vi(rofolalACHOH}毛OHOCH3OHHVitrofolalBCHOOHHOHOCH3oCH3HVitrofolalECHOHOCH3OHHoc屿OHHViU"ofolalFCHOOH0C屿OHH0CH，OHHVitexdomCHCHOOCH3OHHOHOCH3VitexdoinDOHCHOOCH3OHHOHoCH，VitexdomAClIOHOHoCH3HOHOCH3VitcxdomECHOHOCH3OHHOHoCH3ViⅡ"ofolalGViuofolalHRlR2R3R4R5R6HOHOCH3OHOCH3oC}}zOHHDetetrahydrocomdendfinOCH3OHHocH，0CH，HOHOCH，NcgundinsARIR2Rj6-hy&oxy-4-(4-hydroxy-3-melhoxyphenyl)-3-hydroxymethyI—CHOCH20H3,4Mihydrogen-2-naphthaldehydeR2VitedoinACHOCF【20HNegqmdinBCHzOHCH20HVitexdoinACHOCH20HRgVitecannasidesACHOCH20-GIcVitccannasidesBCHOCH20-GIcVitedoami．eBR3RdR5OCH3OHHR6R7RsHOHOCH3HOHOCH3HOHOCH3OHHOHOCH3OHHOHOCH3HOHOCH3HOHOCH3OHHOHOCH36-hy&oxy-4-(4-meqhoxy-3-melhoxyphenyl)-3-hydroxymethyl-7-methoxy·3，4-CHOCH20HOCH3OHHOHOCH3dihydrogen-(3R,4S)-2-naphthaldehydeVitexdoinOVitexdoinHoCa,CHOH捌一c—Icl日b-)1．OCH3OHHOHOCH3CHO吗c—o—c一‘f玛hHOHOCH3HOHOCH3CH36-hydroxy-7-methox一-(¨lydrophenyl)-3-hydroxymethyl-7—3,4-dihy&ogenCHOCH20HOCH3OHHOHH(3R，4S)-2-naphthaldehyde108 硕士学位论文R“)lyomr商nolCHzOH(+)-lyoniresinol‘3a-O’B．D．glueosidecH舻}D—GIWo辩R1R2f+)-pinoresinoIH(+)-diasynngaresinolH(一)-syfingar％inol-4-o岳D-glueopyranosideH(+1eucomminAHf-)isoeucomminAH(·)-pmoresinol4-O-B-DglucopyranosideHKbainaosideAOHr+)-1)aulowninHOH伽oH凡如It‘R7RlOHHOCH3OHHOHoCH3OCH3OHOCH3OHOCH3OGleocH3OHHOCl-13O-GlcoCHlOHOCH31)c-7-13OGleHOHHO(=l-13O-GIcHOCH2HOHOGleOCI-12oI口H2HOCH2()ISI-12出hydrod吐ydmdh_i任叫alcoholsecoisolaridresinol柚血摹hums。Scheme-I从黄荆子r"aexnegundoL．中分离的到的木酯素2药理作用2．1抗氧化2007年，Azhar-UI．Hao等人初步研究了negundinsB新木脂素类化合物的药理活性，结果表明化合物对脂质氧化酶(LipoxygenaseLOX)具有明显的抑制作用，IC50±S．E．M的值为6．25±0．5uMn⋯。Ono等人通过研究表明，黄荆子中的芳基萘型木脂素可抑制脂质过氧化，清除DPPH自由基，体外抗氧化活性较强，在铁硫氰酸盐抗氧化实验中n“，通过L一半胱氨酸对照，发现化合物具有更强的DPPH自由基清除效应(化合物浓度0．02rIl~f，DPPH浓度0．1mM)。Tiwari等n21报道黄荆叶中酚类化合物和木脂素类化合物的提取部位，通过捕获自由基、与金属离子螯合和抑制脂质过氧化而产生抗氧化作用。对自由基DPPH的清除情况进行评价，可以作为检测不同类型木脂素的自由码呱营．呱季．呱瞒HH 硕士学位论文综述基清除能力的标准，Eklund等n朝通过研究发现，木脂素的氧化程度不同或者骨架不同，对自由基清除能力亦有不同。其中，具有3，4一二羟基苯基片段的木脂素具有最高的自由基清除能力，而具有3一甲氧基一4一羟苯基片段的木脂素具有最弱的清除能力。除此之外，研究发现丁二醇结构能在一定程度上提高活性，而苄位碳氧化程度升高活性降低。芳基萘类化合物能够有效抑制脂肪的过氧化，是潜在的肝脏保护剂“4’151。2．2抗炎活性早在上个世纪，大量学者对具有芳基萘母核的化合物magnoshinin,thomasicacid及其衍生物进行了详细的研究，并发现此类化合物的抗炎活性较好。2003年Dharmasiri等“63研究发现，通过口服抗炎活性的木脂素类化合物50mg／kg，对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的抑制率为40．6％，布洛芬50mg／kg作为对照抑制率为63．2％，在卡拉胶诱导炎症的大鼠组中，浓度与药效呈剂量依赖性(r2=1，P<0．01)，EC驰20mg／kg；蚁醛诱导炎症的大鼠组和hot—plate组中，止痛活性同样呈现明显的剂量依赖性(P<0．05)，EC加30mg／kg；黄荆叶水提取物对多种诱因导致的大鼠炎症效果显著，实验证明，化合物对体内组胺，前列腺素的合成抑制作用呈反剂量依赖性。通过分离和结构鉴定，证明主要成分为6一羟基-4-(4-羟基一3一甲氧基苯基)3一羟甲基一3，4一二去氢一2一萘醛和VitedoamineA。2007年林珊等“铂研究发现黄荆子中的木脂素化合物6一羟基一4一(4一羟基一3一甲氧基苯基)3一羟甲基一3，4一二去氢一2一萘醛，对二甲苯诱导的小鼠耳廊肿胀、鸡蛋清诱导的大鼠足肿胀以及醋酸诱导的小鼠毛细血管通透性增加均有明显的抑制作用，同时化合物具有明显的体内抗炎作用，抑制率45．26％(p310niIl的光线照射反应15min，主要产物为18％tra／is和76％cis产物，而octaacid作为反映媒介后，85％trans和15％cis产物。通过反式产物，在光照条件下生成四氢萘，反应机理为自由基机理。Scheme．12反应机理如下(Scheme．13)：一害≮一书Scheme-133．6其它ChristopheDalZoRo，JohnyWehbe等人使用亚计量单位的FeCl3进行分子内的芳构化(Scheme-14)，研究发现，芳基取代基上的共轭基团越长，或者取代基的电子云密度较高，反应的产率较高，反之，几乎不会发生反应【441。妊唪2 硕士学位论文4生物合成R．F．．．e．．．C．．．．1a．．．．．．6．．．H．．．2．．0．．．．．．．．1．．0．．．．．to．．．．o．．．1．．—％—DCE∞℃Rt．2％84％Scheme-1452％<5％46％<5％芳基萘类木脂素生物合成途径复杂，中间产物众多，虽然上游的一些合成过程(例如苯丙氨酸到罗汉松脂酚)和下游的合成途径(例如去氧鬼臼毒素到鬼臼毒素和足叶草素)已经基本明晰，但是对主要关键上游环节的过程、中间产物、酶等仍知之甚少，整个合成途径中还有哪些反应可能是限速步骤也有待明确。芳基萘类木脂素生物合成的一些中间产物(如去氧鬼臼毒素)可在不同酶作用下，产生不同的产物，而且在不同植物中主要产物不同【45’舶’47J。此外，迄今为止芳基萘类木脂素生物合成的研究主要集中在细胞代谢化学和酶学水平的研究，基因水平的研究仍不足，而且已有报道集中在鬼臼毒素合成途径中罗汉松脂酚之前的上游环节，对于下游环节的研究还未深入。上游环节——苯丙素合成途径中的各种酶编码基因虽然已经基本明确，并可以在不同植物中实现克隆和表达，但是相关酶的构效关系的研究还处于起步阶段[48,49]。中间环节(例如从松柏醇到松脂酚环节)的DIR蛋白编码基因虽然已经可以实现体外克隆和表达，但是这一反应往往是一系列不同DIR蛋白调控的结果，而非受单一基因控制【50】，相关同源基因之间的调控关系值得继续关注。苯基氢化萘类化合物具有多种重要的药理作用，具有广阔的发展前景和巨大的新药开发价值，但是总的来看，对于此类化合物的研究还处在初级阶段，许多细节还不明确，如药理作用机制，反应机理，生物合成路径等等，在全合成领域，对化合物的手性合成．手性拆分将是以后工作的重点。而且随着基因和分子水平的研究继续深入，生物合成路径的逐渐明确，大规模生物合成的可能性将逐渐变为现实。[1】ZhengCJ，HuangBK，T．ngH，eta1．NitricOxideScavengingLignansfromVitexnegundoSeeds[J】．NaturalProducts，2009，72(9)：1627·1630[2]YamasakiT，KawabataW，eta1．TwonewlignanglucosidesfromthefruitofVitexcannabifolia[J]．JournalofNaturalMedicines，2008，62(1)：47—51【3]ZhengCJ．Anti—inflammatoryConstituentsandQualityEvaluationofVitex钾纠 硕士学位论文negundoFruits[D1．SHANGHAI200433CHINA：SCHooLOFPHARMACYSECONDMILITARYMEDICALUNIVERSITY,2010．[4】KazuyoshiK，AkiYKimikoT，eta1．PhenylnaphthalenecompoundfromthesubterraneanpartofVitexrotundifoliaandtheirantibacterialactivityagainstmethicillin-resistantStaphy’lococcusaureus[J]．JournalofNaturalProduct，2001，64：588—591[5]PrathanL，KaoruU，ToshioM，eta1．AntiestrogenicConstituentsoftheThaiMedicinalPlantsCapparisflaWicansandVitexglabrata【J】．NaturalProducts，2009，72(11)：1954—1959【6]AzharUH，AbdulM，ItratA，eta1．EnzymesinhibitinglignansfromVitexnegundo[J]．Chem．Pharrn．Bull，2004，52(11)：1269-1272[7】LinRW,ⅫLL，DuhCYeta1．NewlignansandcytotoxocconstituentsfromWikstroemialanceolata[J]．PlantaMed．，2004，70(3)：234-238[8】SridhaC，KarumanchiVR，GottumukkalaVeta1．Flavonoids，triterpenoidsandalignanfromVitexaltissima[J]．Phytochemistry,2005，66(14)：1707-1712[9]OnoM，MasuokaC，YasuyukKi，eta1．AntioxidativeconstituentsfromViticistrifoliaeFructus(fruitofVitexrotundifoliaL．)【J】．FoodScienceandTechnologyInternational，Tokyo，1998，4(1)：9一l3．【10】Azhar-UH，AbdulM，ItratA，eta1．EnaymesinhibitingligansfromVitexnegundo[J]．Chem．Pharm．Bull，2007，52(11)：1269-1272[1l】OnoM，NishidaYMasuokaC，eta1．LignanderivativesandanorditerpenefromtheseedsofVitexnegundo[J]．J．Nat．Prod．，2004，67(12)：2073-2075[12]TiwariOP,TripathiYB．AntioxidantpropertiesofdifferentfractionsofVitexnegundoL[J]．FoodChem．，2007，100(3)：l170_l176[13】EklundPC，LangvikOK，SjoholmRE，eta1．ChemicalstudiesOilantioxidantmechanismsandfreeradicalscavengingpropertiesoflignans[J]．Org．Biom01．Chem．，2005，3：3336-3347【14】YuYU，KangSY,ParkHY，eta1．AntiodantlignansfrommachilusthunbergiiprotectCCl4一injuredprimarycultureofrathepatoytes[J]．Pharm．Pharmac01．，2000，52：1163-1169[15】YuHY．TraditionalChinesemedicalcompositionfortreatinglivercirrhosis，liverascitesandlivercancer,anditsformulation[J]．FamingZhuanliShenqing(2011)，4pp．CODEN：CNXXEVCN102048858A20110511CAN154：599137AN2011：599522CAPI，ITS118 硕士学位论文综述【16】Dharma．siftMGJayakodyJR，Galhena13Ieta1．Anti-inflammatoryandanalgesicactivitiesofmature能shleavesofVitexnegundo[J]．J．Ethnopharmac01．，2003，87(2-3)：199-206【17】LinS，ZhangH，HanT，eta1．Invivoeffectofcasticinonacuteinflammation[J]．ZhongXiYiJieHeXueBao，2007，5(5)：573—576．【18】ZhengCJ，HuangBK，HanT，eta1．NitricoxidescavenginglignansfromVitexnegundoseeds[J]．J．Nat．Prod．，2009，72(9)：162％1630[19】ZhengCJ，HuangBK，WangYeta1．Anti-inflammatoryditerpenesfromtheseedsofVitexnegundo[J】．Bioorg．Med．Chem．，2010，18：175—181【20】SuksamramA，KumpunS，KirtikaraK，eta1．Iridoidswithanti—inflammatoryactivityfromVitexpeduncularis[J]．PlantaMed．，2002，68(1)：72-73【21】莫清华，周应军，向红琳，等．黄荆子乙酸乙酯提取物对HL一60细胞生长和凋亡的影响[J】．湖南师范大学学报(医学版)，2008，5(1)：14-16[22】封萍，周应军，韩家凯，等．黄荆子乙酸乙酯提取物对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响[J】．湖南师范大学学报(医学版)，2008，5(4)：13-15[23】陈雪莲，姜浩，曹建国，等．黄荆子乙酸乙酯提取物对人乳腺癌T-47D细胞及其裸鼠移植瘤生长抑制的影响[J】．现代肿瘤医学，2009，17(3)：432—435【24]韩家凯，焦东晓，曹建国，等．黄荆子乙酸乙酯提取物体内外对胃癌SGC．7901细胞作用的研究[J】．中国药理学通报，2008，24(12)：1652—1656[25】董巍檑，周应军，曹建国，等．黄荆子乙酰乙酯提取物对人宫颈癌细胞的抑制作用【J】．南华大学学报(医学版)，2008，36(1)：42-45[26]ZhouYJ，LiuYE，CaoJ13Ieta1．Vitexins，nature-derivedlignincompounds，induceapoptosisandsuppresstulnorgrowth[J]．Clin．CancerRes．，2009，15(16)：5161-516[27】ZhengCJ，TangWZ，HuangBK，eta1．Bioaetivity—guidedfractionationforanalgesicpropertiesandconstituentsofVitexnegundoL．seeds[J】．Phytomedicine．2009，16：560-567【28】GuptaRK，TandonVR．AntinociceptiveactivityofVitex—negundoLleafextract[J]．IndianJ．Physi01．Pharmac01．，2005，49(2)：163-170[29】杨亚滨(摘)，丁中涛(校)．黄荆中具有免疫增强作用的化合物叨．国外医药植物药分册，2006，2l(5)：211—212．】[苏泉，柳伟，黄荆子化学成分与药理作用研究进展[J】．浙江中医杂志，2010，45(6)：462-463[30】Chensw,WangYH，YanJ，eta1．Synthesisandanti—HIV-1activitiesofnovelpodophyllotoxinderivatives[J]．Bioorganic&MedicinalChemistryLetters119 硕士学位论文17(2007)：2091—2095[3l】杨毅，张成路，王拮，等．木脂素抗艾滋病病毒研究【J]．化学进展，2003，15：327．33l[32]AlessandroVMatteoZ．Synthesisof1-aryl-tetralinsand4-aryl-benzopyransbysulfoxide-mediatedbenzyliccarbocationcyclizations阴．TetrahedronLetters，2005，46：8723-8726【33]StevenRA，MichaelSL，SystematicStudyofBenzylCationInitiatedCyelizationReactions[J]．JOrg．Chem，1991，56(8)：2855【34]SayantanM，ManasiMJ，BasakA，AGarratt—Bravermanroutetoarylnaphthalenelignans[J]．TetrahedronLetters，201l，52：1183—1186[35]OrlandoP，JoaoS，VazPD，SynthesisofTetrahydronaphthaleneLignanEstersbyIntramolecularCyclizationofEthyl--P-·Azidophenyl·-2·-phenylalkanoatesandEvaluationoftheGrowthInhibitionofHumanTumorCellLines[J]．J．Med．Chem．2011．54：3175—3187【36】LeeER，KangYJ，ChoiHYeta1．InductionofapoptoticcelldeathbysyntheticnaringeninderivativesinhumanlungepithelialcarcinomaA549cells．【J]．BiolPharmBull，2007(30)：2394--2398【37]BellutiF，FontanaGLauraDB．Design，synthesisandanticanceractivitiesofstilbene-coumarlnhybridcompounds：identificationofnovelpmapoptoticagents[J]．BioorgMedChem2010，18：3543—3550[38]HuWP，YuHS，ChenYReta1．Synthesisandbiologicalevaluationofthiobenzanilidesasanticanceragents[J]．BioorgMedChem．，2008，16：5295-5302【39】DavidC．Harrowven，MarkBradley,LoisCastroJ，eta1．TotalsynthesesofjusticidinBandretrojusticidinBusingatandemHomer-Emmons-Claisencondensationsequence，D．C．Harrowveneta1．／TetrahedronLeaers42(2001)6973-6975[40】WangGYZhengCW：ZhaoGAsymmetricreductionofsubstitutedindanonesandtetmlonescatalyzedbychiraldendrimeranditsapplicationtothesynthesisof(+)-sertraline(2Wangeta1．Tetrahedron：Asymmetry17(2007)2074—2081【41]RichardRC，JudithDA，OlefinsTurnedAlkylatingAgents：DiastereoselectiveIntramolecularZr-CatalyzedOlefinAlkylations[J]．Org．Lett，2002，4(3)：395．398[42】SpencerX，LasafaD，HastaLeta1．Effectofstyreneoligomersonsyndiospecific120 硕士学位论文polymerizationofstyrene．EuropeanPolymerJournal，2003，39：2351-2357【43]AnandELakshmiSK，RamamurthyVControllingPhotochemicalGeometricIsomerizationofaStilbeneandDimerizationofaStyreneUsingaConfinedReactionCavityinWater[J]．OrganicLeUers，2007，9(24)：5059—5062[44】ChristopheDZ，JohnyW，VirieuxD，FeCl3一CatalyzedIntramolecularHydroarylationofAlkynes，C．DalZonoeta1．Synlett2008，No．13，2033-2035【45】KuhlmannS，KranzK，PetersenM，eta1．AspectsofcytotoxiclignanbiosynthesisinsusupensioncultureofLinumNodiflorum[J]．PhytochemRev,2002，l：37[46】FussE．Lignansinplantcellandorangcultures：anoverview川．PhytochemRev,2003，2：307[47】VanudenW，BournaAS，WakerJFB，eta1．Theproductionofpodoph，‘llotoxinandits5-methoxyderivativethroughbioconver-sionofcyclodextrin-complexeddeoxypodophyllotoxinbyplant—cellcultures[J]．PlantCell，TissueOrganCult，1995，42(1)：73【48】FerrerJL，AustinMB，StewartC，eta1．Structureandfunctionofenzymesinvolvedinthebiosynthesisofphenylpropanoids明．PlantPhysiolBiochem，2008，46(3)：356【49]AnterolaAM，JeonJH，DavinLB，eta1．TranscriptionalcontrolofmonolignolbiosynthesisinPinustaeda：factorsaffectingmonolignolratiosandcarbonMlocmioninphenylpropanoidmetabolism[J]．JBiolChem，2002，277(21)：18272[50】YousefzadiM，SharifiM，BehmaneshM，eta1．SalicylicacidimprovespodophyllotoxinproductionincellculturesofLinumalbumbyincreasingtheexpressionofgenesrelatedwithitsbiosynthesis[J]．BiotechnolLett，2010，32(11)：1739[51】ZhouYJ，TanGS，ZengGY．AnaryldihydronaphthaleneanditsderivativesChina：1990445A【P】，2005-10—13121 硕士学位论文攻读硕士期间主要研究成果及获奖情况学术成果：木脂素类化合物的活性研究进展，中南药学，已接收(2013年4月)获奖情况：孙明杰奖学金2012年5月 硕士学位论文致谢本课题是在导师周应军教授，刘苏友副教授的悉心指导下完成的，三年中课题的每一个进展都倾注着两位导师大量的心血。三年来，周老师豁达的胸怀，渊博的学识，刘老师严谨的治学，让我在学业上有所收获，一路向前，更让我在对待生活的态度上受益匪浅。无论是在学习还是生活上，两位导师都给与了我莫大的关怀和支持。他们对我的教诲，是我三年来最珍贵的财富，将让我受用终身。在此，谨向二位老师及家人表示最真诚的谢意!衷心感谢中南大学药学院曾光尧，谭健兵，谭桂山，马大友，李乾斌老师对本课题的指导和帮助!感谢湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室于正英，丁玉洁，湖南师范大学化工学院尹老师代测1H-NMR，13C-NMR，MS。感谢湖南师范大学医学院曹建国老师代测活性数据。感谢湖南三友制药徐谨，陈正收老师对本课题的指导和帮助。感谢课题组师兄师姐师弟师妹对我的支持与帮助。感谢所有帮助，陪伴我的朋友们，让我在困难面前无所畏惧，奋勇前行!特别感谢我的父母和妹妹，在我背后默默的支持和帮助!'