nyt406-2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程

'815ill中华人民共和国农业行业标准NY/T406-2000脱毒草毒种苗病毒检测技术规程Rulesforvirusdetectionofvirus-freeseedlingstrawberries2000一09一22发布2000一12一01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T406-2000前言为了有效地实施对脱毒草毒种苗质量检验和管理，规范脱毒种苗市场，促进脱毒技术的推广，实现脱毒草毒种苗病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外草毒病毒检测技术最新研究进展的基础上，结合当前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测和指示植物检测。本规程内容包括脱毒草毒种苗病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法租质量要求。本标准的附录A是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位:农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人:华崇钊、商明清、孙作文、李明立、徐鲁、杨勤民。 中华人民共和国农业行业标准NY/T406-2000脱毒草毒种苗病毒检测技术规程Rulesforvirusdetectionofvirus-freeseedlingstrawberries范围本标准规定了脱毒草毒种苗的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒草萄母本株、组培苗及脱毒草墓种苗的病毒检测。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。NY/T401-200。脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程3定义本标准采用下列定义。3.1脱毒草毒母本株由脱毒组培苗直接繁育并且不带本规程规定的检测对象、用于提供草幕甸甸茎繁殖苗的母株。3.2脱毒草萄种苗由脱毒草每母本株繁育并符合本规程规定合格标准的种苗。3.3病毒病株允许率脱毒草墓母本株及种苗繁殖田中病毒病株的允许比率。检测对象草萄轻黄边病毒(Strawberrymildyellowedge-associatedvirus,SMYEV);草萄镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus,SVBV);草毒斑驳病毒(Strawberrymottlevirus,SMoV);草毒皱缩病毒(Strawberrycrinklevirus,SCrV);抽样5.1脱毒草毒母本株抽样每株均需检测。繁育季节从待检母本株选取幼嫩叶片作为检测样品。每年检测3次以上。5.2组培苗的抽样5.2.1脱毒核心材料:每株均须检测。5.2.2扩繁组培苗:每扩繁一次随机抽取100"2写检测。5.3出圃种苗抽样5.3.，采用分层取样或随机取样等方法抽取样品，抽样数量见表1,中华人民共和国农业部2000一09一22批准2000一12一01实施 NY/T406-2000表1草毒种苗抽样数量标准表种苗总数量，株抽样百分率，%抽样最低数量，株(100006-10100>100003-5注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。3.2将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样，随机抽取10%的混合样品检测。6检测方法6.1双抗体夹心酶联免疫吸附检测法用于检测草毒轻黄边病毒、草幕镶脉病毒。检测方法按NY/T401-2000中附录A的方法执行。6.2指示植物检测法用于检测草毒斑驳病毒、草毒皱缩病毒、草毒镶脉病毒和草墓轻黄边病毒，检测草毒病毒的指示植物及症状见表2,检测方法见附录A。表2检测草毒病毒的指示植物及症状病毒种类指示植物指示植物症状草幕斑驳病毒EMCUC5叶片斑驳草幕皱缩病毒UC5叶片皱缩UCloUC6呈镶脉症状草毒镶脉病毒UC5叶片反转UC4叶片枯死，整株死亡草毒轻黄边病毒UC5叶片边缘逐渐变成浅黄7质t要求只要酶联免疫检测或指示植物检测呈阳性反应的均为带毒株。脱毒草幕母本株:病毒病株允许率是。。脱毒草毒种苗:病毒病株允许率簇5。%。 NY/T406-2000附录A(标准的附录)指示植物检测法A1萦育指示植物采用欧洲草幕(Fragariavesca)及兰毒(Fragariavisginiana)中的易感品种(见表2)，在防虫条件下将指示植物和待检样品分别栽植在花盆中，不断去掉指示植物的甸旬茎，使叶柄加粗，当叶柄直径达到2mm左右时嫁接。A2燎接小叶嫁接法:以待检样品成熟叶片(只留中间小叶下半部)为接穗，将指示植物剪去中间小叶作为砧木.劈接后置于20-25"C、光照充足的条件下。每个待检样品同时用两种指示植物进行鉴定，每个待检样品各嫁接3株指示植物，每株指示植物嫁接2-3个待检小叶，并设阴性对照和阳性对照。A3管理将整株盆栽指示植物罩上塑料袋保湿，每隔2^-3天换一次气，10天左右去掉塑料袋，并开始分期分批去掉指示植物的成熟未嫁接叶片，以促进幼叶的发生。连续观察症状30^-50天，记录指示植物症状。A4阳性判断根据指示植物症状，确定病毒有无及种类。在所有嫁接的指示植物中只要有一株表现典型症状，该样品即为阳性。'