海洋天然环肽leucamide+a关键片段的结构改造

'AcBnBocDCCDCMDMFDMS0DM臣DBUDⅡIEAEAHOBTHPLCi．B11I(勘缩写词acetylbenzyltert-Butoxycarbonyl1,3一DicyclohexylcarbodiimidedichloromethaneMN-DimethylformamideDimethylsulfoxide1，2-dimethoxyethane1,5-diazabicyelo[5．4．0Jundecen一5·eneethyl-diisopmpyl-amineethylacetate1-hydroxybenztfiazolehi曲performanceliquidchromatographyiso-butylinhibitorconcentrationatwhichenzymeis50％inhibitedlithiumdiisopropylamideMethyUN-BromosuecinimideN-methyl-morpholinePhenylpetroleumether罚fluoroaceticacidtetrahydrofuran乙酰基苄基叔丁氧羰基二环己基碳二亚胺二氯甲烷MN---甲基甲酰胺二甲基亚蕊甘酵二甲醚1，5-二氮杂二环【5．4．o】十一烯一二异丙基乙基胺乙酸乙酯1．羟基苯并三唑高效液体色谱异丁基(酶抑制剂的)半数抑制浓度二异丙基氨基锂甲基Ⅳ-溴代琥珀酰亚胺N-甲基吗啡啉苯环石油醚三氟乙酸四氢呋喃姒№麟m孙腿吼唧 摘要LeucamideA是从澳大利亚海绵Leucettamicroraphis中分离而得到的一种天然环肽化合物，由氨基酸及氨基酸衍生物组成：L一亮氨酸，嗯唑，L．丙氨酸，甲基嚼唑，噻唑，L一缬氨酸和L．脯氨酸。其中，甲基曝唑和噻唑的4，2一二杂串联的结构单元在环肽中是极其罕见的。研究表明，LeucamideA对人源细胞株HM02，Hep02，Huh7等显示了中等强度的细胞毒活性。据文献报道，很多含有杂环串联结构单元的化合物具有显著的生物活性，而且其活性和杂环的位置及其结构特点有关。如小菌素B17，用于临床的抗癌药物博莱霉素等。LeucamideA所具有的特殊的且罕见的噻唑一嗯唑串联结构单元引起我们的兴趣，围绕这一结构单元进行进一步的结构改造以发现高生物活性化合物具有重要意义。LeucamideA的首次全合成由本小组完成，并确立了合成噻唑一嗫唑串联结构单元的方法学。本论文围绕噻唑一噫唑串联结构单元展开了一系列的结构改造，针对不同的位点合成了大量的化合物。组建此类结构单元的化合物库。其中一些化合物在病毒方面显示了一定的活性。主要分三部分：1．针对化合物A的氨基部位(R3)进行结构改造。得到15个新化合物。其中8个化合物具有较好的生物活性。2．围绕具有较好生物活性的化合物6、化合物ll和化合物12分别通过对RltR2．R3三个部位进行结构改造得到18个新化合物。3．我们用五个长短不同的氨基脂肪酸代替LeucamideA中的脯氨酸和亮氨酸的二肽结构，合成了五个LeucamideA的类似物。期望通过结构改造能改变大环的构象，从而进一步研究构象和活性之问的关系。关键词：LeueamideA；天然环肽化合物；结构改造2 AbstractLeucamideA，abioactivecyclicheptapeptidecontainingauniquemixed4,2-bisheterocycletandempairconsistingofamethyloxazoleandthiazolesubunitwasfirstisolatedfromAustralianmarinespongeLeucettamicroraphis．LeucamideAischaracterizedbythepresenceofsevenaminoacidsandaminoacidderivedresidues：L·leucine，oxazole，L-alanine，methyl-oxazole，thiazole，L-valine，andL·proline．LeucamideAwasfoundtoinhibitmoderatelythegrowthofthethreetumorcelllinesHM02，HepG2，andHuh7．Manycompoundsknowntocontainbisheteroeyeletandempairhaveremarkablypotentbiologicalactivitywhichisrelatedwiththelocationandstructureofthemoieties．SuchasMceBl7，antitumorantibioticsBleomycins．Fromtheabove，WeshowgreatinterestinLeucamideA．Notonlybecauseofthestructureofcyclicheptapeptidebutalsotheuniquemethyloxazoleandthiazolesubunitwhichmaybecontributedtothefurtherstructuremodificationtofindhighlyactivecompounds．FollowingthefirsttotalsynthesisofLeucamideAaccomplishedbythisgroup，Severalsmallmolecularlibraryfocusingonthe4,2-bisheterocycletandempairsubstructurewereconstructedandsomecompoundsshowanti-virusactivityoninfluenzaA，HBVandHIVIN．◆Themodificationfromtheaminofunctionalityofthe4,2·bisheterocycletandempairsubstructure．15newcompoundswereobtained，inwhich8compoundsshowcertainactivity．◆Themodificationonthecompound6．compound1andcompound12fromthreevariouslocations(Rt，R2，R3)．18newcompoundswereobtained．3 Abstract◆5analoguesofLeucamideAwcrcpreparedbyreplacingthedipeptidePro—LeuofLeucamideAwithvariousaminoacidwith2-6carbon．YaoDeyong(materialscience)DirectedbyProfessorXingYachengandNanFajunKeywords：LeucamideA；bioaetivecyclicheptapeptide；structuremodification4 前言海洋微生物中蕴藏着巨大的、种类繁多的次级代谢产物。近年来，由于反向HPLC技术、光谱技术、手性技术的发展，从海洋微生物中分离得到了大量的化学结构新颖、生物活性独特的次级代谢产物。一些代谢产物已经作为药物研究的先导化合物或者作为生命科学研究的药理学工具。尤其重要的是，从海洋微生物中发现了一系列高效、低毒的抗肿瘤化合物，目前已有一些化合物进入临床前或临床试验阶段。如以DidemninB为代表的海洋环肽已作为抗癌药物进入临床试验¨】；从海兔Dolabellaauricularia分离得到的Dolastatin10及Dolastatinl5合成类似物LUl03793均已进入II期临床眈3；从加勒比海海鞘(Ecteinascidiaturbinate)获得的生物碱Ectcinassidin743(ET一743)已经入III期临床，可望近年首先进入欧洲市场¨1；令人振奋的是，镇痛药Ziconotide(源于芋螺CoMsmagnus的肽类毒素)已成功通过III期临床，并获得FDA批准上市¨1。海洋微生物含噻唑(嗯唑)一噻唑(嗯唑)串联结构单元的环肽是海洋天然产物中最重要的化合物之一。它是一类分子环骨架上含有噻唑啉、噻唑、嚼唑啉、曙唑等五元杂环的海洋天然环肽。在过去的的十几年中，从海洋微生物中分离得到的含噻唑(嗯唑)一噻唑(嗯唑)串联结构单元的环肽主要有含三个嗯唑环直接串联结构单元的环肽、含嗯唑一噫唑串联结构单元的环肽、含噻唑一嗯唑串联结构单元的环肽和含噻唑一噻唑串联结构单元的环肽。这些环肽由于c端和N端未离子化，使得它能较容易穿过细胞膜，大大降低了体内酶解的速度，提高了生物利用度，更重要的是它们呈现出很强的抗癌、抗病毒、免疫抑制性及消炎等生理活性，有些已经成为药理学研究的工具化合物。它们特殊的杂环串联结构已经引起药物化学家和合成化学家的广泛关注。¨41。1、含三个嗯唑环直接串联结构单元的环肽5 目前，从海洋微生物中分离得到的含三个噫唑环直接串联结构单元的环肽主要有Ulapualidcs、Kabiramidcs、Jaspisamides、Mycalolides、Halishigamides[8-93(图1)；它们结构复杂(例如UlapualideA的绝对构型在分离得到17年后才得以确定¨01)，而且在自然界中极其罕见，从而弓起了合成化学家和药物化学家对它们的浓厚兴趣¨¨。RlR2R3R4R5R6R7R‘R9UlapualideAIaspisamideAHalichondramidcHalishigamideAH0OoHO0H0NH2OHMeMoMeB-MeOMeAcMeB．OMeHMcHB．OMeHMeHB．OMeHMeHKabiramideACONH2McOHHCH20Ha-OMeOMeMcKabiramideBKabiramideCKabiramideDKabiramideECONH2McOHHCONH2MeOHHMeOHHCOCHsMeOHHMcMeⅡ-OMeOHMco·OMeOMeMcMeU—OMeOMeMca．OMcOMeMeOHC、6O●■)≥J氏№qr∥胁飞。钞～：。麓巳；％～ 前言Figure1Structureoftrisoxazolemacrolides从功能上看，肌动蛋自是这类大环内酯(拟肽)的靶点，它们对肌动蛋白(actin)具很强的亲合力和专一性，显示了很强的纤丝切割(filamentsevering)和单体隔绝(monomersequestering)活性，使F一肌动蛋白(F．actin)解聚，干扰肌动蛋白丝的动力学过程，最终导致细胞死亡¨剀。最近，研究肌动蛋白与KabiramideC的复合物的x一射线衍射图像发现：(1)含三嗯唑结构单元的大环内酯(拟肽)与肌动蛋白的亚区域1(subdomain1)相互结合，脂肪链伸入肌动蛋白的亚区域1和亚区域3(subdomain3)之间的深度中央裂隙；(2)大环内酯与肌动蛋白凝溶胶蛋白(Gelsolin)竞争相同的肌动蛋白结合位点；(3)这类大环内酯毒素切割与覆盖肌动蛋白丝的作用机制与胍动蛋白凝溶胶蛋白的机制类似¨引。基于含有独特的三个嗯唑环直接串联结构单元的大环内酯与肌动蛋白相互作用的原理，设计相关类型的类似物，对治疗肿瘤转移、胆囊纤维质生成、组织梗塞、青光眼以及其它由肌动蛋白细胞骨架调节功能失常引起的疾病将起积极的指导作用¨钔。这类环肽显示了极强的细胞毒活性(部分化合物的活性如表1所示)，可以作为新一类抗癌药物研究的起点。7 IC50I_tg／mL(invitro)L1210routineleukemiacellKBhumanepidermoidcarcinomacellTable1Cytotoxlcityoftrisoxazolemacrolides2、舍嚼唑一嚼唑串联结构单元的环肽从菲律宾群岛采集的海鞘Diazonaangulata中分离得到的DiazonamideA‘151是不常见的卤化环肽。结构上，它含有嗯唑一嗯唑串联结构单元、吲哚单元和双环缩醛胺结构单元。功能上，DiazonamideA对人源结肠癌细胞株和鼠科黑肿瘤细胞株的体外Ic50值均小于15ng／mL：进一步研究发现，用DiazonamideA处理过的细胞停留在细胞周期的G2／M阶段，细胞的纺锤丝和分裂间期的微管网严重损坏；DiazonamideA与Dolastatinl0一样，能非常有效的抑制微管的组装(tnbulinassembly)和微管依赖的GTP水解机制(tubulin--dependentGTPhydrolysis)‘16]。DiazonamideA独特的化学结构和罕见的活性特征引起许多合成化学家的浓厚兴趣‘17]。Harran等人成功合成了1(图2)，但细胞毒活性较差，而且非常不稳定。于是，化学家们重新确定它的结构，并最终确定结构为2(图2)，完成了合成工作。目前，DiazonamideA以及它的衍生物正在进行深入的药理学研究‘18]。8 №淖执邓暾Figure2StructureofDiazonamideA3、含噻唑一噻唑串联结构单元的环肽最近Nagai等人从海绵Halichondriajaponica中分离得到菌株BacilluscereusQN03323，将菌株发酵培养，从中分离得到YM一266183及YM一266184‘19]。它们对革兰氏阳性菌(例如MPSA，MRSE，VRE)有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌无抑菌活性。它们的结构如图3所示：Y”M-“2e6”1E4昌：器：宅：M“e,麓常ioORI-洲．R2·啊·R．^lcPo,odnHRt·H．R2·H．RI·OH,R．-H¨啪。由P2Rl-^凡-H．两一R‘-OFigure3StructureofYM一266183．YM一266184andMierococcinP从结构上看，大环内含有噻唑一吡啶一噻唑串联结构单元及一些由特殊氨基酸衍生而来的噻唑结构单元；侧链含有吡啶一噻唑一噻唑串联结构单元；该结构与从东非土壤中分离得到的MicrococcinP【201及从微生物Planobisporarosea中分离得到的GE2270心¨极为相似。这类化合物结构极为复杂，到目前为止，他们的结构未能明确确定心们。从功能上看，它们直接作用于核糖体来抑制细菌蛋白合成，达到抑菌效果‘22]。目前，从对这类环肽进行的药理学研究得到的结果看，它们表现出的独特的生理活性与噻唑(嗯唑)一噻唑(嗯唑)串联结构单元有关，因此该结构单元是非常有效的药效基团，围绕它进行深入的药物化学研9 究，必将找到药理活性性质更加令人满意的先导化合物。4、含噻唑一嚼唑串联结构单元的环肽LeucamideA心33(图4)从澳大利亚海绵中分离而得，含有L一亮氨酸，嗯唑，L．丙氨酸，甲基嗯唑，噻唑，L一缬氨酸和L．脯氨酸。甲基噫唑和噻唑的4，2一二杂串联的结构单元在环肽中是极其罕见的。LeucamideA能抑制细胞株HM02(G150=5．2gg／mL)，HepG2fGIso=5．9ttg／mL)，Huh(G150=5．1Itg／mL)。Figure4StructureofLeucamideA尽管LeucamideA的生理活性未受到关注，但其特有的4。2一噻唑一嗯唑串联结构单元与已知活性化合物相似而引起人们极大的兴趣。综上所述，海洋微生物独特的生理活性产物已成为重要的海洋药物资源，越来越受到重视。它们生活在高盐、高压、低温、低照的特殊环境中，形成独特的生理活性产物。相当多的海洋微生物与其它海洋生物处于共生、附生、寄生、或共栖关系，可以产生各种各样的物质(如抗生素、毒素、抗病毒物质等)以利于宿主生长代谢或增强宿主的抵抗能力。因此，海洋微生物的代谢产物是药物研究最重要也是最好的天然化合物库，对它们进行深入的药理学和药物化学研究，必能找到高效、低毒、结构相对简单的小分子药物。10 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造第一章LeuoamideA中关键片段的结构改造一、研究背景LcucamideA从澳大利亚海绵中分离而得，含有L一亮氨酸，噫唑，L．丙氨酸，甲基嚼唑，噻唑，L一缬氨酸和L．脯氨酸。甲基噫唑和噻唑的4，2一二杂串联的结构单元在环肽中是极其罕见的。LcucamideA能抑制细胞株HM02(OIso=5．2Ixg，mL)，HepG2(G150=5．9Itg／mL)，Huh7(GIso=5．1l_tg／mL)。类似曝唑和噻唑4，2一二杂串联的结构单元在多肽MicrocinB17中也存在(图5)。实验证明，细菌DNA促旋酶(该酶在DNA复制过程中起主要作用)是MicrocinB17的靶点；细胞经MicrocinBl7处理之后，细胞DNA合成停止，最终导致细胞死亡；该过程中，MicrocinBl7中的噻唑一嗯唑串联结构单元在抑制细菌DNA合成过程中起了重要作用[243Roy等人在研究MicrocinB17及其类似物抗菌活性过程中发现多肽的活性与杂环串联的类型，串联杂环的个数以及串联杂环在多肽中所处的位置有关[24]e用于临床的抗癌药物博莱霉素(图6)也具噻唑一噻唑串联的结构单元，该结构单元被认为直接与DNA／RNA的特定部位结合，在抑制DNA复制过程起关键作用‘2630LeucamideA引起我们极大的兴趣，这不仅在于它具有的特殊的大环结构，而且它所特有的4，2一噻唑一嚼唑串联结构单元对迸一步的结构改造以发现高生物活性化合物具有重要意义。m—ama*1一一扣《门扮童一a带№髻刍曼碍吼髻》卫、■k∞chBl7Figure5StructureofMlcrocinB17ll 第一章LcucamidcA中关键片段的结构改造Figure6StructureofBleomycins本课题组首次完成了对海洋天然杂环环肽LeucamideA的全合成1"26]构建了合成4，2一噻唑一嗯唑串联这一罕见的结构单元的方法学。本论文旨在围绕LeucamideA中含有的独特的4，2一噻唑一嚼唑串联结构单元展开一系列的结构改造和结构修饰，设计合成新的化学实体(NCE)，在病毒水平的活性筛选结果表明，这种衍生化策略成功地产生了天然产物LeucamideA所不具有的生物活性，部分验证了我们的初始推测。二、基于Leuoamjde^中关键片断的结构改造LeucamideA中所含噻唑一嗯唑双杂环串联结构在环肽中是极其罕见的，也可能是它产生生物活性的主要原因。因此，继本小组完成其全合成之后，我们展开了围绕这一结构单元的结构改造和新化合物的合成。构建了含有此类结构单元的小分子化合物库。基于前文所述，这类结构产生生物活性的可能机制主要是因为和某些DNA／RNA特定部位的结合。所以，所产生化合物的生物活性测试主要集中在一些细胞水平的抗病毒药物筛选模型上，如乙肝病毒(HBV)，流感病毒(InfluenzaA)等和一些与病毒复制相关的分子水平的筛选模型如HIV整合酶、HIV蛋白水解酶等。1．围绕化合物A的结构改造LeucamideA中噻唑一曝唑双杂环串联结构单元如Figure7所示。它含易于修饰的氨基和羧基。我们起始的结构改造主要从R。，R：这两个部位进行。首先根据全合成中发展的杂环串联的合成方法制各了大量的中间】2 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造体A‘2们，在N上引入不同的酰基官能团，产生N一酰化的小分子库。圃m殳文#～文从儿文心一{鞋化l。。叉争S酶ee-。。铲苦。m手砂一博。。尺伊确。。。天6⋯伊扩“峨}R2=H．M0Figure7methyIoxazoIeandthlazolesubunitN上酰化所选用的酰基官能团包括一些易得的直链酰氯、羧酸，含有不饱和双键的酰氯、羧酸，取代的芳环酰氯等以论证结构的多样性。N一酰基化方法主要有三种：1．1酰氯直接酰化法№l-鸭+“■蟊矿A将化合物A(1eq)与NaHC03(10eq)混合溶于H20／EtOAc(体积比1／4)中，渐渐加入酰氯(1．Seq)，反应结束后用EtOAc稀释，水相EtOAc萃取。合并有机相，饱和NaCl溶液洗，MgS04干燥，浓缩。混合物经色谱柱纯化，得产品。用此方法得到7个化合物。1．2混合酸酐法 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造将酸(1eq)溶于CH2C12中，冰盐浴冷却，数分钟后，依次加入N一甲基吗啡啉(NMM)(1．5eq)，氯甲酸异丁酸酯(C1COO‘Bu)(1．2eq)，之后加入化合物A(1eq)。逐渐升至室温，当反应结束后，用水淬灭反应。EtOAc萃取，有机相饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化，得产品。用此方法得到3个化合物。1．3直接偶联法^将A(1eq)与分子筛，HOBT(0．3eq)混合，加入处理DMF，冰盐浴条件下加入酸，后加入EDCI(1．5eq)。反应体系逐渐升至室温。反应完全后，体系用大量EtOAc稀释，有机相用适量水洗数遍，饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化，得产品。用此方法得到5个化合物。通过以上三种方法，共获得含有4，2一噻唑一嗯唑串联结构单元的N一酰化化合物15个。化合物活性测试结果如表2所示。14 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造Table2Bloactivityofcompounds1-15 第一章LeucamidoA中关键片段的结构改造从以上筛选结果可知，化合物2，3，9，14对抗甲型流感有一定地抑制作用。其中化合物3和化合物9达到了中等强度的活性。化合物6对HIV整合酶具有一定地抑制作用。化合物13对HIV蛋白酶具有一定地抑制作用。化合物1，11对HBV的DNA复制过程具有一定的抑制作用。这些初步筛选结果从一定程度上说明了含噻唑．嗯唑杂环串联结构单元的化合物具有的抗病毒活性可能是与DNA特定区域结合所引起的，这部分验证了我们的假设。在此基础上，我们有针对性的以上述具有一定活性的化合物为导向，进行进一步的结构改造。我们主要以化合物6、化合物11和化合物13为起点，针对HIV整合酶和HIV蛋白酶两个模型进行了一系列的结构改造，以期获得高活性化合物。2．围绕化合物6、化合物ll针对HIV整合酶展开结构改造艾滋病病毒HIV自身能产生三种酶(即具有催化作用的蛋白质)一一逆转录酶、蛋白酶和整合酶，以帮助HIV病毒突破人体内的免疫防线，复制、感染、生存下来，并破坏人体的免疫功能。其中，整合酶负责HIV病毒将其遗传信息插入宿主细胞的DNA中，再不断复制、感染‘2730因此，寻找对整合酶功能有抑制作用的小分子化合物，在抗HIV病毒药物研究中备受关注。2．1围绕化合物6展开的结构改造从化合物6的分子结构中可以看到，它的R位为一个异丙基，此基团体积为中等大小。我们想通过改变该位点的空间大小来看其活性的变化。因此，引入了体积大的基团苄基和小体积的氢原子来代替异丙基得到化合物16和化合物17，并进一步对其进行结构修饰得到系列化合物来看其对HIV整合酶是否具有抑制性。16 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造∥≮≮≈19化合物18、19分别由化合物16、17在乙酸乙酯和水(4：1)的体系中，在NaHC03作用下和苯甲酰氯反应制得。化合物16，17分别以苯丙氨酸和甘氨酸为起始原料参照噻唑一嗯唑的合成方法制得，具体合成路线如下：瞄“上瞄上g砭一z醛一辞。。～《。OH998卜oEt严1HlBb—Jo1Bh1BReactionsandconditions：a：Boc20，NaHC03．H20／Dloxane(1：1)：b=NMM，CIC00‘Bu，DME，NHa；c：Lawsson。isreagent．DME；d：3-Bromo-2-oxo-proplonlcadd酬哪ester．DME；e：LIOH，EtOH／H20(4：1】，tNMM．CICOOiBu．L*threonlneMeesterHCI；g：D^STKHCOs-CH2cb；h：DBU。BrCCl3．CH2C1211_F^CH2C12B0020保护的苯丙氨酸在NMM，CIC001Bu的作用下形成酸酐，接着17。扩≯沁≮)≯孙。_l 第一章LcucamideA中关键片段的结构改造通入氨气，得到酰胺16b。16b在Lawesson试剂作用下室温反应得到硫代酰胺，再与溴代丙酮酸乙酯直接作用生成16d‘28]o16d在LiOH作用下水解后，与苏氨酸甲酯盐酸盐发生偶联反应得到16f。然后通过DAST成环得到169。DBU脱氢得到化合物16h，随后在TFA作用下脱去N-Boc保护基得到化合物16。化合物17是从甘氨酸为起始原料，按照与化合物15相类似的合成方法制得。然后我们针对化合物16和17的氨基衍生化，合成以下一系列化合物：2．2围绕化合物11展开的结构改造芳香性13一二酮酸类化合物是一类最具治疗潜力的HIV整合酶抑制剂‘2射。其中，1,3一二酮酸结构单元是抑制HIV整合酶活性的主要片段。18 第一章LcucanfideA中关键片段的结构改造因此，我们以化合物11为起点合成含B一二酮酸类化合物。合成路线如下：抖№一他。卓；埯’鬟埯8丫≈儿臼0：L≮2e27Reactlora‘ndcondFIIonst口MeMcd．UBH4,THR-231C；k(cocDz．DMSO．EtaN．CH2Chc：tBuONa．(C02Me)2．THF-DME(1：")；d：1NNeOH．"IHF--CHsOHll：1)首先，化合物1l在McMgI，LiBH4作用下还原得到化合物26a(30]o然后经过Swern氧化得到化合物26b[31,32]再在‘BuONa作用下与草酸二甲酯反应得到化合物26<333。化合物26再在NaOH作用下水解得到1,3．二酮酸化合物27。3．围绕化合物12针对HIV蛋白酶展开结构改造根据化合物活性筛选的结果，化合物12对HIV蛋白酶显示了中等强度的抑制活性。我们以化合物12为先导结构，在噻吩部位引入吸电子和给电子的基团设计并合成了化合物28—33。具体合成路线如下：Scheme11坠．ohchRCOCI。¨日lcoaEtOAeJH20(4：I)29RI=CH330R2--CsHe¨～ 第一章LeucamideA中关键片段的结构改造Scheme2既敲⋯er☆卧首先将化合物12溶于CH2C12中，在TFA作用下脱掉保护基。然后在NaHC03作用下分别和乙酰氯、苯甲酰氯得到化合物29和化合物30。化合物A和RCOOH混合后，溶于DMF中在EDC、HOBT作用下发生偶联反应得到化合物3l、化合物32、化合物33。对以上化合物进行初步的活性筛选，它们对HIV蛋白酶和HIV整合酶没有明显的抑制作用，进一步的工作正在展开中。20 第二章LeucamideA类似物的合成第二章LeucamideA类似物的合成一、概述前面已经提到，LeucamideA是一种含有噻唑一嗯唑串联结构单元的海洋杂环环肽。对其进行分子模型(图8)的研究表明：噻唑和甲基嗯唑串联结构单元中的两个杂环在同一平面上，而且该结构单元与大环平面近乎垂直；缬氨酸一脯氨酸结构单元也与大环平面垂直；而亮氨酸和丙氨酸与大环平面几乎相平行。前文所述，围绕噻唑一恶唑串联结构单元衍生化合成的化合物产生了天然产物LeucamideA所不具有的生物活性，这可能和噻唑一恶唑串联结构单元的空间构象直接相关，为进一步验证这一假设，我们用不同链长氨基脂肪酸代替脯氨酸一亮氨酸二肽结构单元，通过调节环的大小，来考察类似物与LeucamideA的活性差别。Figure8MolecularmodelingofLeucamideA 第二章LeucamideA类似物的合成我们通过五种不同的氨基脂肪酸合成了五个链段长短不同的LeucamideA类似物。LeucamldeA37n=138n=239n=340Ill=441n=5二、Leucamide^类似物的合成中间体化合物34的合成按照LeucamideA中的方法制得：氨基酸甲酯的合成：¨S．DMFH2N}妇H—SO赢C12_,Me—O-HH2N¨cD。№．HCIHGIH2NF讳00Hi而—4H2Nf☆000№以氨基酸：甘氨酸、2一氨基丙酸、3一氨基丁酸、4一氨基戊酸、5一氨基己酸为原料在二氯亚砜和甲醇的作用下生成相应的氨基酸甲酪盐酸盐。然后，化合物34分别和五种氨基酸甲酯盐酸盐在EDC．HOBT,DIPEA，Molecularsieve作用下发生偶联反应得到化合物3s，后经LiOH知戈扩№ 第二章LeucamideA类似物的合成水解得到化合物36，然后在TFA下脱N．Boc得到化合物37。化合物37在HBTU，DIPEA作用下发生分子内偶联得到最终产物。具体合成路线如下：《k磐35R叼●nband∞rIdm∞：EHcINH2CcHdI_coOue．EDC．HO朗：‘^n∞I嘶叫evo$，DMF；b：UOH．MoOH，HaO：c．11．^，CH2Cla；d：HBTO。纠PF-．K4Am叫e伽l叫稿e惜．DMF我们对LcucamidcA类似物和LeucamidcA的氢谱数据进行比较，比较结果如下表(Table3)：”p一以娼．：娟n∞∞∞甜铊 第二章LeucamideA类似物的合成1"able3TypicallHNMRspectraldataforcompound38．42根据表31HNMR氢谱数据，类似物的氢谱数据和LeucamideA的氢谱数据有着很大的变化。环尺寸的调整使得c3，C5，C6和C15上的质子周围环境发生变化，其中化合物42的变化是较大的。l2345=====Ⅱnn锚曲种札犯3 第二章LeucamideA类似物的合成我们用Chem3D对LeucamideA及其类似物进行分子模型的研究(图8)，发现化合物42的构象和其它化合物的构象存在较明显的差异。LeueamideA中甲基嗯唑和噻唑串联的结构单元与嗯唑是共面的，而化合物42中二杂结构单元与嚼唑并不在同一平面上。这部分上证实了氢谱数据分析所得到的结论并初步表明用不同的氨基脂肪酸来代替LeucamideA中脯氨酸(Pro)和亮氨酸(Leu)形成的二肽(Pro-Leu)而得到的类似物其空间构象与LeucamideA的构象相比有所改变。尽管通过分子模型看到的构象变化不明显，但是上述数据表明4，2一杂环串联结构单元和嗯唑环单元之间构象的变化还是很大的，尤其是化合物42的构象变化最大，这种构象的变化将可能直接影响化合物的生物活性。化合物42对甲型流感病毒的IC50值为21．38ug／ml，其它化合物的活性测试正在进行中。 第三章实验部分1H．NMR用VarianMercuryAMX300型核磁共振仪测定；MS用VGZAB．HS或VG．7070型质谱仪测定，除注明外均为EI源(70eV)：所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理，如醇类溶剂用现场生成的醇镁干燥，烃类溶剂用金属钠丝干燥，醚类溶剂用无水KOH预干燥后用金属钠丝干燥，二氯甲烷用CaH2干燥，所有无水溶剂在加入干燥剂后回流至少2hr，使用前再回流30rain蒸出备用。无水DMF和DMSO用无水MgS04干燥过夜后减压蒸馏得到，保存于活化4A分子筛中备用。除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并用TLC跟踪。常规后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200—300目)的柱色谱法：所使用的硅胶，包括200—300目和GF254为青岛海洋化工厂或烟台汇友硅胶开发有限公司生产。1．酰氯的制备方法将酸(1eq)溶于二氯甲烷(每lmmol用3-4ml溶剂)，加入草酰氯(1．5eq)及催化量的DMF，室温下搅拌过夜，减压抽干溶剂，即得到相应的酰氯。2．氨基酸甲酯盐酸盐的制各以Y一氨基酸甲酯盐酸盐的制各为例H2N“√^、瑚H曼垡出盟kH州／、＼／“、o帅．Hcl将CH30H(5m1)jJl：l入到一二口烧瓶，N2保护下滴加SOCl2O．17ml(2．38ret001)，冰盐浴条件下加入Y一氨基酸(70mg，0．68mm01)，逐步升至室温，反应过夜。反应结束后，将反应体系减压浓缩即得产物80mg。产率：78％。3．化台物1的制备 箜三童塞丝墅坌．A+矿丫000№V=--N—EtOAc／H20曼-．f贝。R将化合物A(30mg，0．1mm01)与NaHC03(85mg，1ret001)混合，加入H20／EtOAe(体积比1：4)，渐渐加入乙酰氯(儿ul，0．15mm01)，1小时后淬灭反应。反应液用EtOAe稀释，水相用EtOAc萃取。合并有机相，饱和NaCI溶液洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯=1：6)分离得白色固体1(35rag，92％)。化合物1：1HNMR(300MHz，CDCl3)60．88(d，J=6．9Hz，3H)，0．91(d，J=6．9Hz，3H)，2．03(s，3H)，2．33(m，1H)，2．67(s，3H)，3．88(s，3n)，5．18(rid，J=8．7Hz，6．3Hz，1H)，6．60(d，J=8．7Hz，1H)，7．92(s，lH)．”CNMR(75MHz，CDCl3)612．04，17．90，19．21，23．13，33．41，51．93，56．14，120．11，128．23，142．56，155．01，156．31，162．45，169．81，171．94．类似于化合物1的方法制得化合物2—7：化合物2：矿y㈨№譬N囝。J。儿／IH1HNMR(300MHz，CDCl3)60．88(d，J=6．3Hz，3H)，0．90(d，J=6．0Hz，3H)，1．24(t，J=7．5Hz，3H)，2．26(q，J=7．5Hz，38)，2．38(Ill，18)，2·66(s，3H)，3．88(s，3H)，5．19(rid，J=8．7Hz，6．6Hz，1H)，6．44(d，J=8．4 第三章实验部分Hz，in)，7．92(s，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)69．69，12．02，17．81，19．26，29．47，33．34，51．91，55．97，120．08，128．22，142．60，155．02，156．29，162．45，172．21，173．47．(PE：EtOAc=4：1。yield：85％)化合物3：lO冬^。。PNr：式。丫“日r*～1HNMR1300MHz，CDCl3)60．88ix，J=6．0Hz，3H)，O．94(d，J=6．0Hz，3H)，1．94is，9H)，2．47(m，1H)，2．66(s，3H)，3．88is，3rI)，5．18(m，trI)，6．32(d，J=8．4Hz，lrI)，7．94(s，in)．13CNMR(75MHz，CDCl3)612．04，17．52，19．43，27．39，32．94，38．83，51．90，55．96，120．02，128．23，142．78，155．04，156．30，162．47，172．91，177．95．(PE：EtOAe=1：1．yield：87％)化合物4：人儿。。＼=‘囝。、√L。』＼／认lH1HNMR(aooMHz，CDCl3)6O．82(3H)，O．89(d，J=6．6Hz，3H)，0．90(d，J=6．9Hz，3H)，1．26(m，4H)，1．59(m，2u)，2．22(t，J=7．5Hz，2n)，2．36(m，1n)，2．67(s，an)，3．89is，3n)，5．20(dd，J=8．7Hz，6．3Hz，1H)，6．40(d，J=9．0Hz，1n)，7．93is，18)．28 第三章实验部分13CNMR(75MHz，CDCl3)612．03，13．79，17．81，19．29，22．22，25．26，31．27，33．31，36．51，51．92，55．96，120．09，128．20，142．61，155．04，156。31，162．46，172．25，172．84．(PE：EtOAc=1：2，yield：91％)化合物5：☆一。，：弋女-．^N一、＼。NUU，1HNMR(300MHz，CDCl3)61．01(d，J=6．9Hz，an)，1．06(d，J=6．9Hz，3H)，2．52(m，lH)，2．73(s，3H)，3．94(s，3H)，5．42(dd，J=9．0Hz，6．9Hz，lI-I)，7．10(d，J=8．7Hz，1H)，7．16(ddd，J=8．1Hz，2．4Hz，0．6Hz，1H)，7．40Odd，J=13．5Hz，7．8Hz，5．7Hz，1H)，7．55Odd，J=13．5Hz，7．8Hz，2．4Hz，it-i)，7．58(d，J=7．8Hz，1H)，7．99(s，1H)．(PE：EtOAc=1：1，yield：76％)化合物6：0／≮丫，，咖“＼=d囝。斗：愉1HNMR(300MHz，CDCl3)61．02(d，J=6．6Hz，3H)，1．06(d，J=6．6Hz，3H)，2．55(m，1H)，2．73(s，3H)，3．94(S，3H)，5．46(dd，J=8．1Hz，7．2Hz，1n)，6．95(d，J=9．0Hz，1H)，7．44-7．54(m，3rI)，7．84(d，J=6．9Hz，2H)，8．01(s，1H)(PE：EtOAc=1：1，yield：85％) ．．蔓三童塞坠塑坌●_●●__________-___________●-—_————_—-_____________-__________________●——————————————————————化合物7：1HNMR(300MHz，CDCl3)61．01(d，J=6．6Hz，3H)，1．07(d，J=6．9Hz，3n)，2．57(m，1H)，2．72(s，3H)，3．87(s，38)，3．92(s，9rI)，5．40(dd，J=8．7Hz，7．2Hz，1H)，6．99(d，J=8．4Hz，1H)，7．13(s，2H)，8．01(s，lrl)．(PE：EtOAc=1：2，yield：70％)4．化合物8的制备A竺些璺竺!塾。cn2028将酸00．3mg，0．12ret001)溶于CH2C12(2mL)中，冰盐浴冷却，数分钟后，依次加入N一甲基吗啡啉(NMM)(0．15mm01)，氯甲酸异丁酸酯(C1C001Bu)(0．13mm01)，继续搅拌半小时，加入化合物A(29．5mg，0．1mm01)。继续搅拌，逐渐升至室温，反应完全后，用水淬灭反应。EtOAc萃取，有机相饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化，得产品20rag。产率55％。1HNMR(300MHz，CDCl3)6O．90(d，J=6．9Hz，3H)，0．91(d，J=6．6Hz，3H)，2．45(m，1H)，2．69(s，3H)，3．05-3．08(m，2n)，3．90(s，3H)，执 第三章实验部分5．16-5．26(m，3H)，5．87—6．00(m，lri)，6．47(d，J=8．7Hz，1H)，7．96(s，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)612．07，17．76，19．34，33．24，41．39，51．97，56．12，199．88，120．15，128．27，130．90，142．70，155．03，156．36，162．50，170．24，172．03．类似于化合物8的方法制得化合物9—10：化合物9：M。、=二N早8l＼／L、N—＼八夕＼IH1HNMR(300MHz，CDCl3)60．89(d，J=6．6Hz，3H)，O．90(d，J=6．6Hz，3H)，1．56(s，an)，1．61(s，3H)，2．23-2．67(m，5H)，2．74(s，an)，3．89(s，3H)，5．05(m，ira)，5．20(dd，J=8．7Hz，6．6Hz，1H)，6．45(d，J=8．7Hz，lrI)，7．94(s，lrt)．13CNMR(75MHz，CDCl3)612．09，17．70，17．82，19．29，24．16，25．64，33．39，36．60，51．99，56．03，120．15，122．58，128．32，133．39，142．71，155．10，156．38，162．54，172．22，172．49．(PE：EtOAc=1：1，yield：80％)化合物lO禽∽№西。4--。几∥"H1HNMR(300MHz，CDCl3)60．88(d，J=6．9Hz，3H)，0．89(d，．，=6·6Hz，an)，2．30--2．35(5H)，2．67(S，an)，3．88(s，3H)，4．94(dd，J=9．9Hz，1．5Hz，lri)，5．Ol(dd，J=17．1Hz，1．8Hz，lI-I)，5．19(dd，J=9．0Hz，31 第三章实验部分6．3Hz，1H)，5．76(m，1H)，6．50(d，J=8．7Hz，1H)，7．92(s，lH)；13CNMR(75MHz，CDCl3)612．02，17．79，19．26，29．38，33．28，35．58，51．91，56．04，115。59，120．08，128．22，136．71，142．58，154．99，156．29，162．44，171．98，172．11．(PE：EtOAe=1．5：1．yield：63％)5．化合物11的制备A伊警S弋矿y湖“11将化合物A(12mg，0．04mm01)与分子筛，HOBT(18rag)混合，加入2mL无水DMF，冰盐浴冷却，搅拌数分钟。加入酸(6mg，O．045mm01)，继续搅拌半小时后，加入EDCI(9mg)。继续冰盐浴下反应半小时，逐渐升至室温。反应完全，体系用大量EtOAe稀释，有机相用适量水洗数遍，饱和NaCl溶液洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱(PE：EtOAc=I：1)纯化，得产品16rag。产率96％。化合物11，1HNMR(300MHz，CDCID6O．97(d，J=6．6Hz，3H)，1．03(d，J=6．6Hz，3H)，2．51(m，1n)，2．71(s，3H)，3．92(s，3H)，5．35(dd，J=7．8Hz，J=7．8Hz，1S)，6．87(d，J=8．4Hz，lI-I)，7．07(dd，．，=4．5Hz，J=4．2Hz，1a)，7．49(d，J=4．8Hz，1H)，7．60(d，J=3．6Hz，1H)，7．98(s，10)．”CNMR(75MHz，CDCID612．12，18．22，19．53，33．55，52．00，56．56，120．35，127．64，128．34，128．46，130．52，138．18，142．79，155．56，156．43，161．47，162．54，171．类似于化合物11的方法制得化合物12一15： 笙三童塞竺型坌——化合物12：EDCI,HOBT,分子筛+RCOOH——面丽f——+扣№S埯1HNMR(300MHz，CDCl3M。。易。斗zb～>"一一№)61．03(d，J=6．6Hz，3H)，1．04(d，J=(s，3H)，3．94(s，3H)，5．42(dd，J=8．7Hz，，1H)，6．71(d，J=6．9Hz，1H)，6．83(d，J=1H)，7．45(d，J=6．9Hz，1H)，8．01(s，1n)．1HNMR(300MHz，CDCl3)60．94(d，J=6．9Hz，3H)，1．01-1．06(9H)，1．45【s，9n)，2．39(m，1n)，2．66(m，1n)，2．73(S，3H)，3．94(s，3H)，4．90(m，33 篁三主窭墼墅坌——lri)，5．15(m，lri)，5．36(dO，J=9．0ttz，6．9Hz，1n)，7．93(d，J=9．3Hz，lS)，8．01(s，ln)，8．04(s，ln)．(PE：EtOAe=1：1，yield：53％)化合物14：py啪“卢N囝。忡斗：场1HNMR(300MHz，CDCl3)6O．97(d，J=6．6Hz，3It)，1．02(d，J=6．6Hz，3I-I)，2．62(m，ln)，2．69(s，3n)，3．89(s，3H)，4．03(s，3H)，5．49(dd，’，=7．5ttz，5．1Hz，XU)，6．99(d，J=8．4Itz，tn)，7．05(t，J=7．5Hz，111)，7．44(dd，J=7．5ttz，8．1Hz，1n)，7．96(s，an)，8．16(d，J=8．1Hz，1n)，8．70(d，J=8．1Hz，In)．13CNMR(75MHz，CDCl3)612．02，17．25，19．42，32．93，51．86，56．06，56．87，111．36，120．01，120．85，121．31，128．26，132．32，133．08，142．79，155．20，156．20，157．54，162．51，165．14，173．85．(PE：EtOAc=1：1，yield：60％)化合物15：妒№字NS喝1HNMR(300Mttz，CDCl3)61．00(d，J=6．9Hz，3H)，1．07(d，J=6．6Hz，3H)，2．52(m，ln)，2．73(s，3n)，3．94(s，3H)，5．40(dd，J=8．4Hz，7．2Hz，1n)，6．90(t，J=7．5Hz，1n)，6．99(d，J=8．4Hz，XI-I)，7．22(d，J= 笙三童塞堕塑坌．—————————————————————————————————————————————————_————————————一一8．7Hz，18)，7．42(t，J=7．5Hz，1H)，7．53(d，J=7．8Hz，1H)，8．02(s，1n)·(PE：EtOAc=1．5：1，yield：46％)6．化合物16的制备￡．1甜161蜘18h16a的制备将苯丙氨酸(49，24．2mm01)溶于80mlH20和80ml二氧六环中，搅拌溶解后，加入NaHC03(8．069，96．8ret001)，后加入(Boc)20(6．819，31．5retooll。室温搅拌过夜。反应结束后，向反应体系里加入适量的水，用1NHCl调PH=2，EtOAc萃取，合并有机相，饱和NaCI洗，无水MgS04干燥。减压浓缩得16a5．89。产率；91％。16b的制备将16a(5．8，21．9mmol溶于80ml的无水DME中。溶解后，冰盐浴条件下依次加入N一甲基吗啡啉(NMM)(2．4ml，21．9mm01)，氯甲酸异拈娃上旺土吖 第三章实验部分丁酸酯(CICOO‘Bu)(2．9ml，21．9mm01)，搅拌1小时后，通入NH32小时。反应结束后，向反应体系中加入适量的水，CHCl3萃取，合并有机相，饱和NaCl清洗，无水MgS04干燥。浓缩得16b3．89。产率：70％。16c的制备将化合物16b(3．89，14．6ret001)溶于60ml的DME中·后加入LawessonReagent(39，7．3ret001)，室温反应4小时。将反应体系浓缩，然后加入CH2C12溶解。用1％NaOH溶液将体系条至PH=8。CH2C12萃取，合并有机相，饱和NaCl清洗，无水MgS04干燥。减压浓缩，混合物经色谱柱(PE：EtOAc=2：1)纯化，得产品3．29。产率；80％。16d的制备将16c(3．29，11．4mmoi)溶于50mlDME中，然后加入溴代丙酮酸乙酯(2．2ml，17．1mm01)，开始反应。反应结束后将反应体系浓缩，混合物经色谱柱(PE：EtOAc=5：1)纯化，得产品3．19。产率：80％。16e的制备将16d(3．19，8．9mm01)加入到MeOH／H20(40：10)中，溶解后在冰盐浴条件下加入LiOH(1．79，41．8ret001)，TLC跟踪点板。反应结束后，将反应体系浓缩，加入水稀释，稀HCI酸化至酸性，EtOAc萃取，有机相用饱和NaCl洗，MgS04干燥，浓缩，得白色固体1．99。产率：67％。16f的制备将16e(1．99，5．5mml)溶于50ml无水THF中，在一40℃下加入N一甲基吗啡啉(NMM)(1．8ml，16．5mm01)，氯甲酸异丁酸酯(CICOOoBu)(1．08ml，8．25mm01)，继续搅拌半小时，然后加入苏氨酸甲酯盐酸盐(1．869，11mm01)，反应过夜。反应结束后，将反应体系浓缩，加入水，EtOAc萃取，有机相用饱和NaCl洗，MgS04干燥，浓缩，混合物经色谱柱(PE：EtOAc=l：1)纯化，得产品1．79。产率：69％。169的制备 第三章实验部分将16f(1．79，3．6mm01)溶于50mlCH2C12中，N2保护。一78"C下加入DAST(0．56m1．4．3mm01)，反应1小时。反应结束后，将反应体系倒入饱和NaHC03溶液中，CH2C12萃取，合并有机相，饱和NaCI清洗，无水MgS04干燥。减压浓缩，混合物经色谱柱(PE：EtOAc=I：1)纯化，得产物1．269，产率：69％。16h的制各将169(1．299，2．8mm01)溶于50mlCH2C12中，N2保护。冰盐浴条件下依次加入DBU(0．46ml，3．08mm01)，BrCCl3(O．36ml，3．64mm01)。逐步升至室温，反应过夜。反应结束后，用饱和NH4C1溶液清洗后，用EtOAc萃取，有机相用饱和NaCI洗，MgS04干燥，浓缩，混合物经色谱柱(PE：EtOAc=2：1)纯化，得产物1．079。产率：83．5％。化合物16的制各将16h(1．079，3mm01)溶于30mlCH2C12中，冰盐浴条件下加入TFA(14ml，15mm01)反应4小时。反应结束后，将反应体系浓缩，加入饱和NaHC03，CH2C12萃取，合并有机相，饱和NaCI清洗，无水MgS04干燥。减压浓缩得产物0．58mg。产率：70％。1HNMR(300MHz，CDCl3)62．74(S，3H)，3．34(d，J=6．0Hz，2H)，3．94(s，3H)，5．30(dd，J=7．5Hz，5．1Hz，1H)，7．09(d，J=6．9Hz，1H)，7．05(t，J=7．5Hz，1H)，7．44(dd，J=7．5Hz，8．1Hz，1H)，7．96(s，1H)．化合物17的合成法与化合物16的方法类似化合物17 第三章实验部分1HNMR(300MHz，CDCl3)62．71(S，3H)，3．91(S，3H)，4．28(s，2H)，8．04(s，1H)。7．化合物18，20的制备161820将化合物16(30rag，0．087ret001)与NaHC03(146rag，1．7ret001)混合，加入H20／EtOAc(体积比1：4)，渐渐加入苯甲酰氯(15pl，0．13mm01)，1小时后淬灭反应。反应液用EtOAc稀释，水相用EtOAe萃取。合并有机相，饱和NaCI溶液洗，MgS04干燥，浓缩。混合物经色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯；1：1)分离得白色固体化合物18(32mg，82％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)62．71(s，3H)，3．43(m，2H)，3．91(S，3H)，5．82(d，J=7．8Hz，1H)，7．09—7．26(5H)，7．36-7．473H)，7．72(d，J=7．2Hz，2H)，7．92(s，1H)．将化合物18(15mg，O．03mm01)加入到MeOH／H20(4：1)中，溶解后在冰盐浴条件下加入LiOH(10mg，O．14mm01)，TLC跟踪点板。反应结束后，将反应体系浓缩，加入水稀释，稀HCl酸化至酸性，EtOAe萃取，有机相用饱和NaCI洗，MgS04干燥，浓缩，得白色固体化合物20(13rag，89％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)62．76(S，3n)，3．47(m，2H)，5．85(d，J=7．2Hz，1H)，7．01(d，J=8．1Hz，1a)，715(d，J=7．5Hz，1H)，7．21(dd，J=7．5Hz，8．1Hz，1H)，7．40-7．51(m，3H)，7．74(d，J=7．2Hz，2H)，7．94(s，戈八幽煮。器冬。=<|苕。G忑垒≯X◎ 第三章实验部分1H)化合物23，24的制各和化合物18，20的方法相同。16化合物23HNMR(300MHz，CDCl3)62．72(s，3H)，3．46(d，J=6．6Hz，2H)，3．91(s，1H)，5．85(d，J=7．5Hz，1n)，7．07-7．14(m，2H)，7．18-7．26(m，2n)，7．44(m，2n)，7．95(s，in)，8．01(rid，J=7．5Hz，8．1Hz，an)化台物24HNMR(300MHz，CDCl3)62．76(s，3H)，3．50(d，J=6．6Hz，2H)，5．88(d，J=7．2Hz，IH)，7．09-7．13(m，3H)，7．23-7．28(m，3H)，7．48(m，2H)，7．97(s，arI)，8．04(dd，J=7．5Hz，8．1Hz，18)8．化合物2l，22的制备!!兰!竺竺：竺三竺。OlVIF≯％@．‘吣络。：<|藿¨龟面M一一U一奠跫◎ 笙三主塞墼塑坌将化合物16(30mg，0．087mm01)-与分子筛，HOBT(40rag，O．29mm01)混合，加入4mL无水DMF，冰盐浴冷却，搅拌数分钟。加入酸(13mg，o．1mm01)，继续搅拌半小时后，加入EDCI(23mg，0．12mm01)。继续冰盐浴下反应半小时，逐渐升至室温。反应完全，体系用大量EtOAc稀释，有机相用适量水洗数遍，饱和NaCI溶液洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱(PE：EtOAc=l：1)纯化，得化合物2120mg。产率：51％。将化合物2l(10rag，0．02mm01)加入到MeOH／H20(4：1)中，溶解后在冰盐浴条件下加入LiOH(10mg，O．14ret001)，TLC跟踪点板。反应结束后，将反应体系浓缩，加入水稀释，稀HCI酸化至酸性，EtOAc萃取，有机相用饱和NaCl洗，MgS04干燥，浓缩，得白色固体22(7mg，73％)。化合物2lHNMR(300MHz，CDCl3)62．71(s，3H)，3．43(m，2H)，3．91(5，1H)，5．75(d，J=7．8Hz，1H)，7．04(dd，J=7．5Hz，8．4Hz，1H)，7．1-7．26(m，5rI)，7．45(d，J=4．5Hz，lrI)，7．57(d，J=3．0Hz，1H)，7．92(s，1n)．化合物22HNMR(300MHz，CDCl3)62．72(s，3n)，3．41(m，2rI)，5．86(d，J=7．2Hz，1H)，7．04(0d，J=7．4Hz，8．1Hz，lH)，7．1-7．26(m，5r1)，7．45(d，J=4．5Hz，1H)，7．57(d，J=3．0Hz，1H)，7．92(S，in)．9．化合物25的制备17+分一日)cLHOBT,分子缔--—---—·——————————■oDMF其具体制备方法和化合物21的制各相同40 第三章实验部分HNMR(300MHz，CDCl3)62．72(s，3H)，3．92(s，3H)，4．97(d，J=5．7Hz，1H)，6．81(m，1H)，7．04(dd，l，=4．8Hz，4．5Hz，1H)7。52(s，J=5．1Hz，1H)，7．57(d，J=2．9Hz，1H)，8．05(s，1H)．10．化合物26，27的制备方法翻首先制各格氏试剂MeMgl：将250mg(10mm01)镁屑加入一干燥的三口烧瓶中，上置一滴液漏斗，里面加入MeI37．4ul(10mm01)(溶于20ml的乙醚中)，先滴加少量MeI，后加入引发量的12，发现已有气泡产生并且颜色逐渐变为白色，则已发生反应。将LiBH4(12rag，O．56mm01)溶于无水THF(5m1)，然后加入新制备的MeMgI(4．48ml，2．24ret001)，最后加入化合物1l。将反应体系降至一20℃，开始反应。TLC跟踪点板。反应结束后，将反应体系加入到冷HCl溶液中，Et20萃取，有机相用饱和NaCI洗，无水MgS04干燥，减压浓缩，混合物经色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯=1：3)分离得产物26a150mg。产率34％。化合物26a的Swern氧化：将草酰氯37ul(O．42mm01)加到的CH2C1241 第三章实验部分(2mL中，一60*(2下加入DMSO155Itl，0．8ret001)，30min后，逐滴加入化合物26a(150rag，0．38m珥ol，15min后加入Et3N(245ul，1．8mm01)，反应结束后，将反应体系中加入水，CH2C12萃取，有机相用饱和NaCI洗，无水MgS04干燥，减压浓缩，混合物经色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)分离得产物26b55mg。产率36．7％。向一干燥的圆底烧瓶中加入’BuONa(34mg，O．35mm01)，草酸二甲酯(34mg，0．28mm01)。冰浴条件下加入无水THF(O．5m1)。搅拌溶解。后将溶于DME10．5m1)的化合物26b(0．14mm01)缓慢滴加到反应体系中，冰浴下搅拌。反应10hr后加热至60℃，继续反应4hr。反应结束后，将反应体系至于冰浴中，用1NNaOH淬灭。CH2C12萃取，有机相用饱和NaCl洗，无水MgS04干燥，减压浓缩，混合物经色谱柱纯化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分离得产物2625mg。产率：37．3％。HNMR000MHz，CDCl3)60．96(d，J=6．6Hz，3H)，1．02(d，J=6．9Hz，3H)，2．58(m，lII)，2．78is，3H)，3．93is，3n)，5．37(m，1H)，6．82(d，J=6．2Hz，1I-1)，7．11(dd，J=3．0Hz，2．8Hz，1H)，7．34(s，1H)，7．51(d，J=3．4Hz，1n)，7．61(d，J=3．4Hz，in)，7．96(s，lII)．将化合物26(20rag，0．042ret001)溶于THF／CH30H(1ml／lml)。后加入1NNaOH溶液在室温下反应2hr。反应结束后，反应体系浓缩，加入水稀释，稀HCl酸化至酸性，EtOAe萃取，有机相用饱和NaCI洗，MgS04干燥，浓缩，得白色固体27(10rag，50％)。HNMR(300MHz，CDCl3)60．95(d，J=6．6Hz，3H)，1．03(d，J=6．9Hz，3H)，2．56(nl，in)，2．80is，3n)，5．37(m，an)，6．84(d，J=6．4Hz，in)，7．13(dd，J=3．0Hz，2．9Hz，in)，7．40is，xn)，7．60(d，J=3．9Hz，1H)，7．69(d，I，=3．8Hz，lIJ)，7．99(s，1H)．11．化合物28的制备 笙三童塞墅墅坌：将化合物12(15rag，O．026ret001)溶于lmlCH2C12中，冰盐浴条件下加入TFA(O．5ml，0．26ret001)，逐渐升至室温。2hr后结束反应。将反应体系浓缩，加入饱和NaHC03，CH2C12萃取，饱和NaCI洗，无水MgS04干燥，减压浓缩得产物10rag。产率：83％。1HNMR(300MHz，CDCl3)6o．94(d，J=6．9Hz，3H)，1．01—1．06(9H)，2．39(m，zri)，2．66(m，lrI)，2．73(s，3H)，3．94(s，3n)，4．90(m，lri)，5．15(m，1H)，5．36(dd，J=9．0Hz，6．9Hz，11-I)，7．93(d，J=9．3Hz，lrI)，8．01(s，in)，8．04(s，1H)．12．化合物29。30的制各柏其具体制备方法同化合物1的制各方法29RI=CHa∞R2=ceHe。～尹伊，蘸等护＼炉舻，≯飞P＼尹舻，《雷f㈣N—Ha一～0一oC一日兰k毁冷囊 第三章实验部分化合物29：1HNMR(300MHz，CDCl3)60．94-1．02(12H)，2．13(s，1H)，2．33(m，1H)，2．63(m，1H)，2．74(s，3H)，2．94(s，3H)，5．22(m，1H)，5．36(m，1H)，6．17(dd，J=9．0Hz，6．9Hz，1H)，7．93(d，J=9．6Hz，1H)，8．04(s，1H)，8．05(s，1H)．化合物30：1HNMR(300MHz，CDCl3)60．89-1．06(12H)，2．48(m，1H)，2．58(m，1H)，2．73(s，3H)，3．93(s，3H)，5．36m，1H)，5．45(m，IH)，6．77(dd，J=8．4Hz，8．4Hz，1H)，7．73-7．51(m，1H)，7．82(d，J=7．2Hz，1H)，7．87(d，J=6．9Hz，1H)，7．93—7．99(m，1H)，8．06(s，1H)．13．化合物31的制备方法ARCOOH．EDC—而瓦面iF+31RICOOH；32R2000H；电、_COOHe，≤81“—＼=00Hm彳丫“N—、_。ooH将化合物A(26mg，0．087mm01)与分予筛，HOBT(38rag，0．278mm01)混合，加入lml无水DMF,冰盐浴冷却，搅拌十分钟。之后，加入2-Methyl-thiozole-4一carboxylicacid(16mg，0．1ret001)，继续搅拌半小时后，加入EDCI(23mg，0．12mm01)。继续在冰盐浴下反应半小时，之后逐渐升至室温。反应完全后，体系用大量EtOAc稀释，有机相用适量水洗数遍，饱和NaCI溶液洗，MgS04干燥，浓缩。混合物经色谱柱纯化(PE：Et0Ac=1：1)，得产品22rag，产率；60％。化合物3l：44 1HNMR(300MHz，CDCl3)61．02(d，J=6．6Hz，3r1)，1．03(d，J26．9Hz，3H)，2．60(m，1H)，2．73(s，3H)，3．93(s，3H)，5．35(dd，J=9．0Hz，J=9．0Hz，1H)，7．87(dd，J=9．0Hz，in)，8．Ol(s，1H)·14．化合物35的制备45 堕三兰壅堕墅坌．+H2N一∞0Me·HCI将HOBT(25mg，1．856moi)，4A分子筛，甘氨酸甲酯盐酸盐(15mg，0．115mmoi)混合并溶于2ml的无水DMF中，然后加入化合物34(30rag，O．058mmo|)，最后加入EDC(11mg，o．0696moi)，反应过夜。反应结束后，体系用大量EtOAc稀释。把分子筛过滤除去。然后用适量的水多次清洗以除去DMF。饱和NaCl溶液洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化(PE：Et0Ac=l：1)，得产物22mg。产率：65％。1HNMR(300MHz，CDCl3)80．90(d，I，=6．9Hz；3H)，1．00(d，J=6．3Hz，3H)，1．44(s，9H)，1．66(d，J=6．6Hz，3H)，2．4-9(m，in)，2．71(s，3H)，3．76(s，3h)，4．18(d，J=5．1Hz，2H)，4．49(m，IH)，5．26(Ⅲ，iI-I)，5．45(m，1H)，7．45(br，an)，7．57(d，‘，=8．1Hz，IH)，7．87(s，In)，8．14(s，IH)．同样的方法得到化合物35a，35b，35c，35(I35a1HNMR(300MHz，CDCl3)6O．87(d，J=6．6Hz，3H)，0．96(d，jr=6．6Hz，3H)，1．39(S，9H)，1．60(d，J=69Hz，3H)，2．46(m，IH)，2．58(t，J=6．6Hz，21-I)，2．66(s，3H)，3．61(t，J=6．3Hz，3H)，3．64-(s，3H)，4．90(m，IH)，5．34(m，1H)，5．41(m，IH)，7．41(m，IH)，7．56(d，J=8．7Hz，11-I)，7。84(s，a11)，8．08(s，a11)． 第三章实验部分13CNMR(75MHz，CDCl3)611．70，17．02，19．15，19．31，28．14，33．06，33．79，34．36，42．56，51．66，58．04，80．04，119．86，129．48，135．87，141．12，142．91，153．74，154．22，155．29，160．35，160．95，163．90，172．36，175．06．、∥I惫一吣爿¨“己1l"ll-IBoe!!：i。、∥“Z^o睾：H眈产0．87(d，J=6．9Hz，3ri)，O．96(d，J==7．2Hz，3ri)，1．87(m，2H)，2．32(t，J=H)，3．41(m，2H)，3．61(S，3n)，4．91(m，1(br，m)，7．54(d，J=8．4Hz，in)，7．82j5C1HNMR(300MHz，CDCl3)60．86(d，J=6．9Hz，3H)，0．95(d，J=6-9Hz，3H)，1．39(s，9rt)，1．59(d，J=6．9Hz，31-1)，1．55-1．65(m，4ri)，2．29(t，J=6．9Hz，2H)，2．43(m，1H)，2．65(S，3n)，3．51(m，2n)，3．59(S，3ri)，4·90(m，lu)，5．33(d，J=8．7Hz，1H)，5．39(nl，lri)，7．09(br，1H)，7．57(d，J=8．4Hz，1a)，7．81(s，1H)，8．08(s，lri)．47 箜三童塞矍型坌35d1HNMR(300MHz，CDCl3)60．90(d，J=6．9Hz，3rI)，0．99(d，J=6．6Hz，3R)，1．43(s，9H)，1．59—1．69(m，6H)，1．63(d，J=7．8Hz，3H)，2．29(t，J=7．5Hz，2H)，2．48(m，1H)，2．70(s，3ri)，3．37(m，2H)，3．63(s，3H)，4．95(m，1H)，5．27(m，1H)，5．44(m，lri)，7．01(m，1H)，7．53(d，J=8．7Hz，1H)，7．84(s，1n)，8．10(s，in)．13CNMR(75MHz，CDCl3)611．81，17．04，19．29，19．41，24．50，26．35，28．24，29．29，33．16，33．82，38．74，42．62，51．41，58．12，80．24，119．86，129．58，136．19，141．00，143．08，154．11，154．33，155．35，160．34，161．04，163．83，173．92，175．28．36的制备将(1eq)35溶于MeOH／H20(体积比4／1)中，冰浴冷却数分钟之后，加入LiOH(10eq)，逐渐升至室温，甲酯反应完全，反应液浓缩。加入水稀释，稀HCl酸化至酸性，EtOAc萃取，有机相用饱和NaCI洗，MgS04干燥，浓缩，得产品。48≮X广∥飞 笙三童壅竺堡坌——37的制备弼将浓缩得到的化合物加入分子筛，溶于DMF(3m1)，后加入DIPEA(50u1)，冰盐浴条件下加入HBTU(80mg)，反应过夜。反应结束后，将反应体系用EtoAe稀释，把分子筛过滤除去。然后用适量的水多次清洗以除去DMF。饱和NaCI溶液洗，无水MgS04干燥，减压浓缩。混合物经色谱柱纯化(PE：EtOAc-1：1)，得产物。．1HNMR(300MHz，CDCIa)6O．96(d，J=6．9Hz，3t,i)，1．05(d，J=6．6Hz，3r1)，1．75(d，J=6．9Hz，9H)，2．25(m，1H)，2．70(s，3H)，3．87(dd，J=17．4Hz，J_--2．7Hz，1H)，4．78(dd，J=17．7Hz，J=9Hz，1H)，5．08(m，1H)，5．47(dd，J=9Hz，J=4．8Hz，tri)7．50(d，J=9．3Hz，1H)，7．58(d，J=8．7Hz，1H)，7．79(s，xH)，8．27(s，ln)，9．32(d，J=4．8ttz，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)611．15，17．50，19．06，19．21，34．88，43．86，45．23，56．56，119．18，130．30，135．24，141．04，142．75，149．78，152．13，49 整三主壅墼塑坌——153．85，160．91，165．34，167．94，170．62．．HERIMSm／z458．1399(caledforC20H22N605S，458．1420)．同样方法合成化合物39，40，4l，42化合物391HNMR(300MHz，CDCl3)60．95(d，J=6．6Hz，3H)，1．12(d，J=6．6Hz，3H)，1．67(d，J=6．9Hz，3H)，2．40(m，1H)，2。60(m，1u)，2．72(s，3H)，2．80(m，1H)，3．73(m，1H)，4．10(m，1H)，5．11(m，1H)，5．49(m，1H)，6．36(br，1H)，7．87(s，1H)，8．08(br，1H)，8．19(s，1H)，8．70(d，J=5．1Hz，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)611．60，16．39，19．77，20．26，34．00，34．16，35．91，44．68，56．60，120．26，129．96，135．90，142．08，142．18，152．86，153．91，160．07，160．86，164．62，171．70，173．20．HERIMSm／z472．1533(ealcdforC21H24N60sS472．1576)．化合物401HNMR(300MHz，CDCl3)6O．91(d，J=6．6Hz，3i-i)，1．04(d，J=6．9Hz，3H)，1．67(d，J=6．6Hz，3H)，2．00-2．10(m，2H)，2．48-2．71(m，2H)，2．26(m，1H)，2．74(s，3H)，3．39(m，1H)，3．56(m，1H)，5．29(m，1H)，5．45k善少裘 整三主壅墼竖坌(rid，J=9．3Hz，3．9Hz，1H)，7．22(br，1H)，7．45(br，1H)，7．84(s，1H)，8．19(s，1H)，8．27(d，J=7．2Hz，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)811．69，16．94，19．10，20．61，24．69，33．58，35．18，38．63，44．23，56．15，120．25，129．65，135．98，140。91，141。96，153．52，154．33，160．43，160．63，164．59，171．97，172．41．HERIMSm／z486．1680(calcdforC22H26N6058486．1685)化合物4l1HNMR(300MHz，CDCl3)6O．98(d，J=6．6Hz，6H)，1．64(d，J=6．9Hz，3H)，1．90(m，2H)，2．16-2．26(m，1H)，2。30—2，45(m，4H)，2．45(m，1H)，2．74(S，3H)，3．46(m，1H)，3．59(m，1H)，5．35—5．40(m，1H)，7．08(d，J=9．0Hz，1H)，7．36(br，1H)，7．86(s，1H)，8．09(d，J=7．8Hz，1H)，8．20(s，lH)．13CNMR(75MHz，CDCl3)811．73，18．06，19．16，20．83，23．51，29．38，34．90，37．02，37．48，43．73，55．90，120．07，129．62，136．12，141．52，141．88，153．75，154．06，160．03，160．56，164，59，172．07，172．55．HERIMSm／z500．1854(calcdforC23H2sN605S500．1842)．吣力b窆，N)。～。◇≯融 第三章实验部分化合物421HNMR(300MHz，CDCl3)6O．93(d，．，=6．9Hz，38)，1．00(d，J=6．6Hz，3H)，1．42-1．47(m，2H)，1．50—1．78(m，4H)，1．64(d，J=6．6Hz，3H)，2．21-2．33(m，2H)，2．43(m，iN)，2．74(s，3H)，3．24(m，1H)，3．57m，1H)，5．38—5．45(m，2H)，7．00(d，J=8．7Hz，1H)，7．25(br，1H)，7．87(s，1H)，8．01(d，J=8．1Hz，1H)，8．16(s，1H)．13CNMR(75MHz，CDCl3)611．79，17．63，19．13，20．64，24．60，25．31，27．94，35．30，36．63，37．62，43．58，55．93，120．58，129．72，136．09，141．38，141．60，153．98，154．22，160．11，160．66，164．34，172．06，172．94．HERIMS肼／z514．2010(calcdforC24H30N60sS514．1998)． 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4961-4966[19]NagaiK，KamigiriK，AraoN，eta1．JAntibiotics，2003，56：123_128．[20]FenetB，PierreF"CundliffeE，eta1．TetrahedronLett，2002，43：2367—2370andreferencestherein．[21]DePietroMT，MarazziA，SosioM，eta1．JAntibiotics，2001，54：1066．1071．[22]Lentzen0’KlinckR，MatassovaN，eta1．ChemBiol，2003，10：769．778．[23]KehrausS，KonigGM，WrightAD．JOrgChem，2002，67：4989·4992[24]RoyRS，KelleherNL，MilneJC，eta1．ChemBiol，1999，6：305．318．[25]Abraham，A．T．；Lin，J．-J．；Newton，D．L．；Rybak，s．；Hecht，S．M．Chem．Bi01．2003，10：45．[26]WenlongWangandFajunNan．JOrgChem，2003，68：1636—1639．[27]HiranthiJayasuriya，ZiqiangGuan，JonD．Polishook，AnneW．Dombrowski，PeterJ．Feloek，DeriaJ．Hazuda，andSheoB．Singh．上Nat．Prod．2003，66：551-553．[28]J．Rohaly,L．NovakandCs．Szantay．OPPIBRIEFS，1999，31：693．694．[29]Grobler，J．A．；stillmock，K．；Hu，B．；witmer，M．；Felock，P．；Espeseth，A．；Wolfe，A．；Egbertson，M．S．；Bourgeois，M．；Melamed，J．Y．；Wai，J．S．；Young，S．D．；Vacca，J．p．；Hazuda，D．J．Pro．Natl．Aead．Sci．U．墨A，2002，99，6661-6666．[30]DanielL．CominsandJamesJ．Herrick．TetrahedronLett，1984，2s：1321．1324．[31]WiiliamR．Roush．JAmChemSoc，1980，102：1390．1404．[32]AnthonyJ．Mancuso，Shui-LungHuang，andDanielSwern．JOrgChem， 参考文献1978，43：2480—2482．[33]Xiao—HuaJiang，Lai-DongSong，andYa-QiuLong．JOrgChem，2003，68：7555．7558 附录发表文章目录1．WenlongWang,DeyongYao,MinGu，YachengXing，FajunNan+．SynthesisandBiologicalEvaluationofNovelBisheterocycle．ContainingCompoundsasPotentialAntivitalAgents．BMCL．(Submitted)．2．WcnlongWang,．De—von—eYao,MinGu，YachengXing,FajunNan*．SynthesisandBiologicalEvaluationofConformationAnaloguesofLcucamideABMCL．(Submitted)．3．王文龙，挞擅盟，邢雅成，南发俊·．海洋微生物杂环串联环(拟)肽生物活性研究进展中国天然药物．(已接收) 0一、：玲一一一0、一1‘一_：。l⋯I一一==一一一l一71一if～l‘、j：：一一．I一。～I．jz—芝=二==二=：=二一一一口Te0一．嚣。兰羞惹竺竺一嚣；，S“p—j99L々”1气￡6￡p’、量量要蒸曼鎏E00，Zb0e90S●0SOtE"々9h5￡pe90‘2一：，0’r一-o————————一．e‘0￡一一⋯一⋯～一￡卧Z1S∞§￡8§}口￡羔叠耋羞嚣薹茎!·——嚣：)——一H＼=耋、鼙’《＼《!E『盒}卜一【：jiLN培；i]!]：冀J!}i凄-’：乎一；00ZS￡p￡ElS￡￡5￡￡口e‘I#‘￡；；；lli￡一一|S一￡§ESu，#unooz_oEta{h∞ 撩：嚣i：：：=_=====：¨Z。BI一嚣撩)———～j料：o≯z气，Ⅺ“ij S#t。I。、nB9‘e—、_～～99L’￡——===============1￡Z￡一；BO。p—、∞$===∞≈=一90T’-一嚣；≥e￡T。S——藩：≥———一豁：二)⋯⋯一|专＼《＼《，{＼《＼《oV＼<。鼍产‘l、投：。≤“l峤{＼一一＼