以生物活性为指导的十六元大环内酯交沙霉素结构改造及构效关系研究

'博士学位论文学校代码：10023学号：B2011008003以生物活性为指导的十六元大环内酯交沙霉素结构改造及构效关系研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：药物研究所赵哲辉雷平生雷平生、肖志艳、焦晓珍药物化学十六元大环内酯结构改造二零一四年六月 目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3第一章十六元大环内酯类抗生素结构改造综述一一以柱晶白霉素族为例⋯．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5～、引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5二、十六元大环内酯结构特点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6三、作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7四、柱晶白霉素族结构改造⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8五、总结与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15第二章9一D．乙酰基一47一羟基修饰的去碳酶糖交沙霉素的合成及构效关系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18第一节目标化合物设计依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第二节合成路线设计、产物合成与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21第三节活性测试与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第四节本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27第三章以抗耐药菌活性为指导的交沙霉素结构改造及构效关系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第一节大环内酯抗生素的耐药机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第二节目标化合物设计依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30第三节氮杂侧链交沙霉素衍生物的合成及构效关系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34一、合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34二、产物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35三、生物活性及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37四、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一37第四节去碳酶糖交沙霉素a印不饱和羧酸衍生物的合成及构效关系研 究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39一、合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一40二、产物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40三、生物活性及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42四、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42第五节交沙霉素a书不饱和羧酸衍生物的合成及构效关系研究⋯⋯⋯⋯．．44一、合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44二、产物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45三、生物活性及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48四、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48第六节去碳酶糖a邓不饱和羧酸酯交沙霉素衍生物4’．羟基的酰基结构改造及构效关系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49一、目标化合物设计依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49二、合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49三、产物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51四、生物活性及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54五、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54第七节本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56第四章氮苷交沙霉素o[邓不饱和羧酸3．喹啉苄酯衍生物的合成和构效关系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．60一、目标化合物设计依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．60二、合成路线设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．60三、产物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60四、活性测试及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．70五、本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．70参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72论文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．73合成化合物一览表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．74 实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82论文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142关键化合物图谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯144在校期间发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯243致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯244 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：走踅辉签字日期：；zo／／4-年箩月3p日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解j＆塞蛰塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权j量塞垃塑匡堂喧可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：趣哲埠签字日期：聊年萝月Y,O日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：醪事七签字日期：2．oj华年f月5。日电话：邮编： 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院摘要十六元大环内酯类抗生素是大环内酯类抗生素家族的重要组成部分，主要代表物为交沙霉素和泰乐霉素。十六元大环内酯的研究进展相对于十四元大环内酯落后了很多，但是因其结构差异，相对于十四元大坏内酯有很多特点：胃肠刺激小；没有药物相互作用；无诱导耐药和泵出耐药。为了找到可以找到新的有好的抗菌活性的大环内酯实体，我们选择交沙霉素为先导化合物，因为它没有泵出耐药机制，且成分单一结构明确。交沙霉素在临床上主要用来医治革兰氏阳性菌和支原体感染，其结构特点为母体是一个含共轭双键的十六元内酯环，其5一位连接了一个D—myeaminosyl-L．mycarose结构的二糖。这个二糖结构深入细菌肽转移酶中心，与23SrRNA中的A2058之间形成氢键，从而起到抑菌作用。同时十六元大环内酯6一位还含有一个重要的乙醛基，在十六元大环内酯和靶点结合过程中，它会和N6的A2103(2062)形成一个共价键。这篇论文的工作意在运用以结构修饰为基础的构效关系研究，力图找到对敏感菌和耐药菌都有高活性的十六元大环内酯实体，并探讨其构效关系，为发现药物候选物研究提供理论和实验依据。1，一系列新的4’．位羟基修饰的去碳酶糖交沙霉素衍生物的设计、合成及抗菌活性研究通过对去碳酶糖交沙霉素4’一位羟基进行结构修饰，合成了14个样品化合物，并进行了体外活性测试。活性结果表明，口一位单取代的丙酸酯衍生物15和16，对Sa“"FCff,S(MSSA)和Sepidermidis(MSSE)菌种表现出了最好的抗菌活性。2，一系列新的含6．位氮杂侧链的交沙霉素衍生物的设计、合成及抗菌活性研究通过还原氨化反应，用含各种芳杂环的胺和交沙霉素的6一位乙醛基进行反应，得到了15个含氮杂芳杂环侧链的交沙霉素衍生物，并进行了体外活性测试。活性结果表明，所合成样品都没有或表现出较弱的抗菌活性，说明这种结构修饰方法对于十六元大环内酯类结构改造是不成功的。3，一系列新的去碳酶糖交沙霉素％胪不饱和羧酸衍生物的设计、合成及抗菌活性研究通过Homer-Wadsworth—Emmons反应，将去碳酶糖交沙霉素的6一位乙醛基转化成∞俨不饱和羧酸衍生物，共得到了11个样品，并进行了体外活性测试。活性结果表明，a，胪不饱和羧酸苄基酯43b和43e对敏感菌和耐药菌都表现出了优异的抗菌活性。 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院4，一系列新的交沙霉素％俨不饱和羰基衍生物的设计、合成及抗菌活性研究在上一步研究的基础上，通过Homer-Wadsworth．Emmons反应，将交沙霉素的6一位乙醛基转化成瓯p-不饱和羰基衍生物，共得到了14个样品，其活性正在检查中。5，一系列新的去碳酶糖交沙霉素％俨不饱和羧酸酯4r．位羟基修饰的衍生物的设计、合成及抗菌活性研究综合前面的工作，将仉俨不饱和羧酸苄基酯43b和43e的47．位羟基进行结构修饰，共得到了11个样品，其活性正在检查中。6，两个新的氮苷交沙霉素％胪不饱和羧酸苄基酯的设计、合成及抗菌活性研究为了扩大化合物多样性，选择用电子等排的氮苷取代原十六元大环内酯的氧苷，合成了两个新的氮苷交沙霉素∞俨不饱和羧酸苄基酯化合物，其活性正在检查中。关键词：十六元大环内酯、侧链、合成、抗菌活性 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院AbstractThe16一memberedmacrolides，suchasjosamycinandtylosin，constituteanimportantclassofusefulantibioticsofthemacrolidefamily,whichwerestudiedrelativelybackwardcomparedthatwith14一memberedmacrolides．TheyoffersomeadvantagesOVerthe14一memberedmacrolides．Theseadvantagesincludebettergastrointestinaltolerance，lackofdrug—druginteractions，andtheactivityagainstresistanceexpressingstrains．Duringoureffortstodevelopnovelmacrolidesactiveagainstbacteria，webecameinterestedinjosamycinprimarilybecauseitsactivitiesarenotaffectedbym萨resistance．JosamycinisanimportantdrugusedtotreatGram-positiveandmycoplasmainfections．Thismacrolideantibioticiscomposedofa16一memberedlactoneringandanunusualdisaccharideD-mycaminosyl-L—mycaroseatC一5position，whichisorientedsimilarlytothe5一O-desosamineof14一memberedmacrolides．Furthermore，themycaroseextendstowardthepeptidyltransferasecenter(PTC)，makingadditionalinteractionsatG2505andU2506．The16-aldehydegroupofjosamycinisalsoimportanttotheactivity,whichwillformacovalentbondwiththeN6ofA2103(2062)whenmacrolidebindstheribosome．Inthispaper,weintendedtofindsomenewmoleculeentitiestoimproveantibacterialactivitybothsensitivepathogensandresistantones，andtheacidstabilityof16一memberedmacrolideandstudythepreliminarySAR．1，SynthesisandAntibacterialActivityofaSeriesofNovel9一O-Acetyl-4"-Substituted16-MemberedMacrolidesDerivedfromJosamycinAseriesofnovel9-O—acetyl一47一substituted16一memberedmacrolidesderivedfromjosamycinhasbeendesignedandsynthesizedbycleavageofthemycaroseofjosamycinandsubsequentmodificationofthe#-hydroxylgroup．ThesederivativeswereevaluatedfortheirinvitroantibacterialactivitiesagainstapanelofS．aureusandSepidermidis．15(4’一O一(3-phenylpropanoyl)⋯9Oacetyl—desmycarosyljosamycin)and16(4"-O-butanoyl-9一O—acetyl-desmycarosyljosamycin)exhibitedcomparableactivitiestojosamycinagainstSaureus(MSSA)andSepidermidis(MSSE)．2，SynthesisanantibacterialActivityofaSeriesofNovelBearingA6一aza—sidechainMacrofidesDerivedfromJosamycinAseriesofnovel16·-memberedmacrolidesbearinganarylalkyl—·typesidechainat6-positionwasdesignedandsynthesizedbyreductiveanimationreaction．They．3． 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院wereevaluatedfortheirinvitroantibacterialactivitiesagainstapanelofrespiratorypathogens．Allthecompoundshowednoneorweakactivityagainstrespiratorypathogens．3，SynthesisanAntibacterialActivityofaSeriesofNovel％fl-unsatureatedacidderivativesfrom9-O-acetyl-desmycarosyljosamycinAseriesofnovel16-memberedmacrolidesofd，r-unsaturatedacidderivativesbearinganarylalkyl—typesidechainfrom9一O-acetyl-desmycarosyljosamycinwasdesignedandsynthesizedbyshortsteps．Theywereevaluatedfortheirinvitroantibacterialactivitiesagainstapanelofrespiratorypathogens．Thecompounds43b(benzylester)and43e(naphthalen一2一ylmethylester)exhibitedcomparableactivityagainstapanelofrespiratorypathogens，especiallytoresistantstrains．4，SynthesisanAntibacterialActivityofaSeriesofNovel吗fl-unsatureatedcarbonylderivativesfromjosamycinAseriesofnovel16一memberedmacrolidesofH，r-unsaturatedcarbonylderivativesbearinganarylalkyl—typesidechainfromjosamycinwasdesignedandsynthesizedbyshortsteps．Theywereevaluatedfortheirinvitroantibacterialactivitiesagainstapanelofrespiratorypathogens，5，SynthesisandAntibacterialActivityofaSeriesofNovel4"-Substituted16-MemberedMacrofidesderivedfrom9一O—acetyl-desmyearosyl-a,fl-unsatureatedacidesterAseriesofnovel4’．Substituted16．MemberedMacrolidesderivedfrom9一O—acetyl—desmycarosyl一瓯fl-unsatureatedacidesterbearingallarylalkyl—typesidechainwasdesignedandsynthesizedbyshortsteps．Theywereevaluatedfortheirinvitroantibacterialactivitiesagainstapanelofrespiratorypathogens．6，SynthesisandAntibacterialActivityoftwoNitro-glycosidejosamycinwith仉fl-unsatureatedacidestersTwoofnitro—glycosidejosamycinwith6c，fi-unsatureatedacidestersweredesignedandsynthesizedbyshortsteps．Keywords：16-memberedmacrolide，sidechain，synthesis，antibacterialactivity一丑一 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院第一章十六元大环内酯类抗生素结构改造综述一以柱晶白霉素族为例一、引言大环内酯类抗生素由于使用安全，毒副作用小等优点，多年来在临床被广泛应用[1，2】。自1952年礼来公司的红霉素A(ErythromycinA)(Figure1．1)4市以来，迄今大环内酯类抗生素已有百种，临床上应用的也有20多种，是治疗革兰阳性菌感染的重要药物[3]。最新研究证明，大环内酯类药物除了对细菌有杀灭作用外，也能够杀灭部分真菌和原虫，可以用于治疗卡氏肺囊虫病、弓形虫病、放线菌病、疟疾等[4，5]。同时大环内酯抗生素对呼吸系统疾病[6—8]、心脑血管疾病E91和消化系统症状[10—13]都有一定的治疗作用。此外，大环内酯类抗生素还具有治疗沙眼、老年人慢性便秘、自身免疫性血小板减少症的作用[14，15]。＼N／Figure1．1oCemromycin大环内酯类药化合物按照分子总酯键的的数量可分为大环一内酯、大环二内酯和大环四内酯。常见的一内酯有：十二元环大环内酯类抗生素(如酒霉素等)、十四元环大环内酯类抗生素(如红霉素等)和十六元环大环内酯类抗生素(如柱 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院晶白霉素、麦迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素及交沙霉素等)，至今最大者已达六十元环，如具有抗肿瘤作用的醌酯霉素A1，A2，B1。多内酯中二内酯有：抗细菌与真菌的抗霉素、稻瘟霉素、洋橄榄霉素、硼霉素等。上世纪80年代后期，以克拉霉素(Clarithromycin)、阿奇霉素(Azithromycin)、罗红霉素(Roxithromycin)(Figure1．1)为代表的第二代大环内酯被发现。它们改善了红霉素的酸不稳定性，缓解了胃肠道刺激性。但是近年来随着抗生素的滥用等问题，细菌的耐药现象日益显著。金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对大环内酯类药物的耐药性已经非常严重[16，17]。以泰利霉素(Telithromycin)[18]和喹红霉素(Cethromycin)[19](Figure1-1)为代表的第三代大环内酯类抗生素——酮内酯E20]被发现。此类药物的结构特点是：将14．元大环内酯3．位的克拉定糖脱除，并将3一羟基氧化为羰基；11，12一环氨基甲酸酯结构；同时引入了一个长的芳杂环侧链。它们对大环内酯耐药菌显示突出的抗菌活性，同时保持大环内酯的宽抗菌谱。十六元大环内酯抗生素作为大环内酯类抗生素一个重要组成部分，因具有胃肠道刺激小、无诱导耐药和泵出耐药等先天优势近年来受到研究者的关注[21]。二、十六元大环内酯结构特点十六元大环内酯主要分为柱晶白霉素族(Leucomycin．relatedfamily)和泰勒霉素族(Tylosin—relatedfamily)两大类(Figure1．2)，其主要结构特点是含有一个由16个原子构成的内酯环，内酯环内有一对共轭双键。和十四元大环内酯不同，十六元大环内酯5．位上连接了一个D—mycaminosyl-L—mycarose二糖，3一位上没有克拉啶糖，有些十六元大环内酯在其他位置上有时也会连有一个单糖。JosamycinIHO-／kOM。0、、．L、、，人。0MeFigure1．2OTylosinN＼柱晶白霉素是由同系物柱晶白霉素A族(Figure1．3)及B族组成，柱晶白霉素B的生物活性较柱晶白霉素A的低。对革兰氏阳性菌，如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、破伤风杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用。 博l二学位论文中国医学科学院&北京协和医学院对革兰氏阴性菌，如淋球菌、百H咳杆菌等革兰氏阴性菌也有相当的抑制作用。此外，对支原体、钩端螺旋体、立克次体有抑制作用。临床丰要用于上呼I及道感染、肺炎、淋病、胆囊炎、百同咳、扁桃体炎及败血症等。．、、尸’，oR·OH三N-xOR1LeucomycinAIHLeucomycinA3COCHsLeucomycinA4COCH3LeucomycinA5Hl,eucomycinA6COCH3LeucomycinA7HLeucomycinA8COCH3LeucomycinA9HLeucomycinA13HLeucomycinUCOCH3LeucomycinVHMidecamycinAICOCH2CH3Figure1．3R2COCH：CH(CH3)：COCH：CH(CHs)2COCH2CH2CH3COCH2CH2CH3COCH=CH3COCIt：CllsCOCH3COCH2CH2CH2CH3HCOCH2CHs三、作用机制大环内酯抗生素通过与细菌核糖体50S亚基结合，堵塞细菌肽合成通道，从而抑制细菌蛋白的合成，实现抗菌作用[22，23】。其中最主要的是通过5．位二甲氨糖的2’．位羟基与23SrRNA中的A2058之间的氢键相互作用。同时，5一位二甲氨糖的立体形状刚好与受体A2058，C2611和G2505形成的作用腔相吻合(Figure1．4)[24】。但是十六元大环内酯与细菌核糖体的作用机制和十四元大环内酯的作用机制略有不同。最主要的一点是}’六元大环内酯与细菌核糖体相互作用时只形成一个氢键，而十plj元大环内酯与细菌核糖体作用可以形成三个氢键，除了二甲胺糖的2’．位羟基与23SrRNA中的A2058之问形成的氢键外，还有二甲氨基与A2058和A2059形成的两个氢键。其次十六元大环内酯和受体作用时，内酯环以亲水表面在外疏水表面在内的构象与受体结合，而十四元大环内酯则正好相反，以疏水表面在外亲水表面在内的构象与受体结合。再次十六元大环内酯含有的二糖片段相比于十四元大环内酯的单糖更加深入肽转移酶中心，阻断细菌蛋白合成长度通常到二肽、三肽水平，个别十六元大环内酯二糖片段末端含有的异丁基结构更加深入肽转移酶中心，甚至可以完全阻断细菌蛋白合成。而十四元大环内酯一般 博f=学位论文中圈医学科学院&北京协和医学院抑制细菌蛋白合成到四肽、五肽的长度。这些细微的差别，决定了十六元大环内酯和十四元大环内酯抗菌活性不同。(b)丁w’+nFigure1．4四、柱晶白霉素族结构改造1、柱晶白霉素族糖片段的结构改造Keiichi，A．课题组对十六元大环内酯的二糖片段进行了深入的研究[25】。他们先用酸切除了十六元大环内酯的碳霉糖片段，然后将3’．位的二甲氨基氧化成氮氧化物以去除其碱性，再将得到的十六元大环内酯衍生物作为糖受体和烷基修饰的三一克拉啶糖供体进行连糖反应，从而在二甲氨糖上引入了有烷基修饰的克拉啶糖(Figure1．5)。并对新的大环内酯衍生物做了活性研究，他们发现烷基修饰过的克拉啶糖引入十六元大环内酯后，体外活性和体内活性有了较大的提高。作者认为，体内活性提高的主要原因是十六元大环内酯4”一位羟基成醚后，在体内不受水解蛋白影响，更好的发挥药效。黛’- 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院Figure1．5◇5堞二R2CH2CH3CH2CH=CH2CH2CH2CH2CH3、cH2CH2CHfCH3)2、cH2CH=c(CHa)2：cH2CH2CH2CH(CH3)2丫丫ONg蝌：：HczH2cCH：H201CHzcCH3HaO、、／，，^CHzCeHsI≤接下来Keiichi，A．课题组又对引入十六元大环内酯中的克拉啶糖的3“一甲氧基和4”一羟基同时进行了结构改造[261。并对新的大环内酯衍生物做了活性研究，他们发现碳酶糖的3一位无论是裸露的羟基或是乙氧基对化合物抗菌活性没有影响。新合成的十六元大环内酯衍生物抗菌活性水平接近克拉霉素。OH：’，0ACOH；N＼0R12CH2R2=CH3CH2CH3cH知H3CH2CH2CH3CH2CH2CH2CH3i”⋯”3●。R2CH2C6H5Figure1．6Keiichi，A．课题组接下来的工作是以麦迪霉素A1和交沙霉素为起始原料，进行多步反应，合成了4”．甲氧基．9一位羟基修饰的十六元大环内酯衍生物【27](Figure1．7)。抗菌活性结果表明，十六元大环内酯的9-位为羟基时抗菌活性略好于将9一位羟基转化为乙酰氧基或丙酰氧基。他们进一步研究发现大环内酯的3．位为羟基时抗菌活性同样略好于将其转化为羧酸酯的衍生物[28](Figure1．7)。嘴O 博上学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院Keiichi，A．课题组的工作说明，对十六元大环内酯的3”．位羟基或4”一位羟基进行修饰，可以提高十六元大环内酯对敏感菌的抗菌活性，但是不能提高对耐药菌的抗菌活性。R、O：’bR1OH=Figure1．7N＼OLyT．Phan课题组以交沙霉素为原料，先氧化9一位的羟基成酮，再用酸切除对酸不稳定的碳霉糖片段，得到4‘．位为羟基的关键中间体I-A(Figure1．8)，然后他们对1．A的4’一位羟基进行结构修饰。无论用氨基甲酸酯和4’一位羟基进行结构修饰，还是在4’．位羟基上引入烯丙基喹啉侧链以及脱氧化等结构修饰，但是没有得到比较满意的抗菌活性结果[29]。OFigure1．802、柱晶白霉素族内酯环上进行的结构修饰Satoshi，0．课题组合成了一系列6一位氮杂的柱晶白霉素衍生物[301。他们使用还原胺化方法，以氰基硼氢化钠为还原剂，把十六元大环内酯抗生素6一位乙醛基转化成氨基、甲氮基或二甲氨基等衍生物。特别值得关注的是，在合成氨基衍生物的过程中，他们不仅得到了目标产物，同时还得到了二聚体(Figure1．9)。他 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院们把所得的十六元大环内酯衍生物进行了抗菌活性研究，发现当十六元大环内酯的醛基被还原胺化为简单的胺基以后，十六元大环内酯的抗菌活性下降至少两个数量级之多，而二聚体I．B的抗菌活性和对照相比变化不太大。OHFigure1．9Piotr,P．／J、组在用还原胺化方法试图在交沙霉素6．位乙醛基进行修饰的过程中发现：在还原胺化反应中使用不同的还原试剂如氰基硼氢化钠、硼氢化钠和三醋酸硼氢化钠等，会得到不同的十六元大环内酯交沙霉素衍生物[31]。他们进一步研究发现，在还原胺化过程中，反应体系中的路易斯碱可以进攻3．位乙酰基上的氢原子，最终导致3位乙酰基消除从而得到邓不饱和交沙霉素衍生物(Figure1．10)。虽然对产物活性没有明确报道，但是这一结果丰富了对十六元大环内酯内置换骨架的研究。TomoakiM．和KeiichiA．课题组以麦迪霉素为原料，用环氧化再开环的方法对12，13一位了进行结构改造[32】(Figure1．11)。他们用间氯过氧苯甲酸为氧化剂，对麦迪霉素12，13．位进行不对称环氧化，得到单一构型的衍生物，并用NOE确定了构象。再用叠氮化钠打开环氧，再进一步衍生化得到了三个系列产物，并进行了构效关系研究，他们发现在12，13一位形成类似泰利霉素的氨基甲酸酯类五元小环不能提高衍生物活性，反而13一位为羟基，12一位为叔氨基衍生物时的衍生物活性较好。其中化合物1．c对敏感菌和耐药菌表现出最优异的抗菌活性，对个别菌种的活性以达到或超过克拉霉素。r＼＼ 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院R1，R2giveninFigure1．10Figure1．11接下来的工作中，TomoakiM．和TakeshiF课题组以LeucomycinA7为起始原料，经过多步合成，在3．位羟基引入烯丙基取代基，然后通过Heck反应，在一12一 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院双键末端处引入不同的芳环，并进行了构效关系研究[33]。他们发现，当取代基为3．喹啉和4．异喹啉时，衍生物对敏感菌的抗菌活性超过对照药LA一7，达到克拉霉素水平，同时对耐药菌也表现出较好的抗菌活性(Figure1．12)。LeucomycinA71塑!-OHFigure1．12＼R=3-quinolyI4，isoquinolylphenyl3一pyridyl5一pyrimidinylI—naphlhyl2一naphthyl4一methoxyphenyl4一打ifluoromethylphenyl4一biphenylyl4’(1一imidazoIyI)phenyl在此基础上，该课题组继续对柱晶自霉素进行结构修饰，将十六元元大环内酯氧化开环再关环的结构改造，得到了11或15一位含烯丙基芳杂环．11．位氮杂十六元大环内酯【34】。生物活性显示，此类化合物对e1．"m和mef机制的红霉素耐药菌和流感嗜血杆菌都有较强活性。15．位连接喹啉环的化合物I．D活性最为突出(Figure1．12)。接下来他们继续优化1．D得到化合物I．E，该化合物对大部分测试菌株均达到与泰利霉素相当的抑菌活性；对红霉素耐药的肺炎链球菌和化脓性链球菌，其活性强于泰利霉素[351。此类化合物有可能作为临床研究的候选物进行后续开发。搋秣豇Figure1．12Ken—IchiK．课题组以LeucomycinA7为原料出发，经过多步合成，在大环3一位羟基引入各种羧酸脂和甲氧基衍生物，并对产品进行了生活活性测试。活性结果表明，喹啉取代的衍生物I．F以及甲氧基取代的衍生物I．G都对敏感菌表现出礴 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院较好的抗菌活性，大概为对照药LA一7的四倍水平。OOHO、、尸oH=N＼0五、总结与展望综上所述，虽然十六元大环内酯柱晶白霉素族因无诱导耐药和泵出耐药成为近年来关注的热点，但研究进展相对滞后。目前对十六元大环内酯的结构改造多限于对现有功能团——羟基的修饰和去修饰。如能针对十六元大环内酯的酸不稳定性进行结构改造，或多样化十六元大环内酯的修饰位点，找到对耐药菌高活性的修饰位点或修饰方法，从而更好地研究该类化合物的构效关系，则有望发现有更高活性的十六元大环内酯药物。 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博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院第二章9．仉乙酰基．4，．羟基修饰的去碳酶糖交沙霉素的合成及构效关系研究第一节目标化合物设计依据在综述中介绍过大环内酯类抗生素的抑菌机制是通过与细菌核糖体50S亚基结合，堵塞肽合成通道，从而抑制细菌蛋白的合成，发挥抗菌活性。其中最主要的是通过5．位二甲胺糖的2．羟基和3一二甲氨基与23SrRNA中的核苷A2058和A2059间的相互作用。同时，5一位二甲胺糖的立体结构刚好与A2058，C2611和G2505形成的作用腔相吻合。比较十六元大环内酯结构和十四元大环内酯结构可以看出十四元大环内酯5．位连接了一个二甲氨糖而十六元大环内酯5一位连接的是一个D—mycaminosyl-L．mycarose糖，这种结构特点说明十六元大环内酯5一位连接的二糖和细菌核糖体的作用和十四元大环内酯不尽相同[1]。Steitz，T．／J、组选择六种常用大环内酯分别与细菌核糖体结合，进行X-衍射共晶实验(Figure2．1)[2】。图中右上角位肽转移酶中心(peptidyltransferasecenter，PTC)是催化细菌多肽合成的场所，新生成的多肽经肽转移通道(tunnel)转出核糖体。大环内酯与核糖体碱基结合后堵塞肽转出通道，从而起到抑制细菌蛋白质合成的作用。从图中可以看出，不同颜色代表不同结构类型的大环内酯，它们5一位的二甲氨糖可以很好的重叠。其中蓝色的十五元阿奇霉素与十四元红霉素A有着相同的糖片段，由于5一位连接的是单糖，使细菌蛋白合成阻断在四肽水平。十六元大环内酯泰乐霉素(橙黄色)，螺旋霉素(黄色)由于5．位连有二糖，使细菌蛋白合成阻断在二肽或三肽。而碳霉素A(红色)由于二糖4”．位连接的异戊酰基更接近PTC中心，使细菌无法合成二肽。同时他们对碳霉素A(CarbomycinA)与细菌核糖体的结合自由能也进行了研究，研究发现二甲氨糖提供了27％的结合自由能，碳酶糖提供了21％的结合自由能，碳酶糖上4”一位连接的异戊酰基提供了19％的结合自由能。从这个研究结果可以看出，提供了40％结合自由能的炭霉糖片段对药物分子的抗菌活性是非常重要的。但是这种二糖结构是酸不稳定的，碳酶糖很容易在酸性条件下被水解掉，从而影响抗茵活性[3]。 博j：学位论文中国医学科学院&北京协和医学院Figure2．1Figure2．2对于提高十六元大环内酯的酸不稳定性的研究工作前人做的相对较少。在LyT．Phanetal工作中，他们首先水解掉十六元大环内酯泰乐霉素二糖中对算不稳定的碳酶糖，然后对4’一位的羟基进行修饰，合成了烯丙基苄类产物，其中烯丙基喹啉3．取代产物II．B和其重排产物II．A对敏感菌和耐药菌都表现出了很好的活性(Figure2．2)[4】。作者认为引入的芳杂环部分可以与核糖体的碱基间发生兀一兀堆积或者疏水相互作用，增加了药物分子与细菌核糖体的亲和力，从而提 博士学位论文中图医学科学院＆北京协和医学院高了抗耐药菌活性。随后LyT．Phanetal又用类似的方法对交沙霉素去碳酶糖衍生物进行了修饰，合成了烯丙基喹啉3一取带产物，但是没有达到与泰乐霉素衍生物II一1和11．2相当的抗菌活性水平『51。本章的目标是找到一类合适的对酸稳定的基团去修饰交沙霉素因水解掉炭霉糖而裸露的4’一位羟基，提高十六元大环内酯的抗菌活性。同时通过对抗菌活性结果的分析，建立初步的构效关系，进而探讨大环内酯糖片段和PTC相与：作用方式。鉴于大环内酯的结构特点，前人通常选择将羟基转化成氨基甲酸酯或者羧酸酯这两种合成方法进行修饰[6】。无论是氨基甲酸酯还是羧酸酯对酸都是稳定的，所以本章首先设计合成这两种结构修饰的产物(Figure2．3)，通过比对其抗菌活性，选择较好的修饰方法再相应的进行更多化合物的筛选。TargetcompoundsFigure2．3P．Przybylski小组对交沙霉素6一位乙醛基进行还原胺化反应时，在筛选还原试剂的过程中，得到了一个意外的3．位乙酰氧基消除成a-p不饱和衍生物的产物[7]。他们分析了可能的消除机制，证明了十六元大环内酯3．位乙酰氧基很容易在强碱性条件下进行消除形成6c一∥不饱和化合物(Figure2．4)。这种消除产物的活性并没有文献报道，所以本章设计了去炭霉糖交沙霉素3．位乙酰氧基消除衍生物fFigure2．5)，研究其活性，希望找到具有最佳活性的先导物，以拓展大环内酯结构改造思路，为进一步的结构改造奠定实验基础。 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院R1。R2giveninFigure1R2一NH“．CH3co融‘。’‰，窦PFigure2．4Figure2．5．Targetcompounds第二节合成路线的设计、产物合成与讨论，O、．入．，N＼6√．，，OHI为了可以很好的区分27一位已有的羟基和4’一位水解掉交沙霉素的碳酶糖以后形成的羟基，我们选择在水解掉交沙霉素的碳酶糖以前保护2’．位的羟基。所选择的保护基对于酸性是稳定的，这样在酸性条件下水解碳酶糖时，该保护基不会被消除，同时考虑到大环内酯的耐受性，要求这个保护基必须在温和条件下被去除。结合大环内酯常用保护基的特点，我们选择用乙酰基保护2’一位羟基。具体合成操作为将交沙霉素与过量的醋酸酐在吡啶溶液中室温反应过夜，以98％的收卜o～ 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院率得到了化合物1。通过质谱检查，化合物1分子量为911．5。化合物1的核磁共振碳谱与交沙霉素的核磁共振碳谱比较，我们发现在低场170．2和168．7处多了两个羰基峰，结合质谱数据，说明交沙霉素的两个羟基被乙酰化。同时化合物1的9．位和2’一位碳的出峰位置与交沙霉素比有了较大的左移，所以我们确定9一位和2’．位的羟基被乙酰化而3”．位的羟基并没有被乙酰化。然后化合物1在无水条件下用甲苯磺酸脱除交沙霉素的碳酶糖得到重要中问体2。化合物2中2’．位羟基的乙酰基保护基，可以在温和条件下被甲醇脱除，这样就可以得到去碳酶糖交沙霉素衍生物3fScheme2．1)。Scheme2．1．Reagentsandconditions：(a)aceticanhydride，pyridine，roomtemperature，overnight，98％；(b)4-methylbenzenesulfonicacid，toluene，reflux，18h，67％；(c)methanol，roomtemperature，overnight，99％．P．Przybylskid,组的研究发现：交沙霉素在碱性条件下消除3一位乙酰氧基，形成Ⅱ邓不饱内脂。我们采用类似方法，以氢氧化钠为碱，温和条件下水解化合物3的3一位乙酰氧得Na，口一不饱和化合物4，化合物4在剧烈条件下再进一步水解得到化合物5(Scheme2．2oScheme2．2．Reagentsandconditions：(a)NaOH，THF／HzO，roomtemperature，overnight，90％；(b)NaOH，THF／H20，reflux，ovemight，88％．掣、r广咏g<掣、r尸礅 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院Scheme2．3．Reagentsandconditions：(a)1-isocyanato一4一(trifluoromethyl)benzene，DCM，roomtemperature，overnight，82％；(b)methanol，roomtemperature，overnight，99％，(c)NaOH，THF／H20，roomtemperature，overnight，87％；(d)NaOH，THF／H20，reflux，overnight，88％．对于氨基甲酸酯类衍生物的合成，我们选用2’．位的乙酰基保护的化合物2为起始原料，与4一三氟甲基苯基异氰酸酯在二氯甲烷中室温反应得到化合物6。脱除化合物6的2，一位的乙酰基保护得到化合物7。采用上面化合物4、5类似的制备方法，用氢氧化钠水解化合物7得到化合物8和9(Scheme2．3)。对于羧酸酯类衍生物的合成，我们没有选用与氨基甲酸酯类衍生物类似的合成路线，主要原因是考虑到2’．位和4’一位羟基化学环境类似，用甲醇脱除27-位羟基上乙酰基保护的时候，可能会同时脱除4’．位羟基上的酰基。观察二甲胺糖的结构可以看出，1，一位通过糖苷键连接大环，这增加了的空间位阻，而4’．位羟基离1，．位较远，受空间位阻的影响要明显小于2’．位羟基，所以我们选择直接对化合物3的4’．位羟基进行酯化。为了增加4’一位羟基的选择性，我们没有使用常用的强酰化试剂如酸酐或者酰氯，而是选用缩合剂EDCI，在HOBT催化条件下，使羧酸在温和弱碱性条件下成酯(Scheme2．4o比较化合物3和lO的核磁共振碳谱可以看出，4’一位碳的出峰位置有了大概6ppm的低场移动，而27一位碳的出峰位置没有太大变化，所以我们确定化合物10是4’一位羟基苯甲酰化的产物。3CHO9ko～。p毽。圆一可h。～。尸㈨Ⅵ。 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院Scheme2．4．Reagentsandconditions：(a)benzoicacid，EDCI，TEA，HOBT’chloroform，roomtemperature，overnight，78％．通过以上合成路线，完成了化合物3—5、7．10七个样品的合成。其中以交沙霉素为起始原料通过三步反应以总收率65％合成了化合物3。再以化合物3为原料高收率的得到了化合物4、5。样品化合物7-9以中问体2为起始原料，通过简单反应制各。而样品10是以化合物3为原料，使用EDCI为缩合剂，HOBT为催化剂在氯仿中一步和苯甲酸缩合得到，收率78％。通过比对化合物2、3和10的核磁共振碳谱可以确定酰化位置为4’．位羟基。整个合成路线中，6一位乙醛基没有进行保护，这缩短了合成路线，提高了合成效率。舡甸奴眦颧慨匍1011121314炒国扒1516Figure2．6．Thestructuresofcompound10—17根据抗菌活性测试结果，羧酸酯类衍生物表现出了较好的抗菌活性。为了进一步研究羧酸酯类化合物的抗菌活性和构效关系，我们选用不同的有代表性的羧酸，以32—81％的收率，合成了化合物11—17(Figure2．6)。所有化合物物结构经过高分辨质谱、核磁共振氢谱和碳谱的确定。所选用的羧酸分别是有给电子基团的对甲氧基苯甲酸和有拉电子基团的对硝基苯甲酸、肉桂酸和氢化肉桂酸、带喹啉环的丙烯酸以及两个不带芳环的丁酸和异戊酸。第三节活性测试及讨论首先选择3．5，7．10七个化合物进行了体外抗菌活性测试。选用两类共8种菌 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院株，其中金黄色葡萄球菌5株(其中甲氧西林敏感金葡菌MSSA3株、耐甲氧西林金葡菌MRSA2株)、表皮菌3株(其中甲氧西林敏感表皮葡萄球菌MSSE2株，耐甲氧西林表皮菌MRSEI／0R)。使用的对照为交沙霉素。测试结果以最小抑菌浓度MIC(gg／mL)表示，见Table2．1。Tahie2．1．Invitroantibacterialactivitiesof3．5、7．10MIC(pg／mL)34578910JosamycinSaltreblSSepidermidisMSSA16>64>32>64>64>6481MRSA>32>64>32>64>32MSSA16MSSA16MRSA>32MSSE16>64>32>64>32>64>3264>32>64>64>64>6482>6481>64>6432>6481MRSE>32>64>32>64>32MSSE1664>32>64>64>6482从活性结果可以看出，化合物3的抗菌活性相对于交沙霉素下降了一个数量级水平，说明碳酶糖的存在与否对于交沙霉素的抗菌活性有很大影响。比较化合物3、4、5的抗菌活性可以看出化合物3中大环母体所含有3．位乙酰氧基对于活性非常重要，消除成双键以后活性下降非常多。比较化合物3、7、10的抗菌活性可以看出，用异氰酸酯修饰化合物3的47．羟基以后抗菌活性相对于化合物3下降了很多，但是用苯甲酸修饰化合物3以后抗菌活性和化合物3相当或略有提高，说明用羧酸修饰化合物3的47．羟基相对于异氰酸酯来说可能是一种更有效的修饰方法，这指导我们下一步选用更多类型的羧酸去修饰化合物3。我们选择11．17七个化合物进行了体外抗菌活性测试。选用两类8种菌株，其中金黄色葡萄球菌5株(其中甲氧西林敏感金葡菌MSSA3株、耐甲氧西林金葡菌MRSA2株)、表皮菌3株(其中甲氧西林敏感表皮葡萄球菌MSSE2株，耐甲氧西林表皮菌MRSElye)。使用的对照为化合物3、化合物10和交沙霉素。测试结果以最小抑菌浓度MIC(“g／mL)表示，见Table2,2。从活性结果可以看出，用羧酸修饰成酯后的新衍生物的抗菌活性相比于化合物3的抗菌水平有了一定的提高(化合物12除外)。比较化合物10、1l、12的结构和抗菌活性可以看出给电子的甲氧基取代的苯甲酸酯11和苯甲酸酯衍生物10抗菌活性相当，但是拉电子的硝基苯甲酸酯衍生物12的抗菌活性下降很多。肉一一一一巧嘶一一一㈣啪 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院桂酸酯衍生物13抗菌活性和化合物10的活性相当，当用喹啉环取代肉桂酸的苯环以后，化合物14的抗菌活性没有明显变化。但把肉桂酸的双键变成碳碳单键以后，化合物15的抗菌活性相对于化合物3有了明显的提高，接近了交沙霉素的水平。化合物16、17为简单的脂肪族丁酸酯和3．甲基丁酸酯，化合物16的抗菌活性稍微高于化合物17，达到了了化合物15相当的水平。比较活性最好的化合物15、16，我们发现口一位单取代的丙酸类化合物可能是最佳修饰基团。Table2．2．invitroantibacterialactivitiesof3and10．17MIC(gg／mL)31011121314151617Josamycin&attreusSepidermidisATCCMSSA16832848129213ATCCMRSA>32>64>32>64>32>64>323359l15MSSA168>64>3216848209．6MSSA16832848109．13MRSA>32>64>64>64>32>64>32>64>6432ATCCMSSE168324848l1222809．3MRSE>32>64>32>64>32>64>3209．9MSSE1683248482第四节本章小结1，我们通过几步反应高收率的制备了两类去碳酶糖交沙霉素衍生物(氨基甲酸酯类和羧酸酯类交沙霉素衍生物)以及两类3．位氧乙酰基消除的去碳酶糖交沙霉素衍生物，对它们进行了生物抗菌活性测试。通过抗菌活性结果分析，确定了羧酸酯类交沙霉素衍生物是一个较好的修饰方向。2，选用8个有代表性的羧酸进行筛选，化合物15、16表现出较好的抗菌活性，接近交沙霉素水平，虽然在对耐药菌活性方面没有突破，但是大大提高了十六元大环内酯的酸稳定性，提供了一个提高大环内酯酸稳定性和抗菌活性的研究方向，为以后进一步研究提供了实验基础。3，本章涉及化合物17个，其中对14个样品进行了活性测试。 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院参考文献1，Takashima．H，StructuralConsiderationofMacrolideAntibioticsinRelationtotheRibosomalInteractionandDrugDesign，Curr．Top．Med．Chem．3(2003)991—999．2，Hanson，J．；Ippolito，J．A．；Ban，N．；Nissen，P．；Moore，P．；Steitz，T．M01．Cell2002，10，117．3，(a)Mutak，S．；Mar§id，N．；Kramarid，M．D．；Pavlovid，D．JournalofMedicinalChemistry2003，47，411．(b)Fu，H．；Marquez，S．；Gu，X．；Katz，L．；Myles，D．C．Bioorganic&MedicinalChemistryLetters2006，16，1259．(c)Fu，H．；Marquez，S．；Gu，X．；Katz，L．；Myles，D．C．Bioorganic＆MedicinalChemistryLetters2006，16，1259．(d)Miura，T．；Kanemoto，K．；Natsume，S．；Atsumi，K．；Fushimi，H．；Yoshida，T．；Ajito，K．Bioorganic&Medicinalchemistry2008，16，10129．4，Phan，L．T．；Jian，T．；Chela，Z．；Qiu，Y．一L．；Wang，Z．；Beach，T．；Polemeropoulos，A．；Or,YS．JoumalofMedicinalChemistry2004，47，2965．5，Wang，Z．；Jian，T．；Phan，L．T．；Or,YS．Bioorganic&MedicinalChemistryLetters2004，14，519．6，(a)Xu，Y；Chen，X．；Zhu，D．；Liu，Y．；Zhao，Z．；Jin，L．；Liu，C．；Lei，P．EuropeanJournalofMedicinalChemistry2013，69，174．(B)Li，X．；Ma，S．；Yan，M．；Wang，Y．；Ma，S．EuropeanJoumalofMedicinalChemistry2013，59，209．(C)Kumar,R．；Rathy,s．；Hajare，A．K．；Surase，Y．B．；Dullu，J．；Jadhav,J．S．；Venkataramanan，R．；Chakrabarti，A．；Pandya，M．；Bhateja，P．；Ramkumar,G；Das，B．Bioorganic&；MedicinalChemistryLetters2012，22，476．(D)Kapi6，S．；Cip芒i6P枷etak，H．；PalejJakopovi6，I．；Fajdetid，A．；Ilijag，M．；Stimac，V；Brajga，K．；Holmes，D，J．；Berge，J．；Mihod之id，S．Bioorganic&medicinalchemistry201l，19，7281．7，Przybylski，P．；Pyta，K．；Brzezinski，B．TetrahedronLetters2009，50，6203．一27． 博上学位论文中国医学科学院&北京协和医学院第三章以抗耐药茵活性为指导的交沙霉素结构改造及构效关系研究第一节大环内酯抗生素的耐药机制随着抗生素的滥用等问题，细菌的耐药现象日益显著。金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对大环内酯类药物的耐药性已经非常严重[1，2]。调查显示，2002—2004年美国分离的金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌对红霉素耐药率分别为33．1％和73．2％。2001—2002年美国PROTEKT监测结果显示，肺炎链球菌的红霉素耐药率为27．9％[3]；在韩国，肺炎链球菌对大环内酯抗生素的耐药率高达60％[4]。在我国广州、北京、上海、西安等地肺炎链球菌红霉素耐药率已分别高达79．1％、87．4％、80．0％、96．7％[5]。尽管不同菌株有其主要的耐药机制，不同的地理位置流行着各自的大环内酯耐药机制，但归纳起来细菌对大环内酯类药物的耐药机制主要有核糖体靶位的改变、药物的主动外排、核糖体基因突变、抗生素灭活酶的产生等。一、核糖体靶位的改变erm基因介导靶位点修饰[6]，这是近年发现最多，也是最主要的耐药机制。erm基因编码核糖体甲基化酶，可使细菌核糖体的特定位点23SrRNA发生甲基化，阻止红霉素类大环内酯药物与细菌核糖体的结合，造成大环内酯药物的耐药性。同时还导致细菌对林可霉素、链阳性菌素等抗生素天然或诱导耐药，称为大环内酯、林可霉素、链阳性菌素(MLSB)耐药表型[7]。二、主动外排机制或泵出耐药机制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都可以通过过量表达外排泵这种膜蛋白来产生红霉素抗性作用[8．10]。外排泵是一种运输蛋白，用于将有毒物质(包括临床上所用抗生素)排除细胞外，当细胞膜上的外排泵蛋白将红霉素泵出细胞外的速度远远快于红霉素流进细胞内的速度时，胞内的红霉素浓度就会降低，于是大部分核糖体内没有红霉素的结合而继续合成蛋白，细胞也就能在存在红霉素的环境中存活下来。主动外排系统具有能量依赖性、底物广泛性和生物多样性的特点。金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌对大环内酯药物的耐药模式称为MS耐药表型。该耐药模式由编码主动外排系统的msrA基因介导，以ATP为动力，对14、15元环大环内酯药物及链阳性菌素B专一性耐药。该耐药为诱导性表达，红霉素和其他14、15元环大环内酯药物是诱导剂，对链阳性菌素B的耐药仅在红霉素诱导后产生，对克林霉素保持敏感。 博jj学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院链球菌属中发现的类似酬药模式称为M型。由主动外排基因mefA介导，以质子泵为动力，主要作用底物为十四、十五元环大环内酯，对十六元元大环内酯、克林霉素和链阳性菌素B敏感。三、核糖体RNA突变产生的耐药这种核糖体的突变主要发生在细菌核糖体与大环内酯类药物结合密切相关的区域。机理与由Prm基因编码导致的核糖体甲基化引起的耐药类似[11]。核糖体蛋白发生突变，也会影响抗生素与核糖体的结合。核糖体不同位置的突变能引起多种高水平的耐药及交叉耐药。对酮内酯的耐药可能是由于突变产生的。在肺炎链球菌中，23SrRNAV区2058位碱基A变异为G或U后会造成高水平的MLSB型耐药，2059位碱基A变异为G后会产生对红霉素、阿齐霉素和16元大环内酯的高水平耐药[12，131。四、灭活菌的产生细菌通过菌体自身的酶摧毁红霉素的结构使其失去抗菌能力。大环内酯酶的编码基因为ereA和ereB，存在于金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌以及其他一些革兰阴性菌中。这种酶只能特异性的以14元大环内酯为底物，因此ereA和ereB基因介导的耐药菌，对16元大环内酯仍然敏感【14】。已经报道的使大环内酯失活的酶主要有：大环内酯2’一磷酸转移酶(Mph)、红霉素酯酶和大环内酯糖基转移酶。这些酶使大环内酯失活的机制分别为：红霉素酯酶将红霉素的内酯环水解；大环内酯糖基转移酶将大环内酯的6一脱氧己糖2"-OH糖基化，而大环内酯2’一磷酸转移酶则将ATP上的7一磷酸转移到大环内酯的2"-OH上。五、多重耐药细菌对3种以上不同类抗菌药物耐药者即可称为多药耐药(MDR)[15]。细菌特别是条件致病菌，因经常有机会与各种抗菌药物接触，故在细菌细胞内的质粒、染色体、转座子、整合子等上可有耐药基因或MDR基因的积聚，并且结合、转导和转化而在不同种细菌(如革兰阳性菌和革兰阴性菌)问彼此频繁交换，耐药基因获得较长期存留。转座子和整合子(以及更小的DNA片段)由于相对分子质量小和活动自如，故在耐药基因转移和MDR形成中起主导作用。综上所述，十六元大环内酯类抗生素因没有3一克拉啶糖，所以对泵出耐药菌有活性，同时也不受诱导耐药影响。这种特殊的性质，对于解决细菌耐药性问题，提供了一个好的可优化先导化合物。 博，Ij学位论文中罔医学科学院&北京协和医学院第二节目标化合物设计依据针对细菌耐药问题，对大环内酯类抗生素的结构改造近年来出现了迅速上升的趋势。以泰利霉素[16】和喹红霉素【17】为代表的第三代大环内酯抗生素，称为酮内酯[18]，具有许多突出的优势。他们对大多数的红霉素敏感和耐药菌都具有突出活性，对流感嗜血杆菌也具有较强的抑制作用。其结构特点是都含有一个芳杂环侧链，伸出的侧链结构可以延伸到核糖体23SrRNA亚基的第1I区域，从而使药物与核糖体的作用大大增强(Figure3．1)。Figure3．1泰利霉素作用机制示意图近年来越来越多的实验结果表明，一个合适的芳杂环侧链对于提高大环内酯对耐药菌活性是非常很重要的[19—431。相对于十四元大环内酯在抗耐药菌方面取得的突出成绩，十六元大环内酯的发展相对滞后。在第二章已经提到过，LvT．Phan小组合成了烯丙基苄类产物，其中烯丙基喹啉3．取代产物III．B和其重排产物111．A对敏感菌和耐药菌都表现出了很好的活性(Figure3．2)[441。作者认为引入的芳杂环部分可以与核糖体的碱基间发生7【．兀堆积或者疏水相互作用，增加了药物分子与细菌核糖体的亲和力，从而提高了抗耐药菌活性。 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院Figure3．2TomoakiM．和KeiichiA．课题组以麦迪霉素为原料，用环氧化再开环的方法对12，13一位了进行结构改造[45]。他们用间氯过氧苯甲酸为氧化剂，对麦迪霉素12，13一位进行不对称环氧化，得到单一构型的衍生物，并用NOE确定了构象。再用叠氮化钠打开环氧，再进一步衍生化得到了三个系列产物，并进行了构效关系研究，他们发现在12，13．位形成类似泰利霉素的氨基甲酸酯类五元小环不能提高衍生物活性，反而13．位为羟基，12一位为叔氨基衍生物时的衍生物活性较好。其中化合物IH．C对敏感菌和耐药菌表现出最优异的抗菌活性，对个别菌种的活性以达到或超过克拉霉素。但是整个合成路线步骤较长，在最后脱除缩醛保护时有脱掉碳酶糖的副产物，导致总收率较低。Figure3．3 博+学位论文中国医学科学院&北京协和医学院接下来的工作中，TomoakiM．和TakeshiF．课题组以LeucomycinA7为起始原料，经过多步合成，在3一位羟基引入烯丙基取代基，然后通过heck反应，在双键末端处引入不同的芳环，并进行了构效关系研究【46]。他们发现，当取代基为3一喹啉和4一异喹啉时，衍生物对耐药菌表现出最好的活性(Figure3．4ooH：N＼OFigure3．4R=3．quinolyl4一isoquinolyIphenyl3-pyridyl5。pyrimidinyl1一naphthyf2一naphthyI4．methoxyphenyI4-trifluoromethylphenyl4-biphenylyl4‘(1-imidazolyl)phenyl在此基础上，该课题组继续对柱晶白霉素进行结构修饰，将十六元元大环内酯氧化开环再关环的结构改造，得到了11或15．位含烯丙基芳杂环．11．位氮杂十六元元大环内酯[47】。生物活性显示，此类化合物对erm和m矿机制的红霉素耐药菌和流感嗜血杆菌都有较强活性。15一位连接喹啉环的化合物III．D活性最为突出(Figure3．5o接下来他们继续优化III．D得到化合物III．E，该化合物对大部分测试菌株均达到与泰利霉素相当的抑菌活性；对红霉素耐药的肺炎链球菌和化脓性链球菌，其活性强于泰利霉素[48]。此类化合物有可能作为临床研究的候选物进行后续开发。但是整个合成路线步骤较长，需要多次保护去保护，而且关键中间体——大环内酯开环产物，收率不算高，操作有一一点的危险性。 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院StepscHSteps亡==================，H2NOH=7℃H0H：Ⅲ-EFigure3．5N＼0N＼综上所述，可以看出一个合适的芳杂环侧链对于十六元大环内酯抗耐药菌活性也是同样重要的。对于两种最主要的耐药机制：erm耐药和mef耐药，十六元大环内酯因其结构特点决定了其没有mef耐药，如果可以通过进一步的改造使其殴、丫oJN0k叫∥k叫吵宰邯To毅≯一，。＼硗广率毅办 博+学位论文中国医学科学院&北京协和医学院对erm耐药菌表现出较高的抗菌活性，那这个工作将是非常有意义。本章的工作希望通过对交沙霉素结构改造引入一个芳杂环侧链，来提高其抗耐药菌活性。根据十六元大环内酯本身的结构特点，我们选择交沙霉素6．位的乙醛基作为结构修饰位点。之所以选择醛基为修饰位点主要有两个原因：～、醛基化学性质活泼，易于转化成其他基团，且修饰方法多样；二、在以前的报道中，还没有工作是通过醛基修饰来提高大环内酯的耐药活性。本章将分网个部分来讨论交沙霉素6．位乙醛基的结构改造及其对抗菌活性的影响。第三节氮杂侧链交沙霉素衍生物的合成及构效关系研究3．3．1合成路线设计我们选用还原氨化方法，醛基可以在温和条件下和一级胺或二级胺反应高收率的得到相应的胺基化合物。在以前的工作中，也曾有课题组在十四元大环内酯上引入氮杂侧链或者酰胺侧链来提高其抗耐药菌活性种[20，21，26，341。本节选用含有各种芳杂环的一级胺与交沙霉素6一位乙醛基反应，在大环内酯母核的6一位引入一个氮杂芳杂环侧链。N＼0Figure3．63．3．2产物合成我们选择了十三个含有芳杂环的一级胺：其中5个含有苯环但是其氨基和芳环问隔不同：8个含苯并杂环的苄基胺，在二氯甲烷中低温条件下与交沙霉素反应，用三醋酸硼氢化钠作为还原剂，以16．6％一81．4％收率得到了相应的产物18—30(Scheme3．1)。所有产物的结构都经过高分辨质谱、核磁共振氢谱和碳谱确认。其中个别产物因使用的苄基胺不纯导致收率偏低。 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院OHN＼H2N，R2NaBH(OAc)3o俅H九纵R2／NH～、、O_H7，O、．入．，NA6o--d‘’，0-试℃叼—囝—门幻弋羽弋物、瀚202122弋瀚、羽弋以NlScheme3．1．Reagentsandconditions：(a)amine，sodiumtriacetoxyborohydride，HOAc．DCM，0。C—roomtemperature，16．6％一81．4％．在得到18．30十三个产物的基础上，我们选择对其含有的二级胺进一步修饰。第一种修饰方法是把氨基转化为酰胺，以化合物22为例，选择用醋酸酐在吡啶中低温条件下对其进行胺基乙酰化，以68．0％的收率得到了化合物31。N、A岛OScheme3．2．Reagentsandconditions：(a)aceticanhydride，pyridine，0-25。C，overnight．68．O％．第二种修饰方法是把二级胺转化成更稳定的三级胺。我们选择对化合物22所含的二级胺进行甲基化，使用了碘甲烷和用甲醛还原胺化两种甲基化方法都没 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院有得到满意的结果。于是我们转换思路，不直接对化合物22进行修饰，而是先甲基化1．萘甲胺，再通过还原氨化方法引入到交沙霉素上。最终以1一萘甲胺为起始原料，经三步反应高收率的得到了化合物34，再通过还原氨化反应得到了化合物35。H2HdH■c垒，O：H、Ac!-。’O，．，人．一N＼OAc。r，o“。H35。冷ⅣScheme3．3．Reagentsandconditions：(a)aceticanhydride，pyridine，roomtemperature，overnight，88．7％；(b)Nail，MeI，THF’roomtemperature，ovemight；(c)3NHCl，reflux，overnight，64-3％(twosteps)；(d)amine，sodiumtriacetoxyborohydride，HOAc，DCM，0。C—roomtemperature，60．0％．3．3．3生物活性及讨论我们选择化合物18．3l、35进行了体外抗菌活性测试。抗菌活性委托中国医学科学院生物技术研究所游学甫教授课题组进行测定。选用两种69株实验室保存标准菌株和临床分离菌(包括耐药菌)，其中金黄色葡萄球菌19株(甲氧西林敏感金葡菌MSSA10株、耐甲氧西林金葡菌MRSA9株)、表皮葡萄球菌17株(甲氧西林敏感表皮葡萄球菌MSSE8株，耐甲氧西林表皮菌MRSE9株)、化脓链球菌18主(红霉素敏感化脓链球菌5株，红霉素耐药化脓链球菌13株)、肺炎链球菌15株(红霉素敏感肺炎链球菌ESSP5株，红霉素耐药肺炎链球菌ERSPl0株)。质控菌选用金黄色葡萄球菌ATCC29213、肺炎链球菌ATCC49619。使用的对照药为交沙霉素。测试结果以最小抑菌浓度MIC(}tg／mL)表示，见Table3．1从抗菌活性结果中可以看出，大部分测试样品对敏感菌和耐药菌都没有表现出抗菌活性。只有含萘环，2一喹啉，3．喹啉及6一喹啉环的化合物23．25、27对敏感菌表现出一定的抗菌活性，但是其抗菌活性和交沙霉素相比，都有较大程度的 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院下降，接近两个数量级的水平。这一结果说明其萘环，2一喹啉，3一喹啉及6．喹啉相对于其他芳杂环表现出较好的活性。3．3．4小结1，本章通过还原胺化方法，完成了18个化合物的合成工作，并对其中15个样品进行了抗菌活性测试。2，本章设计、合成的化合物都没有表现出优异的抗菌活性，但是通过比较可以发现萘环和喹啉环是比较合适的芳杂环取代基。 +Nn八Nn^口_【八Nn^Nn八∞-【八Nn八Nn^Nn八Nn^￡0．oWNn^口-【八o．【八Nn^心一心一八∞NnNn^Nn八∞Nn八Nn^o_【^o．【八Nn^o．【八Nn^Nn八Nn人Nn^Nn人Nn八蚧qoNn八Nn^心_^心H八Nn八∞H^Nn^∞一Nn^Nn八Nn^Nn八Nn^Nn八口一八心H八Nn八Nn^心H^Nn八Nn^NnNn八Nn^Nn八Nn^nN．0Nn八婚一^心H^Nn八Nn^∞一^Nn婚一NnNn八Nn^Nn八心"【^∞_【^Nn^o．【^Nn^Nn八Nn^Nn八Nn^Nn八”．oNn八口．【八∞_【八Nn八o_【^Nn八NnNn^Nn八Nn^Nn八蛊_uJ_c_薯爵∞o_岍n—non岔N∞N卜N崞N呐N寸NnNNN—NoN岔_I∞一毽～譬Q钟盒3q譬q晒一．IH岔一峙甙t，UUh《毽N譬o—是葛吣鞋A．(r怠一心岔寸UU一《墨墨a暑。瓮。∞I-∞o一《∞∞譬叫∞o套■力一《∽忡奄t}』乇拳k∞≈懈n∞．∽N_60∞NNNHUU一《∞_≈¨_盎k啦qⅢ^秽．∞∞NNN_UU一《∽葛芒，z毽．口的嚣塑葛≈．力H甙晌nnUU■《nHN甙NUU一《§至徨妒粗岍n，Hn_8IJo∞o口|Aqo三营粤等。召磊黑善uI_【．cj审蔷堡扑噬罢$倏祟司堡扑藻扑幽匦导仪刁4趟扑州鞋 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院第四节去碳酶糖交沙霉素仅邓不饱和羧酸衍生物的合成及构效关系研究3．4．1合成路线设计上一节的工作表明通过还原氨化方法对交沙霉素母核6．位上乙醛基进行的结构修饰产物对敏感菌和耐药菌都没有表现出优异的活性。这一节，我们计划通过Homer-Wadsworth—Emmons反应，继续对交沙霉素的6一位乙醛基进行结构改造，6一位乙醛基将被转化成含有各种特定芳杂环的a一∥不饱和羧酸衍生物。Homer—Wadsworth—Emmons反应是醛和膦酸酯生成烯烃的反应，副产物为水溶性磷酸盐，故后处理较相应的Wittig反应简单的多，具体反应机制见Figure3．7+‰mⅫ≈∞o-M-o‰mⅫ≈∞墨翟以瓣p吣nsiecarbenionO4。高等：、R。垫R凌』。≮≯F。嘛。竺孑厍l1位)舶∞l窑：=I垒b妒0"M"ORO"。R|‘一|d，’o“llpR3≮』Figure3．71．S(s坪)Wkl}国喀qklm-no掣、o‰RDS孙骆OR考虑到交沙霉素结构的复杂性，我们选择结构相对比较简单的去碳酶糖交沙霉素化合物3进行这一节的研究。为了减少实验操作步骤，我们计划合成d—卢不饱和羧酸这一重要中间体，再通过与带芳杂环的胺或者醇缩合得到酰胺或者羧酸酯。Scheme3．4＼H铫谏冀翟。冬～oj凡霄警R．R嗍～儿一吖篓rlIl砷密M，麓。篙哆娃&慧o_哆∞神的曲。～蚺。辩搬◆痧k一《∥犷一 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院3．4．2产物合成在进行设计化合物合成以前，我们先用商业化的膦酰基乙酸三乙酯做模型反应进行化合物38的合成(Scheme3．5o首先用乙酸酐在吡啶中对化合物3的二甲胺糖上的两个羟基进行保护以98％收率得到化合物36。化合物36再在低温条件下和被预先用钠氢处理过的膦酰基乙酸三乙酯反应得到化合物37，收率69．1％。在甲醇溶液中脱除化合物37的乙酰保护基，以99％收率顺利的得到化合物38。比较化合物37和化合物3的核磁共振图谱可以看出，氢谱中10ppm处和碳谱@200ppm处的峰消失证明醛基被修饰，在氢谱大概6．9ppm和6．0ppm处碳谱大概165ppm、158ppm和130ppm处新出现的峰，说明醛基已经转化为仅一口不饱和羧酸酯。同时氢谱中，6．9ppm和6．0ppm峰的耦合常数约为15．6核磁，说明双键为反式结构。3苎，N、、、0H吣yo√夕、、C7，oAc37Q．AcI叶丫YN＼。丫。诋OAc：Scheme3．5．Reagentsandconditions：(a)aceticanhydride，pyridine，roomtemperature，overnight，98％；(b)ethyl2-(diethoxyphosphoryl)acetate，NaH，THF，0-25。C，overnight，69．1％；(C)methanol，roomtemperature，overnight，99％．模型反应成功后，为了得到重要中间体a一∥不饱和羧酸，我们选择先保护膦酰基乙酸酯中的羧酸，在Homer-Wadsworth-Emmons反应成功后，再脱除保护得到羧酸。考虑到大环内酯结构复杂性，我们选择含硅的保护基保护膦酰基乙酸酯的羧酸。具体合成方法是以膦酰基乙酸二乙酯和三甲基硅乙醇为原料，TBTU为缩合剂在氯仿中以89．1％的收率合成了化合物39fScheme3．6o。二IN0 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院。JaO-P=O——(、～。一鹏O39Scheme3．6·Reagentsandconditions：(a)TBTU，TEA，chloroform，roomtemperature，overnight。89．1％．a-]CO)心N囝b-H。叼c=叱NE囝d-HzN弋羽e=H。74、∞f音H2N7‘、]：i：：!兰【：：》a2H2N7、、1(：耋[》一州一蛳一一s蜘，=叱～s灼Scheme3．7．Reagentsandconditions：(a)2-(trimethylsilyl)ethyl2-(diethoxyphosphowl)acetate，Nail，THF,0-25。C，overnight，83．6％；(b)TBAF,THF,roomtemperature，2h，95．8％；(C)TBTU，TEA，CHCl3，0-25。C，overnight，78％一90％；(d)methanol，roomtemperature，overnight，95—98％．通过Homer-Wadsworth—Emmons反应，化合物39与化合物36在低温钠氢条件下反应得到化合物40，产率83．6％。化合物40中的含硅保护基在温和条件下四氢呋喃中被TBAF脱除，以95．8％的收率制得重要中间体41(Scheme3．7)。化合物41在温和条件下和各种含芳杂环的胺或者醇(a．j)缩合，以78—90％的收率制备相应的化合物42a-i。最后用甲醇脱掉化合物42a-i的乙酰保护基，得到最终样品．41．M—O嘞～oO＼v＼■ 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院43a．i，收率95—98％。其中化合物h是以吡啶连咪唑为原料经过两步反应制备，化合物i和j是以巯基吡啶连咪唑经过两步反应制备。吡啶连咪唑和巯基吡啶连咪唑采用本实验室所申请的专利方法制备。[49，50]3．4．3生物活性及讨论我们选择化合物38，43a．i十一个样品进行了体外抗菌活性测试。抗菌活性委托北京大学第一医院临床药理研究所进行测定，所使用的菌株来自卫生部全国抗菌药物耐药监测网(MOHNARIN，China)。选用标准质控菌株3株：肺炎链球菌ATCC49619、金黄色葡萄球菌ATCC29213、流感嗜血杆菌ATCC49247；临床分离菌10株：红霉素敏感肺炎链球菌一11G364；红霉素耐药肺炎链球菌一11J011；红霉素敏感化脓性链球菌一11L264；红霉素耐药化脓性链球菌一11N369；甲氧西林敏感、红霉素敏感金黄色葡萄球菌一118122；甲氧西林耐药、红霉素耐药金黄色葡萄球菌一118117；甲氧西林敏感、红霉素敏感表皮葡萄球菌一11X315；甲氧西林耐药、红霉素耐药表皮葡萄球菌-11C176；阿奇霉素敏感流感嗜血杆菌-11P042；阿奇霉素耐药流感嗜血杆菌一11Q373。使用的对照药为化合物3和交沙霉素。测试结果以最小抑菌浓度MIC(1xg／mL)表示，见Table3．2。从活性结果可以看出，所有合成的样品对敏感菌活性都略低于化合物3，说明新芳杂环侧链的引入虽不能完全补偿交沙霉素失去醛基对抗菌活性的影响，但是其抗菌活性已经比较接近去碳酶糖交沙霉素(平均水平相差1倍左右)，同时很多样品表出对耐药菌较好的活性。乙醇酯38的抗菌活性对于敏感菌和耐药菌都要弱于其他样品，说明芳香杂环对于提高抗菌活性有显著的作用。含苯环和萘环的酯类化合物43b和43e无论对于敏感菌还是耐药菌表现出来的抗菌活性都优于酰胺类化合物，说明酯类化合物对于活性的影响要好于酰胺类。43b和43e的抗菌活性基本相当，说明简单的苯环和萘环对抗菌活性没有太大的区别。在酰胺类化合物中，芳胺和苄胺的抗菌活性要好于含长链的胺(43h、43i、43j)。在所有酰胺类衍生物中，化合物439表现出最好的综合抗菌活性，说明了3一位喹啉芳环相对于苯环和萘环更有利于抗菌活性的提高。3．4．4小结1，通过Homer-Wadsworth．Emmons反应，合成了一系列去碳酶糖交沙霉素0c口不饱和羧酸衍生物，并对其进行了抗菌活性测试。2，带芳杂环的酯类化合物43b和43e，表现出对敏感菌和耐药菌突出的抗菌活性。3，本节一共合成了32个化合物，其中11个为样品。 葛湛落洁o。^菹藩u^A^A^寸。。荚荚=葛英里荚葛A荚荚葛A苔=婆里葛A=葛AAA葛A一^一u葛A荚藩A斟荚荚是荚葛A葛A葛A葛A藩A。。葛A葛=葛葛=葛譬藩A要要塞葛A芙荚o。葛洁o。英荚荚葛A吴荚N洁=。o斜三m=o。窝霉．n!里A一^一^A^A^一寸受葛=葛洁=葛葛荚葛葛A∞裔寿暑罱高并吞鬲；胃n寸n寸量o∞NvN譬∞蓬譬～—雹n卜n∥HH吣NYN譬吣，2上，芒～—瑶N寸。厶．【一III_Hu∽¨邻r是k∞邻_}Q∞．∽口卜HUHH∞_!≈_}塞k∞喵_}盆∞．∽叭Hn)(H__【III∞§芒葛毽萌卜_H筒HH§墅矗≈．oNNH∞HHIILlo器嚣∞∞o瓮．∽甙崎n乏__∞叫譬∞∞o≈鼠．力寸岭一广I__I．基o≈N￡0—盘葛吣跫鱼．力一一oII一一≈～譬。鼬宅葛吣譬鱼，(T寸崎n0HH一厂I＼眦_【II，)一．爵n寸，∞n-o∞o口一>{o时一毫乍∞_o高ql__【H昂。妇～，LIIH．N．n∞一声-—一避扑幽罢喜谣等≈堡扑凄扑幽匝导．≮o上爿I，．士=一．母一 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院第五节交沙霉素a邛不饱和羧酸衍生物的合成及构效关系研究3．5．1合成路线设计在第四节的工作中，运用Homer—Wadsworth—Emmons反应，合成了一系列去碳酶糖交沙霉素a一口不饱和羧酸衍生物。由于是以去碳酶糖的交沙霉素为起始原料，所以其抗菌活性和交沙霉素相比还有较大的差距。在第二章的工作中已经提到过，去掉碳酶糖后交沙霉素的活性会下降一个数量级。在这一节的工作中，我们直接选择对交沙霉素进行结构改造。由于交沙霉素结构相对复杂，构象变化多，对其6一位乙醛基的结构改造的难度也相对更大。本小节设计合成交沙霉素6c一∥不饱和酰胺、以一卢不饱和羧酸酯和d—口不饱和酮三个系列(Figure3．8)。其中交沙霉素6c一∥不饱和酰胺系列的合成路线将采用第二节里面酰胺类化合物类似合成路线，即通过交沙霉素a一卢不饱和酸和各种胺缩合得到相应的酰胺。但是对于a一口不饱和羧酸酯系列的合成，由于交沙霉素本身带有三个未保护的羟基，如直接使用羧酸和对应的醇直接缩合可能存在选择性问题，所以我们将选用新的合成方法，先把各种醇转化成对应的膦酰基乙酸酯，再通过Homer．Wadsworth．Emmons反应直接合成相应的6[一口不饱和羧酸酯。对于。[一口不饱和酮系列我们也准备采用类似的方法，先合成相应的膦试剂，再引入到大环母核中。Figure3．8．Targetcompounds3．5．2产物合成3．5．2．1a-p不饱和酰胺系列的合成通过Homer—Wadsworth．Emmons反应，交沙霉素在无水四氢呋喃中低温条件下与被钠氧预先处理过的化合物39反应得到化合物50，产率89．2％。化合物50中的含硅保护基在温和条件下被TBAF在四氢呋喃中脱除制得重要羧酸中间体51。化合物51在温和条件下和各种含芳杂环的一级胺，以TBTU为缩合剂在氯 博』-学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院仿中，以41．6．80．8％的收率制备相应的化合物52-57(Scheme3．8)。0H≤以竺碳oI上一．繇I；13=COH7，OAc’，oAcTMSOH：52．57N＼O甸叼飞。M～眠飞飞52535455S657Scheme3．8．Reagentsandconditions：(a)2-(trimethylsilyl)ethyl2-(diethoxyphosphoryl)acetate，NaH，THF,0-25。C，overnight，89．2％；(b)TBAF,THF,roomtemperature，2h；(C)amine，TBTU，TEA，CHCl3，0-25。C，overnight，41．6—80．8％．0H’，0AcO-P=o，2。45(m，1H)，2。38(S，3H)，2。32—2．27(m，2H)，2．22—2．05(m，2H)，2．00(S，3H)，1．85(S，3H)，1．63(1TI，2H)，1．57(rn，1H)，1．45(S，9H)，1．24(S，1H)，1．23(d，J=6．0，3H)，1．07(d，户5．6，3H)，0。97(d，户6．4，3H)，0，92(m，1H)．”CNMR(100MHz，CDCl3)6172．4，170．1，170．0，170．0，166．3，154．8，149．1，138．2，133．5，133．1，133．0，131．8，128．2，127．9，127．6，127．5，126。1，126。1，122．7，122．6，103。2，84．9，79．3，76．5，75．9，71．5，71．1，69．6，69．4，69．0，68．8，66．0，62．5，46．2，41．2，40．9，38．6，36．9，35．4，34．9，31．8，31．7，31．3，31．0，29．6，29．6，28．4，21．3，20．5，20．3，17．1，15．0．HR—MS(ESI)[M+H]十m／z1063．5750，calcdforC58H83N2016+1063．5737．化合物98将5．00克四氢毗喃一4一甲酸(O．038m01)溶解在100毫升的乙醇中，低温缓慢滴加10毫升的氯化亚砜。滴毕，加热至回流，回流过夜。次日，旋干，残余物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸ZA旨=2：I)得到4．6克油状物98，收率76．5％。1HNMR(400MHz，CDCl3)64．15(q，J=7．2，2H)，3．96(td，乒15．6，3．6，2H)，3．43(td，户11．2，2．4，2H)，2．52(m，1H)，1．82一1．76(m，4H)，1．26(t，J--7．2，3H)．化合物99将2．88克化合物99(0．018m01)溶解在20毫升的二氯甲烷中，于一78摄氏度氩气保护条件下滴加20毫升的DIBAL—H(1M／Lo滴毕，低温搅拌2小时后恢复至室温，5毫升饱和食盐水淬灭反应，200毫升二氯甲烷稀释，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到1．88克油状物99，收率90．5％，直接用于下一步。化合物100将4．90克膦酰基乙酸三乙酯(0．022m01)溶解在50毫升的无水四氢呋喃中，低温分批加入1．08克氢化钠(60％，0．027t001)，搅拌半小时后加入2．07克化合物100f0．018molo加毕，室温搅拌过夜。次曰，旋干，残余物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)得到2．28克油状物100，收率75．9％。1HNMR(400MHz，CDCl3)66．90(dd，J=16．0，6．8，1H)，5．80(d，J=15．6，1H)，4．19(q，J=7．2，2H)，3．99(d，J--10．8，2H)，3．44(t，J=11．6，2H)，2．38(m，1H)，1．68(m，2H)，1．59—1．43(m，3H)，1．29(t，J--7．2，3H)．．132． 博士学位论文中困医学科学院&北京胁和医学院化合物101将O．86克化合物100(4．67mm01)溶解在20毫升的乙醇中，加入0．93克氢氧化钠，室温搅拌过夜。次日，旋掉溶剂后，残余物溶解在10毫升的水里，用2N的盐酸调节其pH值为l~2，分三次用20毫升乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到0．70克白色固体101，收率96．0％。IHNMRf400MHz，CDCl3)J7．00(dd，J=16．0，6．4，1H)，5．81(d，J=16．0，1H)，4．01(m，2H)，3．69(m，2H)，2．29(m，1H)，1．69(ITI，2H)，1．55(m，2H)，1．18(m，1H)．化合物102将1．28克化合物100(6．95mm01)溶解在20毫升的乙醇中，加入o．2克钯碳，氢气环境下室温搅拌过夜。次日，过滤，旋掉溶剂后，得到化合物102粗品，直接用于下一步。。HNMR(400MHz，CDCl3)64．13(q，J=6．8，2H)，3．95(dd，J=11．2，4．0，2H)，3．36(t，J=9．0，2H)，2．32(t，户8．4，2H)，1．62—1．45(m，5H)，1．31(dd，L，三12．4，4．4，2H)，1．26(t，,／--7．2，3H)．化合物103将上步制备的粗品102溶解在30毫升的乙醇中，加入1．45克氢氧化钠，室温搅拌过夜。次日，旋掉溶剂后，残余物溶解在10毫升的水里，用2N的盐酸调节其pH值为1～2，分三次用20毫升乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到1．03克白色固体103，二步收率89．8％oIHNMR(400MHz，CDCl3)J11．34(br,1H)，3．97(dd，J=11．2，4．4，2H)，3．37(td，J=11．6，2H)，2-38(t，J=11．6，2H)，1．60(m，4H)，1．53(m，1H)，1．29(qd，J=11．6，4．0，2H)．化合物104将13．45克膦酰基乙酸三乙酯(0．06m01)溶解在150毫升的无水四氢呋喃中，低温分批加入3．20克钠氢(60％，O．08m01)，搅拌半小时后加入10．67克1．叔丁氧羰基哌啶一4一甲醛(0．05m01)。加毕，室温搅拌过夜。次日，旋干，残余物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到12．38克油状物104，收率87．4％。1HNMR(400MHz，CDCl3)巧6．89(dd，J=16．0，6．8，1H)，5．80(d，户15．6，1H)，4．19(q，J：7．2，2H)，4．11(m，2H)，2．76(t，J=12．0，2H)，2．29(m，1H)，1．72(m，2H)，1．46(S，9H)，1．29(t，3=7．2，3H)．化合物105将8．00克化合物104(28．2mm01)溶解在100毫升的乙醇中，加入1．2克钯．133— 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院碳，氢气环境下室温搅拌过夜。次日，过滤，旋掉溶剂后，得到6．42克油状物102，收率79．8％，直接用于下一步。1HNMR(400MHz，CDCl3)古4．12(q，J=7．2，2H)，4．07(m，2H)，2．66(t，J=12．0，2H)，2．32(t，J=7．6，2H)，1．65(d，户13．2，2H)，1．58(q，J=11．6，2H)，1．45(S，9H)，1．25(t，J=7．6，3H)．化合物106将1．40克化合物105(4．91mm01)溶解在20毫升的乙醇中，加入o．98克氢氧化钠，室温搅拌过夜。次日，旋掉溶剂，残余物溶解在10毫升的水里，用柠檬酸调节其pH值为5，分三次用20毫升乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，残余物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到0．85克白色固体化合物104，收率67．3％。1HNMR(400MHz，CDCl3)64．09(m，2H)，2．67(m，2H)，2．39(q，J=7．6，2H)，1．68—1．57(m，4H)，1，45(S，9H)，1．11(1TI，3H)．化合物107将5．42克化合物105(O．019m01)溶解在10毫升的乙醇中，低温加入25毫升乙酰氯，室温搅拌过夜。次日，旋掉溶剂后，得到3．56克白色固体化合物107，收率84．5％。hNMR(400MHz，CDCl3)J9．10(S，1H)，8．87(S，IH)，3．57(S，1H)，3．18(d，乒12．4，2H)，2．32(t，J=6．8，2H)，1．74(d，乒13．2，2H)，1．47(t，J=8．8，3H)，1．30(m，2H)．化合物108将0．50克化合物107(2．41mm01)溶解在10毫升的吡啶中，低温滴加0．37克醋酸酐(3．61mm01)，室温搅拌过夜。次日，旋干，残余物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到0．47克白色固体化合物108，收率92．2％。1HNMR(400MHz，CDCl3)64．59(d，J__13．2，1H)，3．79(d，J=13．6，IH)，3．67(S，3H)，3．00(td，J=11．6，2．5，1H)，2．51(td，J=11．6，2．5，1H)，2．34(t，J=7．6，2H)，2．07(S，3H)，1．72(m，2H)，1．60(q，J=6．8，2H)，1．49(m，1H)，1．10(m，2H)．化合物109将0．48克化合物108(2．25mm01)和l毫升的水加入到9毫升的四氢呋喃中，加入0．27克氢氧化钠，室温搅拌过夜。次日，旋掉溶剂后，残余物溶解在10毫升的水里，用2N盐酸调节pH值到1～2，分三次用20毫升乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到0．37克白色咧体化合物109， 博Ij学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院收率82．6％。1I-INMR(400MHz，CDCl3)古4．59(d，J--13．6，1H)，3．79(d，J=13．6，1H)，3．01(td，乒13．2，2．0，1H)，2．52(td，d=lO．4，2．0，1H)，2．37(t，J=8．0，2H)，2．10(S，3H)，1．74(m，2H)，1．60(q，乒7．6，2H)，1．53(m，1H)，1．11(m，2H)．化合物110将3．00克化合物2(4．39mm01)和0．89克三乙胺(8．78mm01)溶解在50毫升的氯仿中，0摄氏度滴加0．75克甲基磺酰氯(6．58mm01)。加毕，低温搅拌半小时后，恢复室温再搅拌半小时。反应性用100毫升二氯甲烷稀释后，依次用100毫升饱和碳酸钠溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物110粗品，直接用于下一步。化合物111、112将3．34克上步制备的化合物110(4．39mm01)粗品溶解在5毫升的DMF中，室温加入0．57克的叠氮钠(8．78mm01)固体，加热到80摄氏度，80摄氏度搅拌过夜。反应液用50毫升乙酸乙酯稀释后，分6吃用30毫升的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。残留物经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到0．59克白色固体111和1．64毫克白色固体112，二步收率71．6％。化合物1111HNMR(600MHz，CDCl3)d9．62(s，1H，18一H)，6。69(dd，．／--14．4，10．2，1H，11一H)，6．05(dd，J=15．0，10．8，1H，12一H)，5．86(td，J--11．4，3．0，1H，13一H)，5．57(dd，J=15．0，10。2，IH，10一H)，5。10(d，乒11．4，1H，3一H)，5．06(dd，乒10．2，4．2，1H，9一H)，5．00(m，1H，47一H)，4．87(dd，J--9．6，7．8，1H，2’一H)，4．61(d，。，-7．8，1H，l’一H)，3。96(d，乒9．0，1H，5一H)，3．51(S，3H，21一H)，3．22(m，1H，5’·H)，3．19(d，J--9．0，1H，4一H)，2．82(dd，1H，17一H)，2．73(dd，1H，2一H)，2．70(m，1H，3’一H)2．47(S，6H，7’，8’一H)，2．33(S，3H，20一H)，2．29(d，．厂_12．6，1H，2一H)，2．19(m，1H，14一H)，2．14(m，1H，8-H)，2．06(S，3H，24一H)，2．05(S，3H，9’一H)，1．49(m，1H，7-H)，1．3l(d，J=6．0，3H，16．H)，1．26(d，J=6．0，3H，6’一H)，1．02-O．98(m，6H，19一H，8-CH3)，0．91(m，1H，7-H)．¨CNMll(100MHz，CDCl3)占200．9，170．5，170．1，169．7，168．9，138．0，133．8，131．4，122．2，100．6，85．1，76．1，75．7，71_3，70．5，69．1，68．9，65．4，63．5，62．0，41．9，40．8，40．7，37．1，31．1，29．6，28_2，21．3，21．2，21．1，20．3，18．3，14．9一135． 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院化合物1121HNMR(600MHz，CDCl3)古9．65(S，IH，18·H)，6．71(dd，t，=15．0，10．2，1H，11一H)，6．07(dd，J--15．0，10．8，1H，12一H)，5．89(td，户11．4，3．6，1H，13一tt)，5．58(dd，J=15．0，10．2，1H，10-H)，5。12(d，J=10．8，1H，3一H)，5．06(dd，J--10．2，4，2，1H，9一H)，5．03(d，J--7．8，IH，1’一H)，5．00(m，1H，4’一H)，4．98(dd，，1H，2’一H)，3．99(d，户9．0，1H，5一H)，3．93(m，1H，5’一H)，3．60(S，3H，21-H)，3．22(d，乒9．6，1H，4一H)，2．80(m，IH，17-H)，2．77(d，J--5．4，1H，37一H)，2．62(dd，户18．6，2．4，1H，2-H)，2．52(S，6H，7’，8’一H)，2．49—2．48(m，2H)，2．35(s，3H，20-H)，2．30(d，户12．6，1H，2一H)，2．24—2．16(m，2H，14-H，8．H)，2．14(S，3H，24一H)，2．09(s，1H)，2．05(S，3H，9，．H)，1．63(s，3H，8一CH3)，1．47(m，IH，7-H)，1．31(d，．／--6．0，3H，16一H)，1．21(d，乒6．6，3H，6’一H)，1．01(d，3=6．6，3H，19-H)，0．94(m，1H，7一H)．”CNMR(100MHz，CDCl3)d200．8，170．6，170．1，169．8，169．8，138．0，133．9，131．4，122．1，98．2，84．8，76．2，75．9，72．3，70．3，69．2，68．9，66．3，62．1，56．7，43．3，41．8，40．7，37．2，31．1，29．8，28．3，21，2，21．1，20．6，20．3，16．3，14．8．化合物113将化106毫克的合物111(0．15mm01)溶解在20毫升的甲醇中，加热回流过夜。次日，旋干反应液，以98．0％收率得到98毫克白色固体113。iHNMR(400MHz，CDCl3)d9．67(S，1H，18-H)，6．70(dd，，=15．2，10．4，1H，11-H)，6．08(dd，J--14．8，10．4，1H，12一H)，5．86(td，J--11．2，3．2，1H，13一H)，5．57(dd，J--14．8，9．6，1H，10-H)，5．11—5．04(m，2H，9-H，3-H)，5．00(m，1H，5一H)，4．50(d，J--7．2，1H，1’·H)，3．95(d，J--9．6，1H，5一H)，3．56(S，3H，21一H)，3．32—3．20(m，3H)，3．01(m，1H，4’一H)，2．83(dd，1H，17-H)，2．72(dd，1H，2一H)，2．6l(m，1H，3’-H)，2．51(S，6H，7’，8’一H)，2．48—2．39(111，2H)，2．29(S，3H，20一tt)，2．27—2．15(m，2H)，2．01(S，3H，24一H)，1．56(m，1H，7-H)，1．27-1．24(m，6H)，0．95(d，户6．4，3H，8-CH3)．”CNMR(100MHZ，CDCl3)巧201．1，170．7，170．2，169．9，138．1，133．9，131．6，122．2，103．4，84．8，77．1，76．3，71．9，69．6，69．2，69．1，62．9，62．5，42．0，41．1，40．8，37．2，31．3，30．1，28．5，21．4，21．2，20．4，18．2，14．9．化合物114将88毫克化合物113(0．13mm01)和68毫克的三苯基磷(0．26mm01)溶解在2毫升水／四氢呋喃溶液中(1：10)，加热回流过夜。LCMS检查分子量正确。浓缩后产品变坏，反应失败。一136— 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院化合物115将化400毫克的合物112(0．56mm01)溶解在5毫升的甲醇中，室温加入30毫克甲醇钠(O．56mm01)，室温搅拌过夜。次日，旋干反应液，残留物经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到150毫克白色固体115，收率40．2％。1ItNMR(400MHz，CDCl3)巧9．67(s，1H，18一H)，6．69(dd，J--15．2，10．4，1H，11-H)，6．07(dd，J--14．8，10．4，1H，12一H)，5．86(td，J--11．2，3．2，1H，13一H)，5．56(dd，J=15．2，10．0，1H，10一H)，5．10(d，J=11．2，1H，3一H)，5．05(dd，J--lO．0，4．0，1H，9一H)，4．99(Ill，1H，4’-H)，4．69(d，J=8．0，1H，1’一H)，4．30(t，户6．8，1H)，4．22(d，J=3．2，1H)，3．96(d，J=9．2，1H，5-H)，3．90(m，1H，5’一H)，3．76(m，1H)，3．53(S，3H，21-H)，3．24(d，J--9．2，1H，4一H)，2．83—2．70(m，2H)，2．66-2．51(m，2H)，2．49(S，6H，7’，8’一H)，2．29(S，3H，20一H)，2．26-2．12(m，3H)，2．04(S，1H)，2．00(s，3H，24一H)，1．71(ITI，1H，7一H)，1．50-1．39(m，2H)，1．26(d，J=6．4，3H，16-H)，1．17(d，J--6．4，3H，6’一H)，0．96(d，J--6．0，3H，19-H)，0．89(m，1H，7一H)．”CNMR(100MHz，CDCl3)6200．9，170．7，170．3，169．8，138．1，134．0，131．5，130．8，128．8，122．1，101．5，84．8，76．3，71．2，70．6，69．3，69．0，66．0，65．5，62．2，58．6，43．3，42．1，40．8，37．3，31．3，30．5，30．2，28．6，21．3，21．2，20．4，16．5，14．9．化合物116采用化合物114类似方法合成，未能得到产品，反应失败。化合物117将0．31克化合物61(0．90mm01)溶解在5毫升的无水四氢呋喃中，在0摄氏度分批加入45毫克的氢化钠(60％，1．12mm01)，低温搅拌半个小时以后，一次性加入0．53克化合物111(o．75mm01)，再低温搅拌一个小时，然后缓慢恢复至室温，室温搅拌过夜。次日，减压旋掉溶液后，残留物经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯=3：1)得到0．44克白色固体化合物117，收率：65．8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)68．9l(m，1H)，8．17(m，1H)，8．10(m，IH)，7．83(m，1H)，7．72(m，1H)，7．56(m，1H)，7．02(td，J=15．6，8．0，1H)，6．66(dd，J--14．8，10．4，1H，11一H)，6．04—5．97(m，2H)，5．73(td，3=11．2，3．2，1H，13一H)，5．56(dd，J=l5．6，10．0，1H，10一H)，5．38-5．29(m，2H)，5．18(dd，J--lO．0，4．0，1H，9一H)，5．02—4．95(m，2H)，4．87(dd，J=lO．0，7．6，1H，2’一H)，4．72(d，J--7．6，1H，1’·H)，4．11(m，1H)，3．80(d，J=9．2，1H，5-H)，3．48(s，3H，21一H)，3．25(m，1H，5’-H)，3．14(d，J=9．2，1H，4·H)，3．02(m，1H)，2．66(m，2H)，2．42(S，6H，7’，8’一H)，2．17(m，1H)，2．04(S，1H)，2．01(S，3H，24一H)，2．00(s，3H，9’一H)，1．71(m，1H)，1．55(m，2H)，一137． 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院1．46—1．32(m，1H)，1．28—1．25(m，6H)，1．16(d，J--6．0，3H，6’一H)，O．84(m，J--6．8，3H)，0．82(m，1H，7-H)．13CNMR(100MHz，CDCl3)d170．1，169．9，169．8，168．8，166．0，150．7，149．5，147．8，138．2，135．7，133．5，131．6，129．7，129．2，128．8，127．8，127．5，126．9，122。6，122．3，100。3，85。4，75．8，74．3，71．6，70．6，69．3，69．0，67．7，63．4，61．9，40．9，36．8，34．6，31．2，30．6，29．5，21．3，21．3，20．4，20．2，18．4，15．0．化合物118将100毫克化合物117(0．11mm01)和144毫克的三苯基磷(0．55mm01)溶解在5．5毫升水／四氢呋喃溶液中(1：10)，加热回流过夜。次日，反应液加入50毫升二氯甲烷，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。残余物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇：三乙胺=20：1000：1)得到82毫克白色同体化合物118，收率86．1％。1I-INMR(400MHz，CDCl3)占8．90(m，1H)，8．17(m，1H)，8．10(d，J--8．4，1H)，7．83(d，J--8．0，1H)，7．84—7．64(m，2H)，7．56(m，1H)，7．46(In，1H)，7．04(m，1H)，6．67(dd，J--14．8，10．8，1H，11一H)，6．05—5．99(m，2H)，5．74(m，1H，13一H)，5．57(dd，J=15．2，10．4，1H，10一H)，5．40—5．30(m，2H)，5．19(dd，J--lO．0，4．0，1H，9-H)，4．99—4，94(m，3H)，4．74(d，J--7．6，1H，l’·H)，3．85(d，J--9．2，1H，5一H)，3．49(S，3H，21一H)，3．21(m，1H，5’一H)，3．13(d，J=8．8，1H，4·H)，2．66(m，2H)，2．49—2．40(m，2H)，2．37(S，6H，7’，8’一H)，2．35—2．03(m，3H)，2．00(S，6H，97一H)，1．94-1．89(m，2H)，1．56(m，2H)，1．24—1．20(m，6H)，0．97(d，J=6．8，3H，6’一H)，0．85(m，1H，7一H)．”CNMR(100iV[nz，CDCl3)d169．9，169．9，169．8，168．8，166．0，150．7，149．7，147．8，138．1，135．7，133．4，131．6，129．6，129．2，128．8，127．8，127．5，126．8，122．7，122．2，100．4，85．5，75．8，74．3，73．7，71．2，69．4，68．9，68．4，63．3，61．8，54．8，46．0，40．8，36．8，34．7，31．2，30．5，29．6，21．5，21．2，20．4，20．2，18．4，15．0．化合物119将82毫克化合物118(0．095mm01)溶解在2毫升的甲醇中，加热回流过夜。次同，将反应液旋干得到72毫克白色固体化合物119，收率92，4％。1ItNMR(400MHz，CDCl3)68．92(S，1H)，8．19(S，1H)，8．11(d，J--8．4，1H)，7．85(d，J--8．0，1H)，7．74—7．64(m，2H)，7．56(m，1H)，7．46(m，1H)，7．叭(rll，1H)，6．67(dd，J--15．2，10．4，IH，11一H)，6．05(dd，J=14．8，10．8，1H)，5．97(d，J--15．6，1H)，5．74(td，J--I1．2，3．6，1H，13一H)，5．58(dd，J--14．8，9．6，1H，10一H)，5．36—5．29(m，2H)，5．20(dd，J--lO．0，3．6，1H，9一H)，5．02—4．99(m，2H)，4．47(d，J--7．6，1H)，3．79(d，J=9．6，1H)，3．55(S，3H，21一H)，3．45(dd，J--16．8，7．2，1H)，3．22(d，J=10．0，1H)，3．18(m，1H)，3．04(m，1H)，2．69(t，户13．2，1H)，2．50(S，6H，7’，8’一H)，2．48(S，1H)，一138． 博士学位论文中国医学科学院&北京执和医学院2．45—2．34(m，2H)，2．25—2．21(ITI，2H)，2．11(m，1H)，2．05(S，lH)，2．01(S，3H，24-H)，1．91(S，3H，9’一H)，1．65(m，2H)，1．36(m，IH)，1．24—1．22(m，6H)，1．17(d，乒6．0，3H，6’一H)，0．98(m，户6．4，3H)，0．93(m，1H，7一H)．"CNMR(100MHz，CDCl3)艿170．1，170．0，169．8，165．9，150．8，149．6，138．2，135．8，133．5，132．0，131．7，129．7，129．2，128．8，127．9，127．5，126．9，122．6，122．3，104．4，84．7，77．5，75．9，75．0，71．3，70．0，69．2，68．9，63．5，62．4，54．5，45．8，41．6，40．9，36．9，34．8，31．3，31．0，21．3，20．5，20．2，18．0，15．0．HR—MS(ESI)[M+H]+m／z824．4340，calcdforC44H62N3012+824．4328．化合物120将72毫克化合物118(O．087mm01)溶解在1毫升的乙醇中，加入43毫克的化合物125(O．175mm01)后，加热至回流，回流搅拌过夜。次日，旋干，残余物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇：三乙胺=20：1000：1)得到41毫克白色固体化合物120，收率44．8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)d8．92(S，1H1．8．19≮篓i塞二．．|翌壁一|塞塑|洳兰墅缕翌型塑望瓣{；_畦辩j‰獬淑鲢蜘_妇彰馘饿自#潍静《拙强测辐捌#撼≈恻雠l‰《|№§豁。舔薯}溉1勰嘴瓣链键鞲辩《瓤t藉囊罄鬟谢麟li鞲菊l§穗t《蚓舔蝴l躺嘲《嚣蝎《铡潦娟#键穗鹕|羲嚣|3潮鞠{#螭}+嘲冽蠲劐；嘲删獬lV珏}韩替Ⅸl掰鹅攀女i瓣{《∞}粥峨∞嘲4甓嘲§甓鹳莹|躺|《漱l1“c{I辫。萼姆嘴。鼙l辑硎翅3；l露；}鞭糍删球l敞|删铡删《⋯-，⋯，，⋯，、‘，umu，--‘J，厶·-，J一厶·J-t＼u1"，11，"二·Ju。二·二二LlilT厶11J，二t■J一二·u‘t(m，2H)，2．01(S，3H，24一H)，1．93(m，3H)，1．65(m，2H)，1．39(t，J--7．2，2H)，1．35(d，J=-6。0，lH)，1．26—1．23(m，4H)，1．14(s，2H)，1。09(d，J=6．4，3H，6’一H)，0．98(d，J=6．4，6H)，0．90(1TI，lH，7一H)．”CNMR(100MHz，CDCl3)占172．1，170．1，170．0，169。8，165。9，150。7，149．5，147．8，138．2，135．9，133．5，131．7，129．7，129．1，128．8，127．9，127．6，126．9，122．7，122．4，105．1，103．9，84．7，77．2，75．9，71．O，70．5，69．7，69．2，69．O，68．4，68．1，63．5，62．4，61．1，53．4，45．7，43．3，40．9，36．9，34．8，31．3，31．0，30．0，27．3，25．5，22．3，21．3，20．5，20．2，18．5，18．0，15．0，8．64．HR—MS(ESI)【M+H】十rrdz1052．5681，calcdforC56H82N3016+1052．5690．化合物121化合物121采用化合物117类似方法合成。白色固体，0．42克，73．2％olHNMR(400MHz，CDCl3)每8．92(S，1H)，8．18(S，1H)，8．11(d，J--8．4，1H)，7．84(d，J=8．0，1H)，7．73(rfl，1H)，7．57(1TI，1H)，7．03(rll，1H)，6．67(dd，J--15．2，10．8，一139— 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院1H，11一H)，6．07(1TI，1H，12-H)，6．00(d，J=16．0，1H)，5．74(td，乒11．6，3．2，1H，13一H)，5。58(m，1H，10一H)，5．36—5．30(m，2H)，5．20(dd，J--10．0，4．0，1H)，5．01(m，2H)，4．80(d，J=8．0，1H，17一H)，4．21(m，IH)，3．97(m，1H，5一H)，3．79(m，2H)，3．55(s，3H，2l—H)，3。22(d，J=9．2，1H，4·H)，2。71(m，2H)，2．51(m，IH)，2．43(s，6H，7’，8’一H)，2．39(s，3H，20一H)，2．25(m，1H)，2．12(m，1H)，2．05(d，,／--9．6，1H)，2．01(s，3H，24一H)，1．92(s，3H)，1．60(m，1H)，1．25—1．23(in，6H)，1．18(d，户6．0，1H)，0．97(d，J=6．8，3H，19一H)，0．89(ITl，1H，7一H)．”CNMR(100MHz，CDCl3)万170．1，170．0，169．8，166．0，150．8，149．4，147．8，138．2，135．8，135．7，133．6，131．7，129．7，129．3，128．9，127．9，127．6，126．9，122．6，122．5，101．5，84．8，75．9，71．4，70．7，69．3，69．0，66．0，63．5，62．1，58．6，43．3，40．9，36．9，34．8，31．3，29．9，21．3，20．5，20．3，16．7，15．1．化合物122化合物122采用化合物118类似方法合成。白色固体，150毫克，76．8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)68．89(s，1H)，8．16(s，1H)，8．09(d，J--8．4，1H)，7．81(d，J--8．0，1H)，7．70(m，1H)，7．54(m，1H)，7．06(m，1H)，6．65(dd，J=14．8，10．8，1H，1l—H)，6．07—5．98(m，2H)，5．73(td，J=-10．0，3．2，1H，13一H)，5．56(m，1H，10一H)，5．35—5．31(m，2H)，5．19(dd，J--10．0，4．0，1H)，4．97(m，2H)，4．69(d，乒7．2，1H，1’一H)，4．04(m，1H)，3．80(d，J=8．0，1H)，3．54(s，3H，21-H)，3．22(d，．／--8．0，1H，4·H)，2．66(m，1H)，2．51(m，1H)，2．39(s，6H，7’，8’一H)，2．37(s，3H，20一H)，2t30(m，IH)，2．22-2．02(ITI，3H)，1．99(s，3H，24一H)，1．88(s，3H)，1．61(d，J--8．0，1H)，1．24-1．21(ITI，6H)，0．95(d，J--6．4，3H，19一H)，O．89(m，1H，7-H)．uCNMR(100MHz，CDCl3)6170．1，169．9，166．1，150．9，150．8，149．8，147．8，138．1，135．8，133．5，131．7，129．7，129．3，128．9，127．9，127．9，126．9，122．7，122．3，101．6，84．8，76．0，75．7，70．2，69．8，69．2，69．1，69．0，63．4，62．2，46．8，46．0，43．5，40．9，36．9，35．0，31．3，31．0，29．7，21．3，20．5，20．3，17．0，15．0，10．3，HR—MS(ESI)[M+H]十m／z824．4336，calcdforC44H62N3012+824．4328．化合物123化合物123采用化合物120类似方法合成。白色固体，65毫克，82．3％。1HNMR(600MHz，CDCl3)(；8．91(d，J--2．4，1H)，8．18(d，J=1．2，1H)，8．12(d，J--8．4，1H)，7．84(d，J--8．4，IH)，7．72(Ill，1H)，7．57(1TI，1H)，7．12(m，1H)，6．67(dd，。卢15。0，10．8，1H，11一H)，6．06(dd，。，兰15．0，10．2，1H)，6．02(d，J=15．6，1H)，5．59(td，J=10．2，4．8，1H，13一H)，5．59(dd，J=15．0，10．2，1H)，5．35—5．30(m，3H)，．．140．． 博士学位论文中固医学科学院＆北京协和医学院5．20(dd，乒9．6，4．2，1H)，5．00(d，J=11．4，1H)，4．97—4．96(m，1H)，4．58(d，J--9．6，IH)，4．49(m，2H)，3．81(m，3H)，3．56(S，3H，21一H)，3．43(S，2H)，3．25—3．23(m，2H，4一H)，2．87(S，2H)，2．67(m，1H)，2．44(S，6H，7’，87-H)，2．26(d，J--6．6，2H)，2．15(d，乒7．2，1H)，2．11(m，2H)，2．01(S，3H，24一H)，1．89(S，3H)，1．67(m，1H)，1．41(m，1H)，1．33(m，1H)，1．25—1．23(m，6H)，1．15(S，3H)，1．09(d，J--6．0，3H)，0．95(d，户4．8，6H)，0．89(d，J--6．6，3H)，0．87(m，1H，7-H)．DCNMR(100MHz，CDCl3)每172．0，170．1，170．1，166．2，150．9，150．2，147．9，138．2，135．9，133．5，131．8，129．7，129．3，129．0，127．9，127．7，126．9，122．0，102．4，86．4，84．8，77．2，76．1，75．2，70．6，70．2，69．5，69．1，69．0，69，0，63．4，62．4，53．3，44．5，43．4，43．3，40．9，37．0，35．1，31．4，31．1，29．7，29．5，27．4，25．6，22．4，21．4，20．5，20．3，17．8，17．0，15．0．HR·MS(ESI)[M+H]Tm／z1052．5679，calcdforC56H82N3016+1052．5690．化合物124将0．69克交沙霉素(6．03mm01)溶解在65毫升0．35N的盐酸中，室温搅拌过夜。次日，用氢氧化钠溶液调节pH值到4，分三次用50毫升的二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥，过滤，旋干，得到1．41克油状物124，收率94．5％。1HNMR(600MHz，CDCl3+D20)65．17(d，J=3．6，1H)，5．14(dd，J--9．6，1．8，0．47H)，4．65(d，J--9．6，1H)，4．62(d，J--9．6，O．41H)，4．17(m，1H)，3．90(m，0．40H)，2．28—2．25(m，2H)，2．14—2．03(m，3H)，1．84(dd，J--14．4，3．6，1H)，1．59(dd，乒13．2，9．6，0．47H)，1．16—1．14(m，9H)，0．98—0．97(m，9H)．．141． 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院AcBnBZCDIdDCMacetylbenzylbenzoyl论文缩略语乙酰基苄基苯甲酰基1,17一carbonyldiimidazole1,1’-羰基二咪唑doubledichloromethaneDEADdiethylazodicarboxylateDIBALdiisobutylaluminiumhydrideDMAPN忒一dimethylaminopyridineDMFdimethylformamideDMSOdimethylsulfoxideeq．EDCIEtESIghEquivalent双重的二氯甲烷偶氮二乙酸二乙酯二异丁基氢化铝Ⅳ*二甲基砒啶Ⅳ，Ⅳ-二甲基甲酰胺二甲基亚砜当量(3-dimethylaminopropyl)ethyl—carbodi1-(3一二甲氨基丙基)一3一乙基碳imidmonohydrochloride二亚胺盐酸盐ethylelectrosprayinoizationgramhourHOAcaceticacid乙基电喷雾电离克小时乙酸HOBT1一HYDROXYLBENZOTRIAZOLEl一羟基苯并三：唑Hzmn“ZMeU1mgMIChertzmultiplemasstochargeratiomethylmicrolitermilligram赫兹多重的荷质比甲基微升毫克minimuminhibitoryconcentration最小抑菌浓度一142— 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院mlmmolMSNISNMRNOEPhppmpyqrefrttmillilitermillimolemassspectrometryN-iodosuccinimide毫升毫摩尔质谱碘．代琥珀酰亚胺nuclearmagneticresonance核磁共振nuclearoverhausereffectOverhauser效应phenylpartpermillionpyridinequarterreferenceroomtemperaturetriple苯基百万分之一吡啶四重的文献室温三重的TBAFTetrabutylammoniumfluoride四丁基氟化铵TBTU2-(1H—Benzotriazole-1一y1)一1，1，3，3-tetr0一(1H-苯并三唑一1一amethyluroniumtetrafluoroborate基)“ⅣⅣ：Ⅳ．四甲基异脲四氟TEAtriethylarnine化硼三乙胺TESOTftriethylsilyltrifluoromethanesulfonate三乙基硅三氟甲磺酸甲酯THFTLCtetrahydrofuran四氢呋喃thinlayerchromatography薄层层析．143— 博士学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院Josaymcin关键化合物图谱∽-13CNMR离留富＼＼，一一j～⋯一■～一一；。=一、ii了i=2；t4工；名：：i”．。争‘：《恋蠹j二。_=j哥釜i萎》P噜q4-f-b}tl⋯⋯。，，)’▲lll{‘M|▲ll⋯"t⋯‘p*o-们甘∞笪o∞蚰叠喜，t"卜，o∞H坤Pr卜a协r事岍f∞n卜畸n吲一∞尊呻卜d一‘一qd11qq卑卜qq雹鼍鼍9电t哩"吧t吧唑电l电"吧卜吨吖t1刊吧卜nnNob’卜卜卜卜∞■n—r甘粤∞∞nN竹“rro啦n口∞m叫N“ro∞T_rf_r毋田卜卜卜卜卜卜h卜卜单∞∞∞∞∞qr．t叶叶’一n竹N“一04一NNf＼／／。《寒掣譬妾釜釜莲龄渺石多／＼≮髟≠≠；笨芬刍蚕莓基。4。0，’、．敷一。、一一。、厂、(|；【川iitIil㈧¨㈨|i一一———————————、——Tr一7—r——1——+T———r——T———’——”r——T一—_——1———T———，——1—”—7——”—一一ZOOt90t8017016015014013012011010090BO7aBO50403020100ppm一144一舔一¨iiii?{RMN‰，I_iIH啦虫岫n■＼ 博士学位论文中国医学科学院&北京泌和医学院化合物l1HNMR；i器；liiil!§ll；l孽ilii；ilili；Ⅵ一1W，、‘如1＼E—“‘掣莘。≯，、Ny!慧§i蕊i鬻ii!!!!!璧i!i§i臻N、H卉掣和叫出々掣响和_●-_·～：’S善善富裹善霉薯葛襄。墓i{：2卷￡&l蔓囊善爨!魏nja疆)‘3CNMRI＼／il；；lll；§癸l；嚣；l；§；{{2；22§§l》ii；；；rf由∞卜卜hhhh卜卜l卜∞--蕾-●叶叶■’_nnHHH一“一HHH＼。连基塞寒窀遥釜盐未§／／∥7、≮划／／∥么幺备；29一——㈨．IIIIIil㈦J-fi㈣r200190180一——广———r——1竹—T1"—叶h_几—丌1——竹下———厂——1———T———下—叫—r———一"——一T———T———●——1———下～1701601SO140130120110100908070605040302010ppm．145．叶t缸∞1．／叶∞oo‘．／／：．o#1．}n9．口卜1．o、．由∞“卜■、 化合物21HNMR13CNMR博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院1＼／r———1———1————r。—一．1口口-·]—一一27●●5l4sl93，aj．●6堇未曲未未圭蠢毒鬻妄品三兰圭善莓鬲晒i譬i蹦u,-7琏--鞘≯=嚣之盅矗卜t13嚣器是盅盅霉瘩蛊g；；雩=；磊宣器器描再鬲瓦是＼七避曼警忒＼、侈矽夕u忒＼＼＼／／，；彦∥。一146—302010ppmh_日o●，f¨4口I，^_-o』，0_‘_，●Jo十q；ooJ■～rIJ口4-Dt．．．一”iiiii．i“‘．taJ-．_．州删岫鼍田∞I．／口-．o∞■夕N—o卜■、～嶂簪．口卜■＼m_l簸毪；刖川．』．川卜㈦川⋯j一 博士学位论文中国医学科学院&北京协和医学院化合物31HNMR箍：芸鸯：蕊磊霉落i《腻i囊鎏运ii霉ii{莲#君耄；雩暮!i=囊i耋童lil爹Ⅵ帮N、翊i缮矽1i驴i誊；霉霉零荨嚣幂害蒜誉等=嚣=磊露霸暮“B“饽937≈‰543。吨13CNMRli杀《R《V§嚣《j=，、、i；誊≤三￡ll蓊{≮f筒§l§耄l!i善璺舞妻i0；；≈；ij==≤=：、∥}＼1}kpi≠I!!!㈣i}．1㈩|l⋯——。一j．⋯⋯。l，一、j—ii～{．一{⋯一一i．，i}L』L⋯．一"f{$却．147． 博十学位论文中国医学科学院＆北京协和医学院化合物41HNMRii!笔il!i!!麓l§l篓ii!黧li§iu‘“岫崎肖群屯∥卢1—如“。V。‘V!§§!llii!i!§麓!i!!i!ii!il，，节’Ⅵ吐牵蚱矸。、、{*q净-H。。i心触上量舅川』i岁蝴喜‘善’j。{；∥{‘霉≮：誉芗‘芍塞爨墓磊；墓麓尹。4一一一d一。§一～*一々B⋯⋯n‰；13CNMR歪i嚣￡、，摹i叠i碧{￡gN—i萋{兰§翥i荽嚣警i≈≥季荽兰l；二妻善蓐薹ii鲻f谬ii埒诊{帮?⋯i～．．j⋯一．⋯．jj。⋯_}；⋯}-童|{If—ij—i一卦⋯⋯j～．．j⋯一．⋯．jj。⋯0}j⋯，ji“慵’．148． 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