gb16550-1996 新城疫检疫技术规范

'中华人民共和国国家标准GB16550一1996新城疫检疫技术规范Technicalcodeofquarantinefornewcastledisease主题内容与适用范围本标准规定了新城疫群体检疫、个体检疫、实验室检验和检疫后处理的技术规范。本标准适用于鸡和其他可感染新城疫的禽类。引用标准GB16548-1996畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程3群体检疫对养禽场、独立饲养的禽群及外售、外运的禽群施行检疫。3.1查明疫病背景通过询问兽医人员或检查疫病记录，核查被检禽场(群、室)在过去一年内是否出现过新城疫临诊病例，是否有与新城疫病例接触史，周围2km范围内是否发生过新城疫。3.2查清免疫状况通过查验免疫证明或查询其他资料，核查被检禽群是否已按规定注射合格疫苗。如按规定免疫并正处于规定的保护期内，禽只健康状况良好，被认为免疫合格。如免疫不符合规定要求，要以合格疫苗再次接种，隔离饲养观察至群体抗体滴度达2"以上，全群健康，认为免疫合格;观察期内发现疑似新城疫病禽，须按3.3条和3.4条要求进一步检查。3.3群体临诊检查首先作静态检查，让禽群处于静止状态，观察营养状况、精神状态、呼吸、粪便、鼻及口腔分泌物有否异常。然后观察禽只运动状况，有否踱行、共济失调、痉挛等异常现象。检查中重点注意以下情况:a精神沉郁或无任何症状而死亡;b.体温升高、食欲减退、精神萎顿、产蛋减少或停止;c.口腔和鼻腔分泌物增多，嗦囊胀满;d.呼吸困难、喉部发出“咯咯”声(晚间较明显);e.下痢，粪便成绿色;f.偏头转颈，作转圈运动或共济失调。若发现疑似病例，按3.4条要求进一步检查，同时对全群隔离饲养。I4病理解剖检查对临诊疑似病例，应全部或抽样解剖，依据下述病变作出初步判断:a.口腔、咽喉部有粘液，咽部粘膜出血;b.腺胃乳头肿胀，挤压后有豆腐渣样坏死物流出，乳头有散在的出血点;生NL鱼重五星有条纹状或点状出血，有时见不规则溃疡，腺胃与肌胃交接处有出血斑、条;国家技术监督局1996一10一03批准1997一02一01实施.www.bzxzk.com. GB16550一1996d.小肠前段有大面积散在出血点，或肠粘膜有纤维性坏死并形成假膜，假膜下出现红色粗糙溃疡;盲肠和直肠皱褶处有出血，盲肠扁桃体(淋巴滤泡)出血坏死;气管粘膜充血、出血、气管内有粘液;心冠脂肪、心耳外膜及心尖脂肪上有针尖状小出血点。4个体检变4.1在无群体检疫条件的场合，须进行个体检疫。个体检疫合格的禽只一般供食用，如继续饲养应隔离三周，经观察无异常后，方准与其他禽只混养。4.1.1查明是否来自疫区。4.1.2查验免疫证明。4.1.3临诊检查和病理解剖检查检查内容参照3.3条和3.4条进行，发现疑似新城疫染疫禽只，立即作无害化处理。5实验室检验5门下列情况进行实验室检验a.产地定期检疫;b.监测免疫状态;c.疑似病鸡的定性，或临诊及解剖检查初步诊断为新城疫，需进一步确诊;d.检疫中发现重大疫情(如禽流感)，须作鉴别诊断;e.行政主管部门、饲养单位、售购或争议双方要求进行实验室诊断。5.2实验室检验方法a.病毒分离鉴定试验，见附录A(补充件)。阮血凝抑制试验，用于免疫监测，见附录B(补充件)。检疫后的处理经临床检查、解剖检查和实验室诊断等综合判定，确诊为新城疫的禽群或禽只，按GB16548处6A.一6.2经初步诊断为新城疫可疑的禽群(禽只)，按下述方法之一处理:a.除将可疑禽只按6.1条处理外，全群隔离饲养，并进行紧急免疫接种，如在接种后观察期内出现可疑禽只，亦按6.1条处理。观察21d后，对临床健康，免疫滴度达到25以上的禽只，经体表消毒后按健康禽只对待。b.’经初步诊断为新城疫可疑的禽群(禽只)，在全群隔离饲养的同时，对可疑禽只采样作实验室诊断，如确为新城疫者，全群即按6.1条处理。6.3发生过新城疫的禽场在半年之内，其禽只不准出售、外运。.www.bzxzk.com. GB16550一1996附录A病毒分离鉴定试验(补充件)A1仪器设备a.注射器:1mL;h注射针头:5-5合号;仁血凝试验板:V型、96孔;d.微量移液器:50pL;已恒温箱，f.超净工作台或无菌室。A2试荆氏无菌生理盐水;b.青霉素;已链霉素;已标准阳性血清。A3样品采集及处理A3.1活禽用气管拭子和泄殖腔拭子(或粪)。A3.2死禽以脑为主;也可采心、肝、脾、肺、肾、气囊等组织。A3.3样品用生理盐水研成1:5乳液;拭子浸入2^-3mL生理盐水中，反复吸挤压至无水滴出，弃之。溶液中加入青排素(使终浓度为1000单位/mL),链霉素(使终浓度为1mg/mL)。泄殖腔拭子(或粪)样品，青霉素、链霉素量提高5倍。然后调pH7.。一7.4,37℃作用1h，再1000r/min离心10min，取上清0.1mL经尿囊腔接种9^-10日龄SPF鸡胚。A4培养物的收集及检测A4.1培养4--7d的尿囊液经无菌采集后一20℃保存。A4.2尿囊液按附录B(补充件)作血凝试验，并与标准阳性血清作血凝抑制试验，确定有无新城疫病毒繁殖。A4.3MDT(最小病毒致死量引起鸡胚死亡的平均时间)的测定:将新鲜尿囊液用生理盐水连续10倍稀释,10-6-10-。的每个稀释度接种5个9^10日龄SPF鸡胚，每胚0.1m1.,37C孵化。余下的病毒保存于4C.8h后以同样方法接种第二批鸡胚，连续7d内观察鸡胚死亡时间并记录，测定出最小致死量，即引起被接种鸡胚死亡的最大稀释倍数。计算MDT,A4.4以MDT确定病毒的致病力强弱,40^-70h死亡为强毒,140h以上为弱毒。.www.bzxzk.com. GB16550一1996附录B鸡新城疫徽t红细胞凝集抑制试验(补充件)B1仪器设备a.微量血凝板:v型,96孔;b.微型振荡器;c.塑料采血管;d，移液器:50ML.B2试剂B2.1稀释液pH7.0-7.2磷酸缓冲盐水氯化钠(GB1266-77)170g磷酸二氢钾(GB1274-77)13.6g氢氧化钠(GB629-77)3.0g蒸馏水1000m1高压灭菌，4C保存，使用时作20倍稀释B2.2浓缩抗原B2.3。，5%红细胞悬液采成年鸡血，用20倍量磷酸缓冲盐水洗涤3-4次，每次以2000r/min离心3^-4min，最后一次5min，用磷酸缓冲盐水配成0.50o悬液。B2.4标准阳性血清B3被检血清每群鸡随机采血20^-30份血样，分离血清。采血法:先用三棱针刺破翅下静脉，随即用塑料管引流血液至6^-8cm长。将管一端烧融封口，待凝固析出血清后以1000r/min离心5min,剪断塑料管，将血清倒入一块塑料板小孔中。若需较长时间保存，可在离心后将凝血块一端剪去，滴融化石蜡封口，于。℃保存。B4操作方法B4.1微量血凝试验B4.1.1于微量血凝板(Bl.1)的每孔中滴加稀释液(B2.1)50kL，共滴四排。B4.1.2吸取1:5稀释抗原滴加于第一列孔，每孔50,}L，然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔各吸取50pL弃之。最后一列不加抗原作对照。B4.1.3于每孔中加人0.5%红细胞悬液(B2.3)50pL.B4门.4置微型振荡器(Bl.2)上振荡1min，或手持血凝板绕圆圈混匀。B4门，5放室温下(18-20"C)30-40min，根据血凝图象判定结果。以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度。每次四排重复，以几何均值表示结果B4.1.6计算出含4个血凝单位的抗原浓度。按式(BL)进行计算:.www.bzxzk.com. GB16550一1996血凝滴度抗原应稀释倍数=................·..·.⋯⋯(BI)4B4.2微量血凝抑制试验B4.2.1先取稀释液(132.1)50pL，加人微量血凝板(Bl.1)的第1孔，再取浓度为4个血凝单位的抗原依次加入3^-12孔，每孔50风，第2孔加浓度为8个血凝单位的抗原50pL,B4.2.2吸被检血清(133)50pL于第1孔(血清对照)中，挤压混匀后吸50pL于第2孔，依次倍比稀释至第12孔，最后弃去50pLoB4.2.3置室温(18^200C)下作用20min,B42.4滴加5011.0.5%红细胞悬液(B2.3)于各孔中，振荡混合后，室温下静置30-40min，判定结果B425每次测定应设已知滴度的标准阳性血清(132.4)对照。BS结果判定B5.1在对照出现正确结果的情况下，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制滴度。B5.2若有10%以上的鸡出现11(log,)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染B5.3若监测鸡群的免疫水平，则血凝抑制滴度在40092)的鸡群保护率为50%左右;在4(log,)以上的保护率达9000^"10000;在4(log,)以下的非免疫鸡群保护率约为9%，免疫过的鸡群约为43%。鸡群的血凝抑制滴度以抽检样品的血凝抑制滴度的几何平均值表示，如平均水平在40092)以上，表示该鸡群为免疫鸡群。附加说明:本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准由农业部动物检疫所负责起草。本标准主要起草人马洪超、杨承谕、郑志刚、仰惠芬、王泽霖。.www.bzxzk.com.'