梅毒检测技术规范介绍

'梅毒实验室检测技术规范简介中国疾病预防控制中心性病控制中心性病参比实验室2011年9月27日江苏南京 1、梅毒血清学试验包括梅毒螺旋体抗原血清学试验（如TPPA）和检测方法两大类。2、试验可用于梅毒治疗疗效判断。小测试 小测试3、有关梅毒血清学试验，下列哪些说法是错误的？一旦感染梅毒，TPPA常终身阳性二期梅毒时，两类梅毒血清学试验敏感性均可达100％TPPA可用于疗效判断RPR只能用于梅毒初筛ELISA法不能用于初筛3 4、开展RPR/TRUST试验时应采用下面哪种仪器或方法进行抗原抗体凝集反应：水平旋转仪振荡器手工水平摇动混悬器小测试 小测试5、分述下面几种梅毒血清学检测结果的临床意义TPPA（+），RPR/TRUST（—）TPPA（—），RPR/TRUST（+）TPPA（+），RPR/TRUST（+）TPPA（—），RPR/TRUST（—）5 背景简介 梅毒的诊断梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。 近年来我国严峻的梅毒流行形势卫生部出台梅毒10年控制规划全国梅毒检测技术规范（上报稿）梅毒实验室检测不规范现状梅毒血清学检测新方法、新技术的应用性评估 （一期和二期梅毒更加真实反映梅毒疫情趋势）全国梅毒流行状况 主要措施：广泛开展宣传教育，普及梅毒防治知识开展综合防治，阻断梅毒传播提高监测检测质量，开展主动检测，促进梅毒早期发现提供规范化梅毒医疗服务预防和控制先天梅毒加强国际合作和应用性研究围绕《规划》防控策略，提出相应的工作设想10《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）》 全国梅毒检测技术规范11第一章梅毒检测样品的采集和处理第二章梅毒血清学检测第三章梅毒病原体显微镜检测第四章梅毒病原体核酸检测第五章实验室生物安全第六章梅毒检测实验室质量管理 第二章梅毒血清学检测检测目的:临床诊断、血液筛查、流行病学监测以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学感染率和发病率。 梅毒血清学检测分类(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）两类方法。问题1：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？ 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗体主要是IgM和IgG混合抗体。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。问题2：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法 非梅毒螺旋体抗原血清学原理所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图 RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。一期梅毒1年后转为阴性二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清反应假阳性。①技术性假阳性反应由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。②生物学假阳性反应是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点梅毒假阳性反应的处理技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。对生物学假阳性反应，应通过梅毒螺旋体抗原血清学试验（如TPPA等）试验进行排除。 梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问题3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？ 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPA/TPHATPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。 +SheepredcellT.pallidum+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA(TPHA)试验原理示意图 FTA-ABS试验FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 FTA-ABS试验示意图及结果 TP—ELISA试验原理TP—ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。本法可用于大规模血清检测。 梅毒免疫层析快速检测方法 梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。 梅毒血清学试验结果的临床意义总汇RPRTPPATRUSTTP-ELISA临床意义VDRLTP-RT__排除梅毒（一期梅毒的早期）++现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外)+-生物学假阳性-+早期梅毒经治疗后（早早期梅毒） 先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断查到螺旋体其抗心磷脂抗体滴度持续上升其抗心磷脂抗体滴度高于其母亲四倍检测抗梅毒的IgM特异性抗体阳性随访18个月观察抗体的变化 梅毒实验室检测策略思考（1）34非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验排除试验假阳性确证梅毒螺旋体现症感染排除治愈的既往感染者确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验TPPA：确证试验梅毒筛查-复检流程的意义？ 梅毒实验室检测策略思考（2）方法选择依据敏感性、特异性（试剂评估）操作流程（可及性）试剂的价格、结果时间（可接收性）35？初筛目的和方法选择 梅毒实验室检测策略选择根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。策略一采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛策略二采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛 以临床诊断为目的的检测策略一非梅毒螺旋体抗原血清学试验（以RPR为例）阴性报告RPR阴性阳性梅毒螺旋体抗原血清学试验（以TPPA为例）阴性报告RPR阳性TPPA阴性阳性报告RPR阳性TPPA阳性RPR定量试验报告RPR滴度 以临床诊断为目的的检测策略二梅毒螺旋体抗原血清学试验（以ELISA为例）阴性报告ELISA阴性阳性报告ELISA阳性非梅毒螺旋体抗原血清定性/定量试验（以RPR为例）阴性报告ELISA阳性RPR阴性阳性报告ELISA阳性RPR滴度 策略一和策略二比较39策略一：非梅毒螺旋体抗原血清试验策略二：梅毒螺旋体抗原血清试验简便、经济简便、快速、大样本、经济早期发现 第三章梅毒体病原学检测检测方法暗视野显微镜检查镀银染色检查 病原学检查的临床意义病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性， 第四章梅毒核酸检测可对皮损部位组织液、淋巴穿刺液及脑脊液等标本的梅毒螺旋体核酸检测在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断，以及螺旋体现症感染和既往感染鉴别诊断中具有一定的价值目前主要应用于梅毒螺旋体的耐药性监测、菌株流行病学分型。 第五章实验室生物安全梅毒的生物危害梅毒螺旋体属第三类病原微生物，一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，是有有效治疗和预防方法的致病微生物梅毒相关检测的生物安全级别为了保证安全，对临床和现场未知样本的梅毒血清学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。如有艾滋病检测实验室，可以在艾滋病抗体检测实验室中进行。 第五章实验室生物安全梅毒的生物危害梅毒螺旋体属第三类病原微生物，一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，是有有效治疗和预防方法的致病微生物梅毒相关检测的生物安全级别为了保证安全，对临床和现场未知样本的梅毒血清学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。如有艾滋病检测实验室，可以在艾滋病抗体检测实验室中进行。 第六章实验室质量管理质量保证质量评估试剂评价 质量保证检测方法和试剂的选择用于临床诊断的检测方法应使用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂，应选择敏感性高、特异性好的试剂。性病参比实验室和省级性病中心实验室应定期组织开展梅毒诊断试剂的临床质量评价和新方法与技术的评估。 质量评价所有梅毒检测实验室应参加外部质量评价省级中心实验室应参加国家级职能工作考核和PT其他实验室应参加省级职能工作考核和PT。 质量评价考评组织单位根据PT考核结果、职能工作评价结果及对部分实验室现场评价情况，汇总各实验室的最终考评结果，上报相关机构。考评单位应将考评得分及扣分原因反馈各参评实验室，以适当的方式在适当范围内公开发布考评结果。为合格者颁发合格证书。 诊断试剂临床质量评估评估目的由试剂使用单位对梅毒诊断试剂进行临床质量评估是对国家药品监督管理部门审评试剂生产和批批检制度的一项重要补充。通过对国内市场销售的国产和进口梅毒诊断试剂的敏感性、特异性、批间差异和适用性进行综合质量评估，及时发现和解决试剂质量问题，为国家和地方卫生行政部门提供决策依据，并作为梅毒实验室选择试剂的依据。未参加评估的试剂一般不推荐使用。 2010年梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果方法试剂简称特异性(%)敏感性（%）ELISA厦门英科100.098.2珠海丽珠100.096.5北京万泰100.096.5潍坊三维100.096.5北京科卫100.095.6北京华大99.599.1上海科华99.598.5北京金豪99.197.4化学发光北京科美100.097.3快速试剂厦门英科99.493.9杭州艾康94.796.5北京万泰94.793.9北京蓝十字93.481.6 2010年非梅毒梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果试剂简称敏感性(%)特异性(%)北京万泰TRUST97.888.0上海荣盛TRUST96.797.7上海科华RPR96.790.3郑州安图TRUST92.497.2北京金豪TRUST92.492.6英科新创TRUST91.398.6北京科卫RPR89.187.0表3非梅毒螺旋体抗原血清学试验用试剂评估结果 1、梅毒血清学试验包括梅毒螺旋体抗原血清学试验（如TPPA）和非梅毒螺旋体抗原血清学试验（如RPR/TRUST）检测方法两大类。2、非梅毒螺旋体抗原血清学试验（如RPR/TRUST）试验可用于梅毒治疗疗效判断。小测试 小测试3、有关梅毒血清学试验，下列哪些说法是错误的？（3）、（4）、（5）一旦感染梅毒，TPPA常终身阳性二期梅毒时，两类梅毒血清学试验敏感性均可达100％TPPA可用于疗效判断RPR只能用于梅毒初筛ELISA法不能用于初筛54 4、开展RPR/TRUST试验时应采用下面哪种仪器或方法进行抗原抗体凝集反应（1）水平旋转仪振荡器手工水平摇动混悬器小测试 小测试5、分述下面几种梅毒血清学检测结果的临床意义TPPA（+），RPR/TRUST（—）生物学假阳性TPPA（—），RPR/TRUST（+）早期梅毒经治疗后（早早期梅毒）TPPA（+），RPR/TRUST（+）现症梅毒,(梅毒孕妇所生的婴儿除外)TPPA（—），RPR/TRUST（—）排除梅毒,（一期梅毒的早期）56 57谢谢'