地红霉素肠溶颗粒在健康人体的生物利用度及药动学论文

　　地红霉素肠溶颗粒在健康人体的生物利用度及药动学论文张志华，周彦彬，丁劲松，田娟【摘要】目的：建立正常人血浆中红霉胺HPLC-MS测定法，研究地红霉素两种肠溶制剂的人体生物利用度和药动学。方法：以克拉霉素为内标，血浆样品碱化后用乙酸乙酯萃取，经ThermoHypersil-HypurityC18柱（150mm×2.1mm，5μm）分离.freelax分别为（2.6±0.7）h、（2.6±0.8）h；Cmax分别为（339.4±118.1）μg/L和（360.8±139.5）μg/L；AUC0→144分别为（3225.0±986.5）μg·h/L和（3188.2±1057.9）μg·h/L；T1/2分别为（44.7±3.5）h和（42.6±5.9）h。与参比制剂相比，试验制剂的相对生物利用度为（103.1±17.5）%。药动学参数经多因数方差分析显示周期间与制剂间差异均无统计学意义（P0.05），双单侧t检验表明接受T与R生物等效的假设，经计算90%置信区间均在规定值内。结论：T与R为生物等效制剂。【关键词】地红霉素；红霉胺；高效液相色谱-质谱法；相对生物利用度［Abstract］Objective:ToestablishanHPLC-MSmethodfordeterminationoferythromycylamineinhumanplasmaandtostudythepharmacokiicsandtherelativebioavailabilityoftycinpreparations.Methods:Sdetector.Inatestoftcrossoverstudy,anoraldoseof0.5gdirithromycinenteric-granule(T)anditsreference(R)inistratedtotacokiicsandrelativebioavailabilityycylaminefromplasmaainpharmacokiicsofTandRaxaxongTandR(P0.05).The90%confidenceintervalycin;Erythromycylamine;HPLC-MS;Relativebioavailability地红霉素（Dirithromycin）为大环内酯类抗生素，是红霉胺的前体药物，口服给药后很快转变成红霉胺而起作用，其抗菌谱和抗菌活性与红霉素相似。地红霉素在软组织中的药学特性较红霉素有所改善，消除半衰期长，且与其他由细胞色素P450系统代谢的药物相互作用少［1］。因此，常以测定红霉胺的血药浓度来研究地红霉素体内的药动学特征。本实验建立了HPLC-MS法测定红霉胺的血药浓度，采用二周期随机交叉试验设计，比较了地红霉素肠溶颗粒与肠溶片在18名健康受试者体内的药动学及相对生物利用度，旨在评价试验制剂与参比制剂的生物等效性，为临床合理用药提供依据。1材料与方法1.1仪器 LC-MS2010液相色谱-质谱联用仪，LC-10ADVP低压四元梯度泵，CTO-10AVP柱温箱，SCL-10ADVP系统控制器，LC-MSsolution工作站（日本岛津）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；TG16-S方法测定。1.4血样测定1.4.1标准溶液配制红霉胺溶液：精确称取红霉胺18.4mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度（184μg/mL）。置于4℃冰箱中保存，使用时用流动相稀释至所需浓度。内标溶液：称取克拉霉素12.5mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，应用时进一步稀释为12.5μg/mL，置于4℃冰箱中保存备用。1.4.2色谱条件及质谱条件色谱柱：ThermoHypersil-HypurityC18（150mm×2.1mm，5μm）；柱温：45℃；流动相：10mmol/L醋酸铵（pH6.4）-甲醇-乙腈=50∶10∶30；流速：0.2mL/min。质谱条件：电喷雾电离源（ESI），选择性正离子监测（SIM），监测质荷比（M/Z）368（红霉胺，M+2H）和237（克拉霉素，M+H）带正电荷的分子离子峰，电离源电压4.5kV，喷雾气氮气（N2），流速1.5L/min，脱溶剂温度250℃，检测器电压1.5kV。1.4.3血浆样品预处理取待测血浆0.2mL于2mL离心管中，加入内标溶液（12.5μg/L）50μL，加饱和碳酸钠溶液0.1mL，混匀，加乙酸乙酯1mL，振荡2min，14000r/min离心5min，将有机相转移至另一管中，45℃真空干燥箱中抽干，残渣用流动相100μL溶解，取上清液5μL进样。1.5参数的计算与数据处理从药时曲线获得两种制剂的主要药动学参数，Cmax及Tmax采用实测值，AUC0→144以梯形面积法计算，以消除后相血药浓度对数值和时间回归计算消除速率常数K和半衰期T1/2。AUC0→∞=AUC0→t+Ct/K，以试验制剂AUC0→t和参比制剂AUC0→t的比值计算生物利用度（F）、AUC0→t和Cmax，经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析，再以双单侧t检验进行等效性判断。若受试制剂AUC0→t的90%可信限落在参比制剂80%～125%范围内，Cmax的90%可信限落在70%～143%范围内，则认定受试制剂与参比制剂生物等效。Tmax采用原值进行非参数检验。2结果2.1色谱行为红霉胺的保留时间约为5.4min，内标的保留时间约为3.2 min，基线平稳，血浆内源性物质及其它杂质不干扰样品的分离测定。红霉胺和克拉霉素标准液、空白血样、空白血样中加入标准品及受试者服药后3h血浆的总离子流图见图1。2.2线性关系用空白血浆将红霉胺标准贮备液稀释成浓度分别为3.1、9.2、18.4、36.8、73.6、147.2、368.0、736.0μg/L的系列浓度溶液，漩涡振荡2min，混匀，余照“血浆样品预处理”项下操作，记录红霉胺及内标的峰面积。以红霉胺和内标峰面积比（A/AIS）与红霉胺浓度（C）进行线性回归，得回归方程为：A/AIS＝0.0139C-0.0052，r2=0.9981，红霉胺浓度在3.1～736.0μg/L范围内与峰面积比线性关系良好，最小可定量浓度为3.1μg/L。2.3回收率及精密度配制含红霉胺浓度分别为3.1、73.6、736.0μg/L的血浆样品各5份，按“血浆样品预处理”项下操作，记录红霉胺和内标峰面积，按回归方程计算测得浓度，以测得值与加入值的比值计算回收率，并计算日内精密度，高、中、低浓度回收率为（99.1±4.0）%、（97.0±3.7）%、（98.7±9.9）%（n=5），日内RSD为4.0%～10.0%（n=5）。对上述样品连续测定3d，考察日间精密度，日间精密度为4.4%～11.2%（n=15）。2.4血样测定和药物动力学参数18例健康志愿者单剂量口服地红霉素试验制剂或参比制剂0.5g后，红霉胺的主要药动学参数见表1，平均血药浓度时间曲线见图2。表1健康受试者口服0.5g地红霉素后主要药动学参数（略）血浆红霉胺平均浓度-时间曲线(0～24h)2.5统计检验结果对地红霉素试验制剂与参比制剂的Cmax及AUC0→144经对数转换后进行方差分析，结果表明主要药物动力学参数没有显著差异（P0.05），双单侧t检验及90%可信限检验表明试验制剂Cmax及AUC0→144的均值落在规定范围内，结果见表2。Tmax原值经非参数检验，两种制剂间差异无统计学意义。表2健康受试者口服0.5g地红霉素后Cmax及AUC0→144双单侧t检验结果和90％置信区间（略）3讨论有关红霉胺血药浓度测定的方法国内外文献报道的通常采用微生物法［2-3］和HPLC-UV法［4］，也有采用HPLC-MS［5-6］法和HPLC-ECD［7-8］法的报道。与其他大环内酯类药物一样，红霉胺仅在短波长范围内有很弱的紫外吸收，用紫外法测定生物样品时灵敏度低。而 微生物法测定的是样品对敏感菌株的抑菌活性，可能受到血浆蛋白结合、活性代谢物等因素的影响，选择性差。采用ED可实现灵敏检测，但对流动相或样品进行加电压增敏处理时同时增加了基线噪音和干扰峰，影响测定结果。高效液相色谱-质谱联用技术具有色谱分离和质谱分离的双重功能，可以依靠质谱的分辨能力区分不同物质的色谱峰，抗干扰能力强［5-6］。本文新建立的HPLC-MS法，取样量小，样品处理快速简便，方法选择性好，干扰少，回收率高，最小可定量浓度为3.1μg/L，完全能够满足本试验低浓度药物测定以及药物动力学研究的要求。试验证实地红霉素肠溶颗粒与肠溶片在健康受试者体内的药动学特征，各药动学参数之间比较差异无统计学意义，说明试验制剂与参比制剂生物等效。【