桶装纯净水的微生物学测定及保质期探讨

医学微生物学实验设计题目：桶装纯净水的微生物学测定及保质期探讨班级：2008级预防医学本科一班姓名：朱琳4108029027朱晓敏5108041037陈赞5108041038崔朋伟5108041039付凯5108041040李岩5108041041 桶装纯净水的微生物学测定及保质期探讨作者及学号朱琳4108029027朱晓敏5108041037陈赞5108041038崔朋伟5108041039付凯5108041040李岩5108041041研究背景：随着人们物质生活的提高，桶装纯净水作为一种方便快捷的饮用水开始逐步走进千家万户，办公室、会议室等公共场所也随处摆放着桶装纯净水。由于桶装纯净水来源繁多，各种品牌鱼目混杂，并且已有不少人对其质量提出质疑。据中国消费者协会对72种品牌桶装纯净水抽样调查反映：有20个样本卫生指标未达到《瓶（桶）装饮用水标准》的要求，特别是有14个样本菌落数指标连基本的《生活饮用水卫生标准》都达不到，卫生状况远不如合格的自来水。这与饮用水厂家宣传的无菌相去甚远，若在炎热的夏季还会危及健康，卫生指标令人担忧。实验目的：饮用优质水是保证人类健康的基石，为了提高在校大学生对桶装纯净水的认识和了解，保证大学生的身体健康，防止因饮用被污染的纯净水而引发大肠杆菌性脑膜炎、痢疾、霍乱等肠道疾病，因而设计本实验针对泰山医学院内所销售的桶装纯净水进行微生物的测定，及饮用水保质期的探讨。实验原理： 水中致病微生物种类繁多，现在还不能用单一方法来分离和鉴定水中所有致病微生物，也没有可从饮用水中定量分离出数量很少病原体的有效方法，所以，通常以水中指示微生物代替致病微生物进行检测，从而估计污染状况。已提出的指示微生物包括大肠杆菌、细菌总数、产气荚膜梭菌等。其中，大肠杆菌一直被作为常规的水质细菌学标准，而细菌的总数是水体被细菌污染程度的判断标准，细菌总数越多，说明水体受污染的程度越重。实验材料：泰山医学院桶装饮用水样本、恒温培养箱、培养皿、烧瓶、试管（试管内含倒立管）、接种环、牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基（选择培养基）、乳糖蛋白胨培养基，3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基试验方法1细菌总数测定：①以无菌吸管分别加入1、2两个培养皿1ml水样，3号培养皿不加水样作对照试验，重复做一组实验。②牛肉膏蛋白胨培养基冷却45℃～50℃时立即倾注于1、2、3号培养皿中各15ml，速与水混匀加盖待凝。③将平板倒置于37℃恒温箱中培养24小时后计算菌落。1号2号3号一组二组平均2大肠杆菌的检测①初发酵试验：无菌操作条件下分别取水样100ml，依次加入2个盛有50ml3倍浓缩的无菌乳糖蛋白胨培养基的烧瓶中（瓶内置倒立管以指示细菌培养时有无产气）。然后取10支装有5ml无菌3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管，分别加入10ml水样（试管内均有倒立管）。然后将培养瓶和培养管置于37℃培养24小时。②指示培养基上分离培养：取出发酵后的烧瓶或试管，将上述培养后产酸产气或只产酸的培养物，分别接种于伊红美蓝培养基平板上，37℃ 培养24小时，挑选符合以下特征的菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检。〈1〉深紫黑色，有金属光泽〈2〉紫黑色，不带或略带金属光泽〈3〉淡紫红色，中心颜色较深③复发酵试验：上述菌落经革兰染色观察，若为阴性，无芽孢杆菌，取其相应的典型菌落1-3个接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养基（内放倒立管），37℃培养24小时后，有产酸、产气者证实有大肠杆菌群存在。依据有大肠杆菌群的阴性管或瓶数，报告每升水样的大肠杆菌群数。3桶装水保质期测定：检测项目放置不同时间后的细菌数0天7天14天30天60天细菌总数（cfu/ml）大肠菌群（mpn/100ml）运用1、2的方法来完成上述指标的统计。（标准：细菌总数（cfu/ml）≤50大肠菌群（mnp/100ml）≤3）预期结果：1对于细菌总数的检测：3号培养皿应该是没有菌落产生，而1、2号培养皿应该有一定量的菌落。2大肠杆菌群检测：对于初次发酵的2个烧瓶可能是产酸产气或是产酸不产气，而发酵管内可能产酸产气，也可能产酸不产气，也有可能既不产酸也不产气。3随着放置时间的不断增加，样品细菌总数应该是不断增加的，而大肠杆菌数可能不变，也有可能增加。 讨论分析：1由于水中细菌种类繁多，要求的营养和其它生长条件差别也很大，不可能在一种培养基和一种培养条件下是水中所有的细菌都能生长繁殖，因此以一定的培养基平板上生长出来的菌群，计算出来的水中细菌总数仅是一种的近似值。2多管发酵法是将适量水样接种于一系列有培养基的试管中进行培养，根据产生阳性反应的试管数来估计原始水样中菌的最大可能数（MPN）。此方法仅仅提供水样中含菌量的估计值，又受固有误差限制，在确定阳性结果之前还要做确证实验，费时费力。3由预期结果可知：大肠杆菌对保质期影响不大，只有细菌总数影响保质期。但由于处于夏季，气温较高，固保质期可能会有所降低。〔参考文献〕[1]沈萍,范秀荣,李广武.微生物学实验（第三版）〔M〕.北京高等教育出版社.2000:151-152.[2]中华人民共和国卫生部,解读《瓶（桶）装饮用水卫生标准》〔M〕.北京中国标准出版社,2003:17-19.[3]李宗义,刘国生,李学梅.微生物学实验技术〔M〕.北京:气象出版社.1997:160-161.[4]王子石,等.生活饮用水卫生标准〔J〕.微生物学杂志.2006,6（9）:112-114.[5]蒋永光,细菌总数总大肠菌群数检测中的几个技术问题〔J〕.微生物学杂志,2007,4（6）:107.