紫外分光光度法测定两面针中总生物碱的含量论文

　　紫外分光光度法测定两面针中总生物碱的含量论文.freel波长处进行含量测定。结果线性范围为3～8μg/mL,回归方程：Y＝97.746X－0.0255,r＝0.9991(n＝6)。氯化两面针碱的平均回收率为99.5%,RSD＝2.32%(n＝5)。结论方法简便、提取完全、重现性好、结果准确。【关键词】两面针生物碱含量测定紫外分光光度法Abstract：ObjectiveToestablishasimplemethodfordeterminationtheAlkaloidscontentsfromZanthoxylumnitidum.MethodsAdoptingnitidunechlorideasreference,alkaloidsinZanthoxylumnitidumetryat329nm.ResultsThelinerarrangeL,regressionequation：Y＝97.75X－0.0255,r＝0.9991(n＝6).ThemeanrecoveryofNitidunechlorideethodperformedisaccurateandsimple.Thereproducibilityandrateofextractionarealsodesirable.Keynitidum；Alkaloids；contentdetermination；ultravioletspectr-ophometry两面针Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.为芸香科花椒属植物,在我国主要分布于福建、广东、广西、云南等地,是民间常用的一种植物药。其根、根皮及茎皮入药,具有抗肿瘤、镇痛等作用。主治风湿性关节痛、牙病、胃痛、咽喉肿痛、毒蛇咬伤等症。两面针中主要含生物碱,.freelbda25型紫外/可见分光光度计珀金埃尔默仪器(上海)有限公司；KS-600D超声清洗器(宁波科生仪器厂)；AG285电子分析天平(德国梅特勒公司)。试剂：XDA-5大孔吸附树脂(西安蓝晓科技有限公司)；氯化两面针碱(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号848-9901)。所用试剂均为分析纯。药物：两面针药材饮片分别购自桂林、南宁、玉林各产地。2方法与结果2.1测定波长的选择取氯化两面针碱对照品,加95%乙醇溶解制成7μg/mL的溶液,置1cm吸收池中,以95%乙醇液为空白,在250～500nm波长范围内扫描。另取两面针药材提取液,照“2.3”项方法处理,稀释至一定浓度,置1cm吸收池中,在250～500nm波长范围内扫描,对照品及两面针提取液在329nm处均有最大吸收,并且在328～331 nm处峰型较平坦,有利于测定,故选择329nm作为测定波长。见图1。2.2线形关系考察分别精密移取氯化两面针碱标准溶液(0.1mg/mL)0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0mL,用乙醇定容至25mL容量瓶中。按“2.1”项方法操作,于329nm波长处测定吸收度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝97.75X－0.0255,r＝0.9991(n＝6)。结果表明,样品液在3～8μg/mL之间呈线性关系。2.3供试品的制备2.3.1提取方法精密称取两面针药材粉末0.1g(过100目筛),置锥形瓶中,加25mL60%乙醇,超声30min(工作频率25～40MHz),抽滤,重复1次,合并滤液,减压回收乙醇,加pH为3的酸水溶解,过滤,酸滤液再用等体积乙酸乙脂萃取2次,除去香豆素、木脂素等脂溶性杂质。2.3.2大孔吸附树脂纯化工艺2.3.2.1大孔树脂预处理精密称取XDA-5型大孔树脂2g,95%乙醇湿法装玻璃层析柱(1cm×50cm),继续用95%乙醇在柱上淋洗,不时检查流出的乙醇,至与水混合(1∶5)不呈白色浑浊为止。最后用蒸馏水洗去层析柱中的乙醇,备用。2.3.2.2吸附洗脱分离工艺将提取液上柱,流速控制20mL/h。泄漏液无生物碱阳性反应,说明总生物碱已全部吸附。将已吸附好样品的XDA-5树脂先用50mL水洗脱除去无机盐、蛋白质、多糖等杂质,再用50mL95%乙醇洗脱,流速控制20mL/h,接取95%乙醇的洗脱液,最终定容至50mL,即得供试品溶液。2.4精密度考察在同一样品液中分别精密移取5份,于329nm波长处测定吸收度,计算含量。分别为6.24%、6.12%、6.23%、5.98%、6.00%,RSD＝2.01%(n＝5)。2.5重复性考察精密称取两面针药材细粉,按“2.3”项方法提取,于329nm处测定吸收度,计算含量。结果分别为6.25%、6.22%、6.23%、6.24%、6.26%,RSD＝2.20%(n＝5)。结果表明重复性较好。2.6稳定性试验取供试品溶液,在0、1、2、4、8、12、18、24h分别测定吸收度,结果显示在24h内基本稳定,RSD＝2.14%(n＝8)。 2.7加样回收率试验分别精密称取5份已知含量的两面针药材细粉0.05g,每份精密加入相当于氯化两面针碱3.0mg的对照品溶液,按“2.3”项方法提取,于329nm处测定吸收度,计算。回收率分别为101%、99.5%、102%、96%、98.8%,平均为99.5%,RSD＝2.32%(n＝5)。2.8样品测定按照以上方法测定3种不同产地两面针药材中总生物碱的含量,每种产地的药材分别平行测定5批。结果见表1。表1不同产地两面针药材细粉中总生物碱的含量测定结果(略)3讨论总生物碱的含量测定一般都采用酸性染料比色法2-4或根据单体碱的母核相同直接测定5,本试验曾试过用溴甲酚绿和溴麝香草酚蓝显色,用比色法在422nm处测定吸收度,但结果极其不稳定,因此,酸性染料比色法不适用于测定两面针中总生物碱的含量。两面针中主要含生物碱,且主要为苯并菲啶类生物碱1。已报道的7个单体碱在(329±2)nm波长处均有共同吸收1。并且样品液用“2.3”项的方法处理后,可有效的排除其它成分的干扰,与测定结果一致。在大孔树脂纯化总生物碱的工艺中,曾采用XDA-5、HPD-100和LSD-5B等8种大孔树脂对两面针中总生物碱进行吸附和解吸附考察,其中XDA-5的动态吸附分离效果最好,适合于两面针中总生物碱的提纯。由于3种不同产地两面针药材中总生物碱的含量相差较大,经仔细观察,从桂林购买的取药部位是根,而购于南宁、玉林两地的取药部位是茎。因此,药材部位不同总生物碱的含量相差较大,根部比茎部的总生物碱含量明显偏高。故《中华人民共和国药典》中测两面针中生物碱含量取药部位是根是有道理的6。采用酸水冷浸、60%乙醇回流提取、60%乙醇超声提取3种方法测得的同一批次的两面针药材粉末的含量平均值分别是2.65%、1.65%、6.01%；因此,超声提取方法优于其它两种,并且延长超声时间含量不再增加,表明提取完全。【