国家标准-》小麦抗条锈病评价技术规范

'ICS65．020．01B15NY中华人民共禾il国农业行业标准NY／T1443．1—-2007小麦抗病虫性评价技术规范第1部分：小麦抗条锈病评价技术规范RulesforResistanceEvaluationofWheattoDiseasesandInsectPestsPartl：RuleforResistanceEvaluationofWheattoYellowRust(PucciniastriiformisWest．f．sp．triticiEriks．etHenn．12007-09—14发布2007-12—01实施中华人民共和国农业部发布 NY／T1443卜一2007前言NY／T1443--2007(／b麦抗病虫性评价技术规范》为系列标准。——第1部分：小麦抗条锈病评价技术规范；——第2部分：小麦抗叶锈病评价技术规范；——第3部分：小麦抗秆锈病评价技术规范；——第4部分：小麦抗赤霉病评价技术规范；——第5部分：小麦抗纹枯病评价技术规范；——第6部分：小麦抗黄矮病评价技术规范；——第7部分：小麦抗蚜虫评价技术规范；——第8部分孙麦抗吸浆虫评价技术规范。本部分为NY／T1443的第1部分。本部分的附录A为资料性附录，附录B为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出并归71。本部分起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。本部分主要起草人：陈万权、刘太国、陈巨莲、徐世昌。1 NY／T1443．1—2007小麦抗病虫性评价技术规范第1部分：小麦抗条锈病评价技术规范1范围本标准规定了小麦抗条锈病鉴定技术和抗性评价方法。本标准适用于普通小麦(包括选育品种／系、地方品种、特殊遗传材料、近等基因系、重组自交系、DH群体)、杂交小麦、转基因小麦、其他栽培小麦种、野生小麦、小麦野生近缘种对小麦条锈病抗性的田间鉴定和评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2．1抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2．2慢锈性slowrusting在适于病害发生的环境条件下，寄主植物和病原物相互作用表现侵染型为3型～4型的感病反应但田间病害发展速度相对较慢，终期病情指数低于25。2．3致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。2．4人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体放于植物体感病部位并使之发病的过程。2．5病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的数值化描述。2．6抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病虫害反应程度和抵抗水平的定性描述。2．7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位获得的在特定环境条件下培养的病原物。2．8接种体inoculmn能够侵染寄主并引起病害的病原体。2．9生理小种physiologicalrace1 NY／T1443．1—2007病原菌种、变种或专化型内的分类单位，各生理小种之间形态上无差异，但对具有不同抗病基因的鉴别品种的致病力存在差异。2．10鉴别寄主differentialhost用于鉴定和区分特定病原菌生理小种或菌系的一套带有不同抗性基因的寄主品种。211普遍率incidence或称发病率，发病植物体单元数占调查植物体单元总数的百分率，用以表示发病的普遍程度。在本标准中，植物体单元为叶片。2．12严重度severity发病植物单元上发病面积或体积占该单元总面积或总体积的百分率，亦可用分级法表示，即将发病的严重程度由轻到重划分出几个级别，分别用一些代表值表示，说明病害发生的严重程度。2．13病情指数diseaseindex是全面考虑发病率与严重度两者的综合指标。当严重度用分级代表值表示时，病情指数计算公式：研=∑(墨·Si)／∑(五·s一)×100其中，DI为病情指数，i为病级数(O--n)，墨为i级的单元数，s：为i级严重度的代表值，s。。为严重度最高级值，∑为累加符号，从0级(无病单位)开始累加。当严重度用百分率表示时，则用以下公式计算：DI=，×S×100其中，I为普遍率，S为平均严重度。2．14侵染型infectiontype根据小麦过敏性坏死反应有无和其强度划分的病斑类型，用以表示小麦品种抗条锈病程度，按0、0．、1、2、3、4六个类型记载，各类型可附加“+”或“一”号，以表示偏重或偏轻。215潜育期latentperiod病菌侵染小麦建立寄生关系后到被接种小麦表现症状之前的这一时期称为潜育期。2．16小麦条锈病wheatyellowrustorstriperust由小麦条锈病菌PucciniastriiformisWest．f．sp．tHticiEriks．etHenri．所引起的以叶部产生铁锈状病斑症状的小麦病害。小麦条锈病主要为害小麦叶片，也可为害叶鞘、茎秆和穗部。小麦受害后，叶片表面长出褪绿斑，以后产生黄色粉疱，即病菌夏孢子堆，后期长出黑色疱斑，即病菌冬孢子堆。夏孢子堆鲜黄色，窄长形至长椭圆形，成株期排列成条状与叶脉平行，幼苗期不成行排列，形成以侵染点为中心的多重轮状。冬孢子堆狭长形，埋于表皮下，成条状。3病原物接种体制备3．1条锈菌接种菌株分离采集具有典型条锈病病斑的小麦发病叶片置于铺有滤纸的培养皿中，平展叶片，浸泡16h--24h，用刀片刮取发病病斑，将刮下的夏孢子涂抹于感病品种铭贤169上，均匀喷雾，置于9℃～1312的保湿2 NY／T1443．1—2007间内黑暗保湿18h～24h，15d--17d后观察发病情况，获得分离物。分离物经形态学鉴定确认为P“c—ciniastriiformisWest．f．sp．triticiEriks．etHenn．后，进行单孢纯化，经致病性测定后，扩繁保存备用。3．2条锈菌分离菌株的生理小种鉴定对用于抗性鉴定接种的条锈菌应先进行生理小种鉴定。生理小种鉴定采用一套统一的鉴别寄主(见附录A)，根据条锈菌与鉴别寄主相互作用产生的抗病或感病模式(见表A．1)，确定不同菌株所属的生理小种。3．3小麦条锈菌的繁殖和保存3．3．1育苗选用直径为10cm，高度为10cin的花盆，装富含有机质的土壤，每盆播种20粒--25粒健康饱满感病品种铭贤169，覆土1㈨，之后将育苗钵置于盛水的育苗盘内，使水从育苗钵底部缓慢吸收至土体表面完全湿润，移出，置于15℃～18℃温室内培养6d～8d，待用。3．3．2接种和保湿接种：在操作台(或接种间)内进行。首先用清水喷雾净化空气，再用75％的乙醇对操作台(接种间)、接种针和手进行消毒。将待接种幼苗放在操作台(接种间)上，在幼苗转移时要套袋或采取其他措施防止空气中的孢子污染；写标签，记录接种日期及接种的菌种编号；用手蘸取小麦条锈菌夏孢子(或者从标样保湿后刮取的少量夏孢子)，接种到无菌苗的第一叶片上。保湿：将接种后幼苗置于接种桶中，用清水喷雾，使叶片表面附着一层均匀的雾滴，密封，在9"C～13℃黑暗条件下保湿18h--24h。3．3．3菌种繁殖菌种繁殖分为初繁和扩繁。初繁：条锈菌夏孢子在铭贤169上繁殖。待繁菌苗铭贤169第一叶片全部展开后，从液氮中取出保存菌种的安瓿瓶，在40℃--45℃温水中活化5rain，之后打开安瓿瓶，置于盛有湿润滤纸的培养皿中，于8℃～10℃黑暗条件下水化10h--12h。初繁采取涂抹法。此法主要用于繁殖少量菌种或接种少量鉴定材料时应用。从安瓿瓶或指形管中取出少许条锈菌夏孢子放在洁净的毛玻璃上，用滴管加入少量水，用接种针将条锈菌夏孢子与水拌匀备用。另外用洁净的手指蘸清水或0．05％吐温20(Tween20)水溶液将麦苗的叶片摩擦数次，去掉叶片表面的蜡质和茸毛，以利于菌液吸附于叶面上。用消毒过的接种针蘸上调制好的孢子悬浮液，涂抹于麦叶正面，插标签，记录接种日期及所用菌种。接种后把麦苗随即放入保湿桶中，再用清水喷雾，使麦苗和保湿桶的内壁沾满雾滴，喷雾不能过量。喷雾后，马上盖严塑料薄膜或玻璃，把保湿桶放置在9。C～13℃黑暗条件下保湿18h--24h。在接种不同生理小种时，接种用的一切用具都要先行消毒，防止可能发生的污染。扩繁：可采用涂抹法、扫抹法、喷(撒)粉法或喷雾法接种。扫抹法：先将一叶期的铭贤169置于接种桶内，叶面喷0．05％的Tween20水溶液，然后将发病幼苗倒置，使病叶片在接种桶内的无菌苗上扫抹3次～5次，再用0．05％的Tween20水溶液喷雾，使叶片表面附着一层均匀的雾滴，密封，置于9℃～13℃黑暗条件下保湿18h--24h。喷(撒)粉法：小喷粉器(或用双层纱布封口的玻璃试管)经消毒、干燥后，按20--30：1的比例均匀混合干燥滑石粉与叶锈菌夏孢子粉，再加入少量新采集的条锈菌夏孢子，混合均匀待用(滑石粉与夏孢子的比例约为20--30：1)。接种前，用手蘸清水将叶片拂擦数次，以去掉叶片蜡质，用喷雾器在麦苗上均匀喷上雾滴，随即用喷粉器(或用双层纱布封口的玻璃试管)将上述稀释的孢子粉均匀地喷洒(或抖落)到叶片上，再用清水喷雾，随即放入保湿桶中，盖上塑料薄膜，置于90C～13℃黑暗条件下保湿18h--24h。喷雾法：用小型喷雾器将新制备好的孢子悬浮液(在小烧杯内，加入要接种的条锈菌孢子，先用少量3 NY／T1443卜一2007清水湿润，搅成糊状，按照29孢子：1000mL比例加入水，转移至喷雾器内；或按10mg夏孢子：1mL无毒轻量矿物油一Soltrol。170的比例稀释成夏孢子悬浮液)喷在叶片已去除蜡质的麦苗上，自然干燥15min-30min，然后将麦苗放于保湿桶内置于9℃～13℃黑暗条件下保湿18h-24h。喷(撒)粉法及喷雾法适于对大量材料的接种鉴定。3．3．4潜育发病取出接种苗，置于可控温度的温室内培养。保持昼温15℃～19℃，夜温加℃～14℃；光照强度6000Lu)【～10000Lux，光照时间16h。待叶片显斑时(接种后7d)，剪去心叶，加玻璃罩隔离。接种后约15d～17d，夏孢子即可成熟，待用。3．3．5菌种收集空气净化和器具消毒操作同3．3．2，轻取产孢麦苗小心横放，用接种针轻轻抖动其叶片，使菌种散落到玻璃罩内，移去麦苗，再轻敲玻璃罩，将菌种集中，装入指形管。3．3．6菌种保藏根据待用时间的长短，菌种保藏可分短期保藏和长期保藏。3．3．6．1短期保藏当菌种在5d～6d内使用时，将装菌种的指形管放人盛有变色硅胶的干燥器内，置于O℃～5℃冰箱中备用。3．3．6．2长期保藏当菌种将在第二年或更长时问后使用时则可采用长期保藏。首先将菌种置于盛有变色硅胶的干燥器内，放在O*C～5℃冰箱中干燥5d，然后移至安瓿管中，抽真空，封管，置于液氮或一80℃冰箱中。4田间抗性鉴定田问抗性鉴定在鉴定圃内进行。4．1鉴定圃选址鉴定圃设置在小麦条锈病适发区，选择具备良好自然发病环境和可控灌溉条件、地势平坦、土壤肥沃的地块。4．2感病对照品种和诱发行品种选择鉴定所用感病对照品种和诱发行品种均采用铭贤169。4．3鉴定圃田间配置及大田播种4．31田间配置鉴定圃采用开畦条播、等行距配置方式。畦埂宽50cm，畦宽250cm，畦长视地形、地势而定；距畦埂125m处顺畦种1行诱发行，在诱发行两侧20crn横向种植鉴定材料，行长100cm，行距33crn，重复1次～3次，顺序排列，编号，鉴定圃四周设100crn宽的保护区。||||||||||||||}|||||{|l|||||||||ll}IIIIIIIIIIIlIIIIIIIlIIl●IlIIII●IIIIIlIIlIIIIIIIIIllIIIIlIIll：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：；；ll{：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：；：：：；：：：：：l：：：：：：：{：：：：：l：：{：：：l说明：lI：矩形框表示畦埂；——：实线表示诱发行和对照品种；：虚线表示鉴定材料。图1鉴定圃田间配置示意图4．3．2播种4 NY／T1443．1—20074．321播种时间播种时间与大田生产一致，或适当调整不同材料的播期以使植株接种期和发病期能够与适宜的气候条件(湿度与温度)相遇。冬性材料按当地气候正常秋播，弱冬性材料晚秋播，春性材料顶凌春播。4．3．2．2播种方式及播种量采用人工开沟，条播方式播种。每份材料播种1行，每隔20份鉴定材料播种1行感病对照品种铭贤169，鉴定材料每行均匀播种100粒；诱发行按每100CIll行长均匀播种100粒。44接种4．4．1接种期小麦条锈病抗性鉴定接种期为小麦拔节初期，选择晴朗无风天的傍晚进行。4．4．2接种方法采用夏孢子悬浮液喷雾法、喷(撒)粉法或注射法接种诱发行，利用诱发行发病后产生的夏孢子再传播侵染鉴定材料。根据鉴定需要选择单小种或混合小种。具体操作是将所选生理小种的夏孢子粉用数滴0．05％的Tween20水溶液调成糊状，按2g孢子：1000mL水比例稀释成夏孢子悬浮液。诱发行每隔500—设100crn长的接种段，用手持式喷雾器将夏孢子悬浮液均匀喷洒在接种段的小麦叶片上，之后速覆盖塑料薄膜，四周用土压严，次日清晨揭去薄膜。注射法。此法多用于麦苗有一定生长高度的拔节期。接种前，应配制好孢子悬浮液(配制方法同喷雾法)，一般在诱发行上每隔100cm左右选取10个--20个单茎分别注射接种。其方法是用注射器将孢子悬浮液从小麦心叶与其下的展开叶叶鞘相接处以下约1cm处注射，针头宜向下倾斜刺人，但不要刺穿，挤压少量悬浮液，以见到心叶处冒出水珠为度。悬浮液必须随用随搅拌或振荡。田间接种注射最好在阴天的傍晚进行。如天气干旱，接种后在接种点上浇水1次～2次，也可以在接种前或接种后适当灌水。再次接种时，间隔3d～5d，并选择诱发行不同的接种段接种。4．5接种前后田间管理在接种前6d～7d应先进行田间灌溉，或在雨后接种；接种后若遇持续干旱，应及时进行田间浇灌，不施用任何杀菌剂。4．6病情调查及记载标准461调查时间在小麦乳熟期进行病情调查。4．6．2调查方法及项目调查时每份材料随机抽样50个叶片(主要为旗叶)，逐叶进行调查记载严重度、侵染型，计算普遍率、平均严重度和病情指数，调查2次，间隔10d。4．6．3发病程度记载及标准4．6．3．1侵染型记载及标准病斑侵染型按0．0；、1、2、3、4六个类型划分，其划分标准见表1，各类型可附加“+”或“一”号，以表示偏重或偏轻，用以表示小麦品种抗锈程度。每一鉴定材料随机调查50片叶，逐叶调查记载侵染型，当发现同一叶片上出现不同侵染型时，主要侵染型记录在前。表1小麦条锈病侵染型级别殛其症状描述侵染型症状描述0叶上不产生任何可见的症状0；叶上产生小型枯死斑，不产生夏孢子堆l叶上产生枯死条点或条斑，夏孢子堆很小，数目很少5 NY／T1443．1—2007表1(续)侵染型症状描述2夏孢子堆小到中等大小，较少，其周围叶组织枯死或显著褪绿3夏孢子堆较大、较多，其周围叶组织有褪绿现象4夏孢子堆大而多，周围不褪绿注：侵染型级别经常用如下符号进行精细划分，即“一”表示疑孢子堆较其相应正常侵染型的夏孢子堆略小；“+”表示夏孢子堆较其相应正常侵染型的夏孢子堆略大。高抗(HR)中抗25中感Moderatelysusceptible(MS)4>25高感I-rlghlySusceptible(HS)5鉴定记载表格小麦抗条锈病鉴定原始记录及结果记载表格见附录B。7 NY／T1443．1—2007附录A(资料性附录)小麦条锈病病原菌和生理小种A．1学名和形态描述小麦条形柄锈菌小麦专化型PucciniastriiformisWest．f．sp．triticiEriks．etHenn．属真菌界(Fungi)、担子菌(亚)门(Basidiomycota)、锈菌纲(uredinjornycetes)、柄锈菌科(Pueei—naceae)、柄锈菌属(P一抽缸)。菌丝丝状，有分隔，生长在寄主细胞间，用吸器进入小麦细胞吸取营养，在病部产生孢子堆。夏孢子单胞球形，鲜黄色，表面有细刺，大小32tLm--40gm×22pm--29btm，有发芽孔6个～12个。冬孢子双胞，棍棒形，顶部扁平或斜切，分隔处略缢缩，大小36pm--68btmXl2肿～20Ⅱm，柄短。该菌致病性有生理分化现象，我国已定名32个生理小种，分别为条中1号至条中32号，条锈菌生理小种很易发生变异，1950年以后已出现过多次优势小种的改变。A2生理小种鉴定方法A．2．1采用的鉴别寄主生理小种鉴别寄主采用TrigoEureka．，Fulhard，保春128(Lutescensl28)，南大2419(Mentana)，维尔(Virgilio)，阿勃(Abbondanza)，早洋(EarlyPremium)，阿夫(Funo)，丹麦1号(Danishl)，尤皮2号(Ju—bilejina2)，丰产3号(Fengchan3)，洛夫林13(Lovrinl3)，抗引655(Kangyin655)，水源11(Shuiyuan11)，中四(Zhong4)，洛夫林10(Lovrinl0)，Hybrid46，Triticumspel缸album和贵农22(Guinong22)共19个小麦品种。A．2．2条锈菌生理小种编码规则与命名中国小麦条锈菌生理小种和致病类型及其在鉴别寄主上的反应见表A．1。8 NY／T1443．1—2007*=一=士士ZZJJZ王士ZZ士士Z士Z一士*==士士ZZ—ZZ士士士士JZJ一一*=一譬一ZZJJZZZZZ士王一J*=一=ZZ墨王Z士ZZ士ZZZ一一J一一*=一2JZZ王Z士ZZJZ-1J士JJJ一一枯ZZZZ士ZZZ士一一士J—J一粼*=一o。广_—H-饕=一nZZ士ZZZ士ZZJ士士JZJZ姥ZZ士J—ZZZ士士ZJJZ*·若=一。一·若=∞Z士士士一ZZ士士ZZJJZZJZJ*=一吲Z士Z士JZZ士士ZZ—ZZZJ一—*=一mZ士ZZZZZ士士ZZZZ一*=一“ZZZZZZ王Z士Z士J*=一一ZZJ—Z一士一一JJJJZ一一oZ=王Z墨Z士ZZ墨ZJ士士一一ZJ一—Z净一。。士Z士ZZ士士ZZ士士士一士J士ZJJ—J枯Z卜一h士士ZZ士士Z士士士士士ZZZ——一{9《Z净coZ士ZZZZZZ士一Z一一ZZ∞呻Z}一∞ZZZZ—ZZZZZZJZZ一=2J皇Z．苔Z，一目一ZZZZZZZ士士ZZ—Z士J士士Z礤壬籍审ZZZZZZZZZZZZZ士J士士JJ礤岳高审ZZZZZ士ZZZJZZJZJZZ媒壬昌审士士士Z士士ZZ王ZZ—ZZ一艇2一。。士ZZZZZZ士士Z士士J一一ZJJJ枯称癣箸∞Z士ZZZZZZ士士ZZZ一一Z一一一∞__斑譬一“士ZZZZZ士士JZZ—Z一一一媲垛子器审士士工ZZ王士士士JZZ一一一ZJJ枯建2一。士ZZ—ZJ士Z士士ZZ一一,-1一Z—J粼o痤2一“ZZ士一JZ士ZZ—Z—Z一一H■癯礤导器审=王Z士ZZZZZ—ZJJJ士JJJ越嶙蛊叫州骺藤绷惮蜱嘲副粼峡箭冥熏、『，倒州粗眚l}搬州、f，匦日|?礤廿焉帝一Z0士Z士JJZZZZ一一一JJJJJ剥媒岳器审一——ZZZ士ZZZZZZJ■《噼娥岳葛伞ZZZZZZZ—Z一一一J一一一候镪媒岳器巾ZZZZ士士Z士一工JJ—JJJ—J1幡J悄嵌岳斜伞ZZ王士ZZZZZZJ士J—J一一一一J——Z娥岳高中ZZ士士ZZZZ芏王JJ一一J—J一=．．媒导詈即J士士士ZZ士一ZJ一一--I—JJ一￡一—一—f嵌导譬帝J一J—JZJ一一--1eZZ士Z士一一J副媒毒趔候州飞蝠相血咖丑r．譬∞2时专器1幅t器喜ⅡnN∽蛞昌=基暑僻HNH一辅由至璀_}L斗K赌臣咏搂_|椎杈*藕赴水悄采*蝗辖*廿媲士憾一一山鹾证蝌宜ⅢL宣女"●●●●●●●u弓oHN∞吲帅∞卜∞2=竺竺==譬2趟●●●●●●●●o。__-_9 NY／T1443．1—2007附录B(规范性附录)表B年小麦品种《系】抗条锈病鉴定原始记录及结果记载表病情级别严重度％普遍率％编号品种名称来源侵染病情鉴定结果型调查发病调查总指数151020406080100平均平均叶片数叶片数注1：鉴定地点地势注2：接种病原菌分离物编号生理小种类型注3：接种日期调查日期注4：播种日期注5：海拔高度m经度纬度鉴定技术负责人(签字)lO'