生物药物分析与检验

生物药物分析与检验生物药物分析与检验的特点：1.需要进行相对分子质量的测定、2.需要检查生物活性3.需做安全性检查4.需做效价测定5.要用生化法确证结构终点测定法的条件：1.必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品；2.能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件；3.反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助简便的方法进行测定高效液相色谱法的定性分析1.利用已知物质定性的方法①　利用保留特性②　利用不同柱比较2.色谱法与其他方法结合定性①　利用化学反应定性②　利用选择性检测器定性③　液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术生物检定的范围:1.药物的效价测定2.体内微量生物活性物质的测定3.中药质量的控制4.某些有害杂质的限度检查基因工程药物的特点：1.分泌量极低而生理、药理活性极高2.具有细胞和组织特异性3.多数细胞生长因子具有多功能性4.细胞因子间存在复杂的相互作用5.具有低免疫原性特殊杂质检查方法：物理化学区分方法一、物理法“1.臭味及挥发性的差异2.颜色上的差异3.溶解行为上的差异二、化学分析法1.酸碱反应2.呈色或沉淀反应3.产生气体4.氧化还原反应 免疫电泳技术：将琼脂电泳与免疫扩散结合起来，即利用电场作用下带电蛋白质在琼脂凝胶中具有不同的迁移率，以及相同的蛋白质具有完整的抗原性的特点，用于分析抗原或抗体性质的一种技术。电泳：带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。终点测定法：先借助酶反应（单独的反应或几种酶构成的偶数酶反应）使被测物质定量地进行转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质（第二底物）等的变化量生物检定：利用生物体（整体动物、离体组织/器官、细胞和微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。质反应：当一定剂量的药物注入动物体内后，观察某一反应或反应的某一程度出现与否，只有质的变化。量反应：药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者。杂志：指药物中存在的无治疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质药典主要包括凡例、正文、附录和索引四部分组成生物药物常用的定量分析法：酶法、电泳法、免疫分析法、理化测定法、生物检定法酶分析法包括酶法分析和酶活力测定酶联免疫吸附分析法包括直接法和夹心法电泳法分为自由界面电泳、区带电泳和高效毛细管电泳。指示液：溴酚蓝用于指示电泳终点；甘油比重大，使样品下沉SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应：分子筛效应、浓缩效应、电荷效应高效液相色谱法的优点：速度快、分辨率高、灵敏度高、柱子可反复使用、样品容易回收要获得较好色谱分离有两个途径：一是最大峰间的距离要大，二是色谱峰要窄常用的脱气方法：真空脱气法、煮沸脱气法、溶剂的滤过微生物检定法测定抗生素效价：稀释法，浊度法，管碟法。其中我国是管碟法。氯化物检查法：用硝酸，硝酸银硫酸盐检查法：用盐酸，氯化钡，标准对照液：标准硫酸钾溶液铁盐检查法：中国药典和美国药典采用硫氰酸盐，英国药典采用巯基醋酸法重金属检查常用的显色剂：硫代乙酰胺、硫化钠澄清：不超过0.5号浊度标准液的浊度时；几乎澄清：介于0.5号至1号浊度标准液之间 胰岛素的含量测定：高效液相色谱法；生物活性检查：生物测定法；生物检定法：小鼠血糖法、小鼠惊厥法、家兔血糖法氨基酸药物分析的含量测底1.酸碱滴定法——谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸2.非水溶液滴定法——甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸、、、、、3.定氮法——精氨酸和天冬酰胺4.碘量法或溴量法——盐酸半胱氨酸、L-胱氨酸5.HPLC或氨基酸自动分析仪：谷丙甘氨酸胶囊等复方制剂蛋白质药物分析的含量测定1.定氮法——人胎盘的蛋白质测定2.电泳法——人血白蛋白的纯度测定3.高效液相色谱法——胰岛素含量测定4.生物检定法——硫酸鱼精蛋白的效价测定葡萄糖酸钙中蔗糖或还原糖类检查用的试剂是碱性酒石酸铜试液蔗糖加硫酸煮沸后，用氢氧化钠试液中和，再加亚硫酸钠试液，产生红色沉淀葡萄糖中存在的特殊杂质为糊精取乳糖5.0g，加热水25ml溶解，放冷，加硝酸汞试液5ml，5分钟内不得产生白色絮状沉淀，这是检查蛋白质类杂质葡萄糖注射液的含量测定方法为旋光度法用旋光度测定法测定葡萄糖氯化钠注射液时，加入氨试液的作用加速D—葡萄糖α和β两种互变异构体互变平衡的到达葡萄糖的Fehling反应所需要的试剂是碱性酒石酸铜Keller-Kiliani反应α-去氧糖的反应洋地黄毒苷、地高辛（靛蓝色）Kedde反应不饱和内酯的反应去乙酰毛花苷（红紫色）纸色谱地高辛1、葡萄糖注射液的鉴别反应是Fehling反应2、洋地黄毒苷的鉴别是Keller-Kiliani反应3、去乙酰毛花苷的鉴别反应是Kedde反应4、用于地高辛鉴别和特殊杂质检查的方法PC特殊杂质检查洋地黄毒苷洋地黄皂苷（灵敏度法）地高辛洋地黄毒苷（PC）脂类药物含量测定方法1.酸碱滴定法——熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸，用氢氧化钠滴定液2.重量法——谷固醇含量测定，加入洋地黄皂苷3.紫外分光光度法——大豆磷脂中磷，比色法；胆红素，牛黄4.气相色谱法——鱼油多不饱和酸 基因工程药物的指控要点和主要方法（论述）1.1原材料：主要是对目的基因、表达载体及宿主细胞（如细菌、酵母、哺乳细胞和昆虫细胞）的检查，以及使用它们时制订严格要求1.2培养过程无论是发酵还是细胞生产，关键是保证基因的稳定性、一致性和不被污染。主要控制的有生产用细胞库、有限代次的生产、连续培养过程。1.3纯化工艺过程要求能保证去除微量DNA、糖类、残余宿主蛋白质、纯化过程带入的有害化学物质、致热原，或者将这类杂质减少至允许量。1.4最终产品主要表现在生物学效价测定、蛋白质纯度检查、蛋白质的比活性、蛋白质的性质鉴定几个方面。1.5杂质检测蛋白类，由于降解、聚合或者错误折叠而造成的目的蛋白变构体在体内往往会导致抗体的产生；非蛋白类，主要有细菌、病毒、热原质和DNA几种类型，往往在极低的水平就可以产生严重的危害作用。1.6安全性试验其中的无菌试验、热原试验、安全性和毒性试验按我国新颁布的《中国生物制品规程》进行。2.1蛋白质含量常用的方法有光吸收法、双缩脲法、福林-酚法等。2.2蛋白质纯度是一个重要的指标。常用的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、等电聚焦（IEF）、毛细管电泳（HPCE）、高效液相色谱（HPLC）等。2.3蛋白质的分子量测定常用的方法有SDS-PAGE、HPCE、质谱法等。2.4蛋白质等电点的测定理论上，一种蛋白质只有一个等电点。常用的方法有等电聚焦法等。2.5氨基酸组成分析常用的方法有水解蛋白质或多肽、氨基酸衍生方法（茚三酮法、荧光胺法）等2.6部分氨基酸序列分析首先将氨基酸一个一个依次从蛋白质或者多肽的末端（N端或C端）切割下来，有化学法和酶法（化学法用得较多）；然后在氨基酸残基上衍生一个生色基团，通过HPLC法进行分离测定。包括N端氨基酸分析和C端氨基酸分析。2.7肽图分析根据蛋白质分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶作用于特殊的肽链位点，将蛋白质裂解成较小的片断，通过一定的分离检测手段形成特征性的指纹图谱来进行分析。 例：在同一根色谱柱上测出：正庚烷，正辛烷和未知物的调整保留时间分别为14.08s，25.11s和16.32s，试计算它们的保留指数I。解：由定义可知：I庚=100×7=700I辛=100×8=800由求出保留指数与文献保留指数对照可知未知物为甲苯。杂志限量计算题杂质限量%=杂志最大允许量/供试品量*100%=标准溶液的体积*标准溶液的浓度/供试品量*100%]即L=V*c/S*100%例1：检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2mL（每1mL相当于1mg的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001％，应取供试品的量为BA.0.20gB.2.0gC．0.020gD.1.0gE.0.10g检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？DA.0.2mlB.0.4mlC．2mlD.1mlE.20ml 下面是诗情画意的句子欣赏，不需要的朋友可以编辑删除！！谢谢！！！！！1.染火枫林，琼壶歌月，长歌倚楼。岁岁年年，花前月下，一尊芳酒。水落红莲，唯闻玉磬，但此情依旧。2.玉竹曾记凤凰游，人不见，水空流。3.他微笑着，在岁月的流失中毁掉自己。 4.还能不动声色饮茶，踏碎这一场，盛世烟花。5.红尘嚣浮华一世转瞬空。6.我不是我你转身一走苏州里的不是我。7.几段唏嘘几世悲欢可笑我命由我不由天。8.经流年梦回曲水边看烟花绽出月圆。9. 人生在世，恍若白驹过膝，忽然而已。然，我长活一世，却能记住你说的每一话。10.雾散，梦醒，我终于看见真实，那是千帆过尽的沉寂。11.纸张有些破旧，有些模糊。可每一笔勾勒，每一抹痕迹，似乎都记载着跨越千年万载的思念。12.生生的两端，我们彼此站成了岸。13.缘聚缘散缘如水，背负万丈尘寰，只为一句，等待下一次相逢。14.握住苍老，禁锢了时空，一下子到了地老天荒15.人永远看不破的镜花水月，不过我指间烟云世间千年,如我一瞬。16.相逢一醉是前缘，风雨散，飘然何处。17.虚幻大千两茫茫，一邂逅，终难忘。相逢主人留一笑，不相识，又何妨。18.天下风云出我辈,一入江湖岁月催;皇图霸业谈笑间,不胜人生一场醉。19.得即高歌失即休，多愁多恨亦悠悠，今朝有酒今朝醉，明日愁来明日愁。20.直道相思了无益，未妨惆怅是清狂。21.看那天地日月，恒静无言;青山长河，世代绵延;就像在我心中，你从未离去，也从未改变。22.就这样吧，从此山水不相逢。23.人天自两空，何相忘，何笑何惊人。24.既不回头,何必不忘。既然无缘,何须誓言。今日种种,似水无痕。明夕何夕,君已陌路。25.有缘相遇,无缘相聚,天涯海角,但愿相忆。有幸相知,无幸相守,苍海明月,天长地久。26.相见得恨晚，相爱的太慢，进退让我两难。缘过了远分，缘过了聚散，是否回头就能够上岸27.天凉了,凉尽了天荒地老了,人间的沧桑，爱哭了,这么难舍心都空了,想放不能放。天亮了,照亮了泪光泪干了,枕边地彷徨28.心微动奈何情己远.物也非,人也非,事事非,往日不可追29.渺渺时空,茫茫人海,与君相遇,莫失莫忘。30.如果换我先开口，日子是否还一样细水长流31.也许是前世的姻也许是来生的缘错在今生相见徒增一段无果的恩怨32.人道海水深，不抵相思半。海水尚有涯，相思渺无畔。 33.醉眼看别人成双作对，34.无人处暗弹相思泪。35.终于为那一身江南烟雨覆了天下，容华谢后，不过一场，山河永寂。36.千秋功名，一世葬你，玲珑社稷，可笑却无君王命。37.凤凰台上凤凰游，负约而去，一夜苦等，从此江南江北，万里哀哭。38.嗟叹红颜泪、英雄殁，人世苦多。山河永寂、怎堪欢颜。39.风华是一指流砂，苍老是一段年华。40.夜雨染成天水碧。有些人不需要姿态，也能成就一场惊鸿。41.你要记得，紫檀未灭，我亦未去。42.谁在岁月里长长叹息。43.汉霄苍茫，牵住繁华哀伤，弯眉间，命中注定，成为过往。44.红尘初妆，山河无疆。最初的面庞，碾碎梦魇无常，命格无双。45.江南风骨，天水成碧，天教心愿与身违。46.山河拱手，为君一笑。47.如是颠簸生世亦无悔。48.荏苒岁月覆盖的过往，白驹过隙，匆匆的铸成一抹哀伤。49.那被岁月覆盖的花开，一切白驹过隙成为空白。50.褪尽风华，我依然在彼岸守护你。51.那些繁华哀伤终成过往，52.请不要失望，平凡是为了最美的荡气回肠。53.你的路途，从此不见我的苍老。54.长歌当哭，为那些无法兑现的诺言，为生命中最深的爱恋，终散作云烟。55.随你走在天际，看繁花满地。56.我自是年少，韶华倾负。57.你要记得，那年那月，垂柳紫陌洛城东。58.苍茫大地一剑尽挽破，何处繁华笙歌落。59.寄君一曲，不问曲终人聚散。60.谁将烟焚散，散了纵横的牵绊;听弦断，断那三千痴缠。61.清风湿润，茶烟轻扬。重温旧梦，故人已去。1.水滴虽小，却可以折射出太阳的光彩。2.梦落三千尺愁深似海，繁华遗落散满地。记忆轮回里，我举杯，在奈何桥上满口饮尽。3. 人生没有轮回，就像花，人活一世，花开一季、人生如花，花似梦。 4.生活的苦涩和美好给了我对人生的领悟，如今，千山万水走遍，我发现自己再也不愿离开文学的蓝天，再也不愿离开那个让我痴迷的文学舞台。5.在烟雨红尘中，轻拾季节花瓣飘落的音符，组成美妙曲符，然后，倚在时光的路口，撷一缕明媚，许自己一份唯美的怀想，与快乐、浪漫相约，闲淡清欢。6.未经历坎坷泥泞的艰难，哪能知道阳光大道的可贵;未经历风雪交加的黑夜，哪能体会风和日丽的可爱;未经历挫折和磨难的考验，怎能体会到胜利和成功的喜悦。挫折，想说恨你不容易7.燕子斜飞人家，炊烟零乱，柳絮飘飘，弥漫了山里人家。8.这样知解自己的生命即使是心灵空荡我也无所畏惧9.中秋之曰不可能岁月明如水，偶然的暗淡，恰似镜子的背后之面，有所缺憾，人生才会是积翠如云的空濛山色。10.在经受了失败和挫折后，我学会了坚韧;在遭受到误解和委屈时，我学会了宽容;在经历了失落和离别后，我懂得了珍惜。11.曾经盛开的蔷薇，虽经风吹雨打，但和着微风，还有屡屡暗香飘过。12.我只希望，不管三年，五年，或是十年以后。某一天，我们相遇，还能相认，你大喊一声，我想死你了。那一刻，我定会泪流满面。我们是朋友，永远的朋友。13.最爱的未必适合在一起，相爱是让彼此做自己。14.时间断想，时间不断。流逝，像是水，可弯可直，像是风，可柔可刚。15.如果说人生是一望无际的大海，那么挫折则是一个骤然翻起的浪花。如果说人生是湛蓝的天空，那么失意则是一朵飘浮的淡淡的白云。16.云层雾气，缠着几户古木人家，清新自然，如诗如画。17.我喜欢你，只是一个现在;我爱你，却是一整个未来。18.夜雨染成天水碧。有些人不需要姿态，也能成就一场惊鸿。19.再大的风不会永不停息，在浓得雾不会经久不散，风息雾散仍是阳光灿烂。20.牵着时光的衣襟，走进芳菲五月，轻轻地将春光拥入怀中，于一抹素白流韵中，弹奏一曲江南的婉韵，把盏，将似水流年浅斟轻酌。21.我穿越轮回而来，在奈何桥相思盈袖，凄然守候。莫落泪，纵若水落三千尺东流，云动八万里西散，我依旧会化身城碟，翩翩起舞跨过奈何桥与你相会。22.如果我爱你，我就会理解你，通过你的眼睛去看世界。我能理解你，是因为我能在你身上看到我自己，在我身上也看到了你。23.似乎风在转向，送走了缓缓袭来的味道，又将刚刚溜走的风，静静地换回来。24.生活告诉我，童话只不过是小孩子幻想的游戏。25.人生就像穿着一件长满虱子的华丽睡袍，外表美丽，而内心却充满了干啊和恐慌。26.必须用另一种真实方式来代替时光里已经逝去的东西 27.岁月，依一抹浅香于心间，看年华向晚，闻花香送暖。给时光一个浅浅的回眸;给自己一份微笑从容。沉淀，馨香;念起，温暖。28.人生的起起落落间，总会有一些情怀需要安静回味;总会有一些伤痛需要独自体会;总会有一段路需要一个人走;总会有一些事需要坦然面对。29.疏影横斜水清浅，暗香浮动月黄昏。30.心若没有栖息的地方，到哪里都是在流浪。31.今后，我会从尘世中的纷争走出，远离喧嚣，把岁月打磨成诗，让自己的文字静如睡莲，动如涟漪，无论何时都能描绘成美丽的水墨丹青。32.全是理智的心，恰如一柄全是锋刃的刀，它叫使用它的人手上流血。——泰戈尔33.我们都不擅长表达，以至于我们习惯了揣测。去肯定，去否定，反反复复，后来我们就变得敏感而脆弱。34.心心念念的往事、曾经深爱过的人、年少琐碎的过往，它们就像缠绕之间的一阵风，来的缱绻，去的时候让人来不及挽留。35.如果在乎的没有那么多，想要的没有那么多，生活便会简单得很多。36.在极度的喧嚣中，独自微笑独自平静是憾，落花是美的，淡淡的书香，淡淡的花香，淡淡的馨香。37.曾芬芳过的那片土地，幸福的花儿虽早已凋谢，只留下风雨吹打的痕迹。38.辗转半世红尘，缘去缘灭，空留满池伤痕。雨花迟落，霜雪纷飞，池水泛冰，已益处月的苍凉。39.一条古道，一匹瘦马，一个人影，被落日的余晖缓缓拉长。40.我们人生的大幕才刚刚拉启：刀光剑影，英雄本色;是非恩怨，儿女情常。41.我们要去流浪，虔诚地定格住每一寸记忆;我们要去成长，潇洒地忘却掉每一条纹路。42.嗅着昨日芬芳遗留的气息，寻寻觅觅，仍不见踪迹。邂逅了一场烟火，终还是那般凄凉。迷失的夜晚，点缀了无数颗孤单的星星，不知道那是否有属于我的一颗。43.像这样轻飘飘的日子和平平静静的心情，也算是生活中的一种享受吧。44.想着远方的你，绝美的笑容，只为你一个人展露，那一泓羞涩的笑容，悄悄。45.细碎的声音，如羞涩的蓓蕾，夜暮花影，轻浅六月，寂寂流年，拢一阙清绝，归隐在宋词里。46.夕阳沉落在海水深处却不见浪花翻滚，淡淡的只留下一个让人沉思的背影。落雨是晚风中的殇，带着晨曦的翘首滑落最后的伤痕!雨尽含羞，淡抹嫣红!47.无影击碎了泪水，岁月在那个光年划下的痕迹原来是一刀一刀地刻在了我的心上。48.我收拢了梦想的翅膀，我停却了信念的脚步，却再也作不回曾经的那一天。49.我宁愿用尽此生，为那些尘世的硝烟尘雾，潸然泪下，为菩提落花，为世间繁华。50.阳光依旧在，我们穿越光影，沿着历史的足迹继续前行，创造美好生活，走向美丽明天! 51.洋溢着春日的微笑，坚强了外表，却虚伪了内心，脆弱了，是不敢触及的。52.也许，就在那一刻里，梦境还在，柔情亦在。53.一个人的戏，自己独自导演，诠释精彩。在剧中尽情释放着自己的喜怒哀乐。笑得凄然绝美;哭得肝肠寸断。54.但生命中被你刻上痕迹的那些岁月无法抹去。55.往事悠然一笑间，不必空忧。我们一路走来，只是为了告别往事，走入下一段风景。倘若让忧伤填补了生命的空白，就真的是亵渎了生命。56.人生只有回不去的过去，没有过不去的当下。上帝只会给你过得去的坎，再不好过的生活，再难过的坎，咬咬牙，也就过去了。57.我一直以为山是水的故事，云是风的故事，你是我的故事。可是却不知道，我是不是你的故事。58.生命并不是一场竞赛，而是一段旅程。如果你在途中一直都试图给他人留下深刻印象，超过别人，那你就浪费了这段旅程。59.比如新的朋友新的感情新的思绪我想要知道的60.我以为我已经将爱情忘记，将你忘记。可是有一天，我听到一首歌，我的眼泪就出来了。因为这首歌，我们曾一起听过。61.忍花开花落，云卷云舒，品人生似棋。62.我离开你这一种信仰又会以怎样全新的姿势去面临更深沉的挑战63.人生路，路迢迢，谁道自古英雄多寂寥，若一朝，看透了，一身清风挣多少。64.只有夕阳站在那里。灵魂像无数的雪花飘过，光明闪烁，渐渐清醒。65.终于为那一身江南烟雨覆了天下，容华谢后，不过一场，山河永寂。66.荏苒岁月覆盖的过往，白驹过隙，匆匆的铸成一抹哀伤。67.忘川水不枯，记忆不散;奈何桥不断，思卿不弃;今夕，彼岸花又放，佳期约又到，我轮回践约而来，等你归来。红尘路上，伊人在否?68.十年生死两茫茫，不思量，自难忘，千里孤坟，无处话凄凉，纵使相逢应不识，尘满面，鬓如霜。69.天空飘过一朵云，有时是晴，有时是阴。但白昼终归还是白昼。70.我知道回不去，但还是会想念会回忆会心疼到无法自拔。71.天空不曾留下鸟的痕迹，但是我已飞过、在大地上画满窗子，让所有习惯黑暗的眼睛都习惯光明。72.人生首先要是望远镜，看远;再就是显微镜，看细;接下来是放大镜，看透;其次是太阳镜，看淡;最后是哈哈镜，笑看生活。73.我不是公主，也不会有等待救赎我的王子。