生物检测技术试题集

生物检测技术试题集一、名词解释1、引物：PCR反应过程中的一段与模板链互补，DNA聚合酶以其作为起始进行核酸聚合反应的一段短核苷酸序列。2、Sangerreaction：是在近于中性或碱性和室温的情况下,2,4-二硝基氟化苯DNP与蛋白质分子中N-端氨基酸中的游离α氨基生成DNP衍生物，浓盐酸加热水解全部肽键,生成物中有一DNP氨基酸。3、Tm值：50％DNA分子发生变性的温度称为变性温度（即熔解曲线中点对应的温度），由于这一现象和结晶的熔解相类似，故又称熔点或熔解温度(meltintemperature，Tm)。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半时的温度。4、DNA变性：是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，双链变成单链，从而使核酸的天然构象和性质发生改变。变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，均可引起核酸分子变性。5、全基因组鸟枪法测序：将基因组打成小片段后将其克隆到质粒载体中，然后随机挑取克隆对插入片段测序，并以获得的测序序列构建重叠群。在此基础上进一步搭建序列支架，最后以分子标记为向导将序列支架锚定到基因组整合图上。6、real-timePCR：是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。7、蛋白质一级结构(primarystructure)：就是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序（sequence），也是蛋白质最基本的结构。它是由基因上遗传密码的排列顺序所决定的。各种氨基酸按遗传密码的顺序，通过肽键连接起来，成为多肽链，故肽键是蛋白质结构中的主键。8、蛋白质的三级结构：是指球状蛋白质的多肽链在二级结构的基础上相互配置而形成特定的构象。α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲等二级结构通过侧链基团的相互作用进一步卷曲、折叠，借助次级键的维系形成三级结构，三级结构的形成使肽链中所有的原子都达到空间上的重新排布，它是建立在二级结构、超二级结构和结构域基础上的球状蛋白质的高级空间结构。9、宏基因组学（Metagenomics）又叫微生物环境基因组学、元基因组学。它通过直接从环境样品中提取全部微生物的DNA,构建宏基因组文库，利用基因组学的研究策略研究环境样品所包含的全部微生物的遗传组成及其群落功能。10、蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识，这个概念最早是由MarcWilkins在1994年提出的。二、填空题1、核酸分离纯化的技术路线包括破碎细胞、分离除杂、浓缩、分析鉴定以及分装保存等步骤。2、质粒DNA的分离纯化主要包括：碱裂解法；沸煮裂解法；SDS裂解法等。 3、DNA复性不仅受温度、时间影响还受DNA浓度以及DNA顺序的复杂性影响。4、PCR根据时间和温度可分为三个步骤，即变性、退火和延伸。5、高通量测序技术步骤分为：1.样本准备（samplefragmentation)；2.文库构建(librarypreparation)；3.测序反应(sequencingreaction)；4.数据分析(dataanalysis)。6、基因作图有三种类型，即遗传作图、物理图谱和转录图谱。7、比较基因组学是基于基因组图谱和测定基础，对已知的基因和基因组结构进行比较，从而了解基因的功能、表达机理和物种进化的学科。8、由于蛋白质分子结构中特殊的键或基团造成蛋白质具有紫外吸收、蛋白黄反应、Millon反应、双缩脲反应、ninhydrin反应、亚硝酸反应、硫的反应、sakaguchi反应、丹酰化反应以及两性电解质等特点。9、蛋白质一级结构测定通常是将蛋白质水解、部分水解以及选择性水解，再分别测定水解产物的组成，包括肽类和氨基酸，以观察组成蛋白质的氨基酸种类、数目、排列状态和次序等。10、氢键是稳定蛋白质二级结构的主要作用力，二级结构包括：α-螺旋(α-helix)、β-折叠(β-sheet)、β-转角(β-turn)和无规卷曲(randoncoil)。11、蛋白质高级结构分析测定方法分为仪器分析法和理论分析法。12、蛋白质组学检测技术主要包括：电泳分析法；层析技术和质谱技术。13、生物传感器是利用生物要素与物理化学检测要素组合在一起对被分析物进行检测的装置，包括三个部分：识别元件；换能器和检测元件组成。14、根据电子鼻探测信号的类型可将其分为电信号电子鼻、光信号电子鼻、温度信号电子鼻和质量信号电子鼻，其中电信号电子鼻应用最为广泛。三、判断改错题1、CT值越小，模板DNA的起始拷贝数越少（×）2、测定蛋白质水解程度可采用双缩脲法（√）3、变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因（×）4、.PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增，靶序列DNA片段的增加一直成指数形式（×）5、模板核算的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一。（√）6、PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度，一般的循环次数选在30-40次之间。（√）7、PCR循环次数越多，特异性产物的量亦随之增多（×）8、TaqMan探针是高度特异性的定量PCR技术，其核心是利用Taq酶的3’→5’外切核酸酶活性，切断探针，产生荧光信号。（√）9、DNA变性后两条互补链还能重新结合，称为复性，无论外界条件如何都能复性。（×）10、酚抽提法是基因组DNA分离纯化的一种方法。（√）11、蛋白质高级结构最终由初级结构所决定。（√）12、蛋白质是一种两性电解质是由于蛋白质既有氨基又有羧基。（√）13、氢键是稳定蛋白质二级结构的主要作用力。（√）14、相比于基因组包含的全部基因，蛋白质组包含了更多的功能性多肽，部分归因于蛋白质的修饰作用。（√）15、X射线衍射法不但可以测定晶体结构而且可以用于测定非晶体结构。（×） 1、蛋白质二级结构属于高级结构。（√）2、β折叠属于蛋白质三级结构的一种。（×）3、生物芯片，又称蛋白芯片或基因芯片，它们起源于DNA杂交探针技术与半导体工业技术相结合的结晶。（√）4、微生物传感器比酶传感器价格昂贵不利于推广应用。（×）5、生物传感器用途广泛，涉及医疗保健、疾病诊断、食品检测、环境监测、发酵工业等各个领域。（√）四、选择题1、高效毛细管电泳和一般电泳法的区别在于（B）A.电渗流的速度B.使用毛细管柱C.操作自动化D.毛细管容易冷却2、PCR反应的特异性决定因素中的关键是（A）A.引物与模板DNA特异正确的结合B.碱基配对原则C.TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性D.靶基因的特异性与保守性3、对PCR产物检测的方法不正确的是（B）A.凝胶电泳分析法B.荧光标记法C.分子杂交法D.核酸序列分析法4、以下哪项不是目前常见的生物芯片（D）A.基因芯片B.芯片实验室C.蛋白芯片D.核酸芯片5、32.什么是PCR特异性反应的关键（B）A．酶B、引物C.dNTPD模板6、双链DNA在（A）温度范围内变性A、90-95摄氏度B、75-80摄氏度C、80-85摄氏度D、70-75摄氏度7、下列关于缓冲液的性质叙述错误的是（C）A.溶液PH值距离其等电点越远，电泳的速度就越大B.当缓冲液PH大于蛋白质分子的等电点时，其电泳方向指向正极C.对两性分子而言，缓冲液PH并不影响其电泳方向D.泳动度与溶液黏度是成反比关系8、下列关于PRC反映的五要素说法正确的是（A）A．引物、酶、dDTP、摸板、Mg2+浓度B．引物、蛋白质、dNTP、摸板、Mg2+浓度C．引物、温度、dNTP、模板、Mg2+浓度D．引物、酶、dDTP、RNA、PH值9、.在常规紫外光测定时，紫外光波长集中于（B）区A.小于190nmB.200～400nmC.400～800nmD.800nm以上10、下列方法中不属于生物样品的预处理方法的是（E）A.消化分解B.提取C.分离D.浓缩E.结晶11、在显微镜的光学系统中，能够在上涂抹香柏油为介质的器材是（C）A.反光镜B.聚光器C.物镜D.目镜12、下列微生物涂片的制作过程正确的是（C）A.涂片→干燥→固定→水洗→染色→干燥→镜检B.涂片→干燥→水洗→染色→干燥→固定→镜检C.涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检D.涂片→干燥→染色→固定→水洗→干燥→镜检 13、对PCR产物检测的方法不正确的是（B）A.凝胶电泳分析法B.荧光标记法C.分子杂交法D.核酸序列分析法14、以下哪项不是目前常见的生物芯片（D）A.基因芯片B.芯片实验室C.蛋白芯片D.核酸芯片15．在探针制备中常用到某些荧光物质，以下哪项不是（A）A.PNAB.TMRC.罗丹明D.Cy516.从酶的反应温度来看，温度变化1摄氏度，反应速度可能相差（A）A．10%以上B.5%C.不变D.1%17.不属于固化酶的优点的是（D）A.可反复使用B.高稳定性C.干扰较小D.酶活力最高18.下列哪项不是影响电泳分析的因素（D）A.待分离生物大分子的性质B.电渗C.溶液粘度D.分离时间19.PCR反应的特异性的决定因素中(C)_是最关键的.A.碱基配对原则B.TagDNA聚合酶合成反应的忠实性C.引物与模板DNA特意正确的结合D.靶基因的特异性与保守性20.ＴＬＣ是什么的简称（A）A薄层层析B纸层析Ｃ高效液相色谱Ｄ气相色谱21.凝胶的种类很多，常用的凝胶主要有（D）。①葡聚糖凝胶②聚丙烯酰胺凝胶③琼脂糖凝胶④多孔玻璃珠⑤多孔硅胶⑥聚苯乙烯凝胶A.①②③B.①②④⑤C.③④⑤⑥D.以上都是22..下列关于核酸探针的分类叙述错误的是（C）A.根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针B.根据是否使用放射性标记物的与否，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针C．根据是否存在互补链，可分为互补链探针和非互补链探针D．根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀标记和末端标记探针五、简答题1、简述PCR原理、方法及应用PCR技术类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。PCR技术广泛应用有关基因操作的基础研究，及各种病原体所致疾病临床检测，以及各种基因突变及基因表达异常所致的疾病检测。2、简述双脱氧末端终止法测序原理 利用DNA聚合酶以单链DNA为模板,合成互补DNA链，在合成过程中引入不同荧光标记的四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)作为链终止剂与正常的dNTP竞争，结果产生分别终止于模板链的每一个A、C、G和T位置上的一系列长度的核苷酸链。通过高分辩率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,从胶片上通过荧光直接读取出DNA上的核苷酸顺序。3、结构基因组学与功能基因组学的区别结构基因组学主要描述染色体上核苷酸序列的构造，通常以一些功能不明确的遗传标志如STS/EST作记号加以描述，方法有RFLP(限制性酶切片段长度多态性)、RAPD(随机引物扩增多态性DNA)、AFLP(扩增片段长度多态性)、STR(短串联重复序列,又称微卫星)DNA遗传多态性分析、SNP(单个核苷酸的多态性)分析、YAC作图。功能基因组学主要描述染色体上功能区的结构分布，通常以一些功能明确的遗传标志如与细胞分化、信号传递等有关的基因作记号加以描述，方法有减法杂交、cDNA差异、mRNA差异显示、cDNA微阵列、生物芯片以及AFLP等。4、简述质谱仪测定肽或DNA序列的原理用化学裂解法或酶法处理蛋白质或核酸，形成不同分子量大小的次级片段，经质谱仪分离测定，可形成具有精确质量差的肽片段谱或DNA片段谱，由质谱图中相邻各峰之间的精确质量差可依次读出氨基酸的顺序或核苷酸的顺序。5、简述急性毒性试验的原则。急性毒性试验是一次给予受试物后观察动物所产生的毒性反应，并测定其半数致死量(1D50)。观察时间一般为一周,范围可为1～28天。药物要用两种以上给药途径(包括推荐给临床研究的给药途径,溶于水的药物应当测定静脉注射的LD50)。观察到有毒性反应时应进行肉眼尸检,记录所有病变。当尸检发现病变组织时,应对该组织进行镜检。6、生物传感器的分类及其依据是什么？按所用分子识别原件的不同，生物传感器可分为酶传感器、微生物传感器、细胞传感器、组织传感器和免疫传感器按信号转换元件不同，生物传感器可分为生物电极传感器、电化学生物传感器、半导体生物传感器、测热型生物传感器、测光型生物传感器、测声型生物传感器等。按对输出电信号的不同测量方式不同，生物传感器又可分为电位型生物传感器、电流型生物传感器和伏安型生物传感器。7、简述生物芯片技术主要步骤1）芯片制备，先将玻璃片或硅片进行表面处理，然后使DNA片段或蛋白质分子按顺序排列在芯片上。2）样品制备，生物样品往往是非常复杂的生物分子混合体，除少数特殊样品外，一般不能直接与芯片反应。可将样品进行生物处理，获取其中的蛋白质或DNA、RNA，并且加以标记，以提高检测的灵敏度。3）生物分子反应，芯片上的生物分子之间的反应是芯片检测的关键一步。通过选择合适的反应条件使生物分子间反应处于最佳状况中，减少生物分子之间的错配比率。4）芯片信号检测，常用的芯片信号检测方法是将芯片置入芯片扫描仪中，通过扫描以获得有关生物信息。8、简述蛋白质等电聚焦技术。 等电聚焦是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。等电聚焦凝胶电泳依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。