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1.(2011·长春模拟)下列关于PCR的描述中,正确的是( )。①PCR是一种酶促反应 ②引物决定了扩增的特异性③扩增DNA利用了热变性的原理 ④扩增的对象是氨基酸序列A.①②④B.②③④C.①③④D.①②③解析 PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,在高温条件下,把DNA的双链打开,缓慢冷却后,又重新结合,需要耐高温DNA聚合酶,同时,还需要引物,从引物的3′端连接脱氧核苷酸。答案 D2.下列关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法中,正确的是( )。A.以DNA为模板,使DNA子链从5′端延伸到3′端的一种酶B.TaqDNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加C.DNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列D.TaqDNA聚合酶是从深海生态系统中发现的解析 本题主要考查了DNA聚合酶在PCR技术中的作用及特点。DNA聚合酶不能从头开始催化合成DNA,而只能从DNA单链的3′端延伸子链;TaqDNA聚合酶能耐高温,所以在反应体系中可反复利用,无需另外再添加;PCR扩增的是引物之间的固定长度的DNA序列;TapDNA聚合酶是1966年从美国黄石公园的一个热泉某种菌体内发现的。答案 A3.下图所示为PCR扩增的产物,请分析此产物是哪次循环的产物( )。A.第一次循环B.第二次循环C.第三次循环D.第四次循环
解析 本题考查PCR的过程。在PCR反应中,以引物为标记,第一次循环时,以加入的DNA为模板,两条DNA链可分别由引物Ⅰ和引物Ⅱ与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸,所以形成的每个DNA中只有一种引物;从第二次循环开始,上次产生的DNA分子又可作为模板参与反应,所以会形成DNA分子两端均含引物的情况,如下图所示,因此题干中所出现的情况是第一次循环的产物。答案 A4.在进行DNA亲子鉴定时,需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增,获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如下图,图中黑色长方形是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。(1)图中的变性、延伸分别是指________、________。(2)假设PCR反应中的DNA模板为P,第一轮循环的产物2个子代DNA为N1,第二轮的产物4个子代DNA为N2,N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有____个、____个。若继续循环,该DNA片段共经过30次循环后能形成____个DNA片段。(3)某样品DNA分子中共含3000个碱基对,碱基数量满足:(A+T)/(G+C)=,若经5次循环,至少需要向试管中加入______个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
(4)若下图为第一轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。解析 (1)变性的实质是DNA双链解旋;延伸的实质是以DNA单链为模板,按碱基互补配对原则合成子链的过程。(2)由于PCR原理为DNA双链复制,其特点是半保留复制,所以无论复制几次,模板链一直存在于2个DNA分子中。DNA复制的数量变化是指数式增长方式。(3)由(A+T)/(G+C)=可知A∶T∶G∶C=1∶1∶2∶2,所以A的比例为1/6,在一个DNA分子中的数量为3000×2×(1/6)=1000(个),5次循环的DNA数为32个,所以就原料合成的DNA数相当于32-1=31(个),至少需腺嘌呤脱氧核苷酸为31×1000=31000(个)。(4)画图的关键是注意引物A、B的位置和两引物所对应的模板链。答案 (1)模板DNA双链解旋形成单链 在DNA聚合酶的作用下,原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链 (2)2 2 230 (3)31000 (4)如图课堂小结