分子生物学及发酵工程实验室常用试剂与配方

目录氨苄青霉素配方-Ampicillin2IPTG2X-Gal2LB培养基2LB/Amp培养基3SOB培养基3磷酸缓冲液4SDS-PAGE蛋白胶配置4SOC培养基6φb×broth6LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基7 氨苄青霉素配方-Ampicillin1.组份浓度：100mg/ml2.配制量：10ml3.配制方法：Ⅰ.称量1gAmpicillin置于10ml离心管中。Ⅱ.加入一定量去离子水，充分混合溶解后，定容至10ml。Ⅲ.用0.22μm过滤膜过滤除菌。Ⅳ.小份分装（1ml/份）后，-20℃保存。IPTG1.组份浓度：24mg/ml2.配制量：50ml3.配制方法：Ⅰ.称量1.2gIPTG置于50ml离心管中。Ⅱ.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。Ⅲ.用0.22μm过滤膜过滤除菌。Ⅳ.小份分装（1ml/份）后，-20℃保存。X-Gal1.组份浓度：20mg/ml2.配制量：50ml3.配制方法：Ⅰ.称量1gX-Gal置于50ml离心管中。Ⅱ.加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ml。Ⅲ.小份分装（1ml/份）后，-20℃避光保存。LB培养基Ⅰ.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10gⅡ.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。一般不用调节pHⅣ.加去离子水将培养基定容至1L。Ⅴ.高温高压灭菌后，4℃保存。 LB/Amp培养基1.组份浓度（W/V）：Tryptone1%YeastExtract0.5%NaCl1%Ampicillin0.1mg/ml2.配制量：1L3.配制方法：Ⅰ.在1LLB培养基中加入1mlAmpicillin（100mg/ml）后均匀混合。Ⅱ.4℃保存。SOB培养基1.组份浓度：2%（W/V）Tryptone0.5%（W/V）YeastExtract0.05%（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl22.配制量：1L3.配制方法：配制250mMKCl溶解。Ⅰ.在90ml的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100ml。Ⅱ.配制2MMgCl2溶液。在90ml去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100ml，高温高压灭菌。Ⅲ.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gNaCl0.5gⅣ.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 Ⅴ.量取10ml250mMKCl溶解，加入到烧杯中。Ⅵ.滴加5NNaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。Ⅶ.加去离子水将培养基定容至1L。Ⅷ.高温高压灭菌后，4℃保存。Ⅸ.使用前加入5ml灭菌的2MMgCl2溶液。磷酸缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。pH－－A液（ml）－－B液（ml）5.60－－9.50－－0.255.91－－9.00－－1.006.24－－8.00－－2.006.47－－7.00－－3.006.64－－6.00－－4.006.81－－5.00－－5.006.98－－4.00－－6.007.17－－3.00－－7.007.38－－2.00－－8.007.73－－1.00－－9.008.04－－0.50－－9.50SDS-PAGE蛋白胶配置下层：SDS-PAGE分离胶12%胶5mL蒸馏水1.6mL30%丙稀酰胺混合溶液(29:1)2mL1MTris-Cl(pH8.8)1.3mL 10%SDS0.05mL10%过硫酸铵0.05mLTEMED0.002mL上层：SDS-PAGE浓缩胶5%胶2mL蒸馏水1.4mL30%丙稀酰胺混合溶液(29:1)0.33mL1MTris-Cl(pH6.8)0.26mL10%SDS0.02mL10%过硫酸铵0.02mLTEMED0.002mL SOC培养基1.组份浓度：2%（W/V）Tryptone0.5%（W/V）YeastExtract0.05%（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖2.配制量：100ml3.配制方法：Ⅰ.配制1M葡萄糖溶液。称量18g的葡萄糖溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml，用0.22μm滤膜过滤除菌。Ⅱ.向100mlSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2ml，均匀混合。Ⅲ.4℃保存。φb×broth1.组份浓度：2%（W/V）Tryptone0.5%（W/V）YeastExtract0.5%（W/V）MgSO·7H2O 2.配制量：1L3.配制方法：Ⅰ.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gMgSO4·7H2O5gⅡ.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。Ⅲ.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。Ⅳ.加去离子水将培养基定容至1L。⑤高温高压灭菌后，4℃保存。LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基1.组份浓度：1%（W/V）Tryptone0.5%（W/V）YeastExtract1%（W/V）NaCl0.1mg/mlAmpicillin0.024mg/mlIPTG0.04mg/mlX-Gal1.5%（W/V）Agar2.配制量：1L3.配制方法：Ⅰ.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g Ⅱ.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。Ⅲ.滴加5NNaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。Ⅳ.加去离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。⑤高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。⑥加入1mlAmpicillin（100mg/ml）、1mlIPTG（24mg/ml）、2mlX-Gal（20mg/ml）后均匀混合。⑦铺制平板（30～35ml培养基/90mm培养皿）。⑧4℃避光保存平板。