09环境微生物复习内容

环境工程微生物学复习资料绪论1、什么是微生物（Microbe）？答：对形体微小，形态简单的低等生物的统称。 2、微生物的共同特性有哪些？答：(1)形体微小，结构简单；(2)分布广，种类多；(3)生长旺盛，繁殖快；(4)适应力强，易变异。 3、微生物是如何分类的？4、微生物是如何命名的？5试说明原核微生物和真核微生物的区别。 Chapter1病毒名词解释：病毒、亚病毒、类病毒、毒性噬菌体、温和噬菌体、原噬菌体1.何为病毒？病毒区别于其他生物的特点是什么？2.病毒包括哪些形态和基本结构？3.有被膜的病毒是哪几种类型？被膜的作用是什么？4、怎样判断病毒有无被膜？5、叙述大肠杆菌T系噬菌体的病毒的繁殖过程。6、何为溶源性，溶源性有何特性？7、亚病毒包括哪几类病毒？Chapter2原核微生物1、细菌有哪几种基本形态？其形态是固定不变的吗？细菌大小用什么单位测量？答：1）球菌：细胞呈球形，a单球菌：b双球菌：c四联球菌：d八叠球菌：e链球菌：f葡萄球菌：球菌排列方式（优势排列）较稳定，对于细菌分类鉴定有重要意义。2）杆菌：杆菌排列方式不稳定，对细菌分类鉴定无意义。3）螺旋状菌：弧菌：菌体弯曲程度小于一周，呈“C”状，如霍乱弧菌。螺旋菌：菌体弯曲程度大于一周，螺旋圈数及螺距大小因种而异。细菌形态受环境条件如温度、营养状况、培养时间等因素的影响，环境条件不适时，菌体形态长呈现异常形态。细菌大小的测量单位是微米（um） 2、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构有什么区别?答：革兰氏阳性菌细胞壁——一层，由很厚的肽聚糖和磷壁酸组成。革兰氏阴性菌细胞壁——分内壁层和外壁层两层。内壁层，紧贴细胞膜,仅由1—2层肽聚糖分子构成，无磷壁酸。外壁层，位于肽聚糖层的外部。  12 3、菌胶团、芽孢、荚膜、菌落的概念答：菌胶团——有些细菌的粘液层粘连在一起，使许多细菌成团块状生长。芽孢：是某些细菌细胞生长发育后期在胞内生成的圆形、椭圆形、圆柱形的抗逆性休眠结构。荚膜——某些细菌细胞壁外形成的厚度不一，疏散、透明、粘稠胶状物质结构。主要由多糖多肽或蛋白质组成。保持水分、储存养分。菌落：在适合的培养条件下单个菌体在固体平面培养基上形成的肉眼可见的群体。 4、简单说明细菌有哪些一般结构和特殊结构?特殊结构有哪些生理功能？答：细菌的一般结构又叫基本结构，即所有细菌都具有的细胞结构部分，包括细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、质粒、内含物等。特殊结构：部分细菌专有的细胞结构部分，包括芽孢、鞭毛、荚膜、菌胶团等。 荚膜的功能：①具有荚膜的S—型肺炎链球菌毒力强，有助于肺炎链球菌侵染人体；②荚膜保护致病菌免受宿主吞噬细胞的吞噬，保护细菌免受干燥的影响；③当缺乏营养时，荚膜可被用作碳源和能源，有的荚膜还可作氮源；④废水生物处理中的细菌荚膜有生物吸附作用，将废水中的有机物、无机物及胶体吸附在细菌体表面上。粘液层在废水生物处理过程中有生物吸附作用，在曝气池中因曝气搅动和水的冲击力容易把细菌粘液冲刷入水中，以致增加水中有机物，它可被其他微生物利用。细菌之间按一定的排列方式互相粘集在一起，被一个公共荚膜包围形成一定形状的细菌集团，叫做菌胶团。菌胶团在废水生物处理过程中有生物吸附作用和氧化分解有机物的能力，并具有指示作用。芽孢是抵抗外界不良环境的休眠体。鞭毛是细菌的运动器官。5、试述细菌芽孢的特征?为什么具有芽孢的细菌能够抵抗不良的环境?答：a强抗逆性：抗高温，抗干燥，抗压，抗药物渗透（难于被染色），抗酸碱抗辐射，折光性等。b休眠性：芽孢可长时间保持休眠状态而不表现代谢活性，正因为此，可保存多年而不丧失生命活力。若环境条件适宜，休眠状态芽孢可萌发并发育形成新营养细胞。C壁厚质浓，水分少。所以芽孢的特殊结构和代谢活力弱决定了芽孢能够抵抗不良的环境。 6、试述细菌革兰氏（Gram）染色原理？答：革兰氏阳性菌G+和革兰氏阴性菌G-两类细菌细胞壁结构组成上有明显差异导致其染色结果不同。G+经过结晶紫初染，碘液媒染，菌体胞壁被染成紫色，后经酒精脱色，由于其细胞壁较厚，肽聚糖结构层次多，且交联程度大，网孔径因酒精脱水而缩小，细胞壁内形成的结晶紫—碘复合物被阻留于细胞壁内，表现为不被脱色，后虽经过复染，最终染色结果仍然为紫色。G-经过结晶紫初染，碘液媒染，菌体胞壁被染成紫色，后经酒精脱色，由于其细胞壁较薄，肽聚糖结构层次少，且交联程度低（松疏），细胞内类脂成分含量较大，网孔径因酒精溶解脂类作用而增大，细胞壁内形成的结晶紫—12 碘复合物被洗脱，后经过红色染料复染，最终染色结果为红色。7、试述革兰氏（Gram）染色步骤。Chapter3真核微生物 名词解释：原生动物、原生动物的孢囊1简述真菌、藻类、原生动物在废水生物处理中的作用。答：真菌在生物滤池中起到结合生物膜的作用。有效氧化无机氰化物。若大量繁殖易引起污泥膨胀。铁细菌的存在会造成铁质水管的腐蚀和堵塞，并使水呈现颜色，影响水质。藻类大量繁殖产生气味，使水有颜色。藻类过量繁殖造成水体富营养化，危害水生生物，使湖泊变成沼泽或旱地。适量的藻类可使水体自净。原生动物净化废水，以原生动物作为水环境的指示生物。 2原生动物对废水净化有哪些影响？答：（1）鞭毛虫、肉足虫、纤毛虫能直接利用水中的有机物，对水中有机物的净化有一定的积极作用。（2）在活性污泥中，纤毛虫可促进生物凝絮作用。小口钟虫、累枝虫等能分泌糖类促进絮凝。（3）纤毛虫吞噬游离细菌，改善生物处理出水的水质。  3、如何区别霉菌和放线菌的菌落  Chapter4微生物的生理名词解释 培养基、生长因子、选择培养基和鉴别培养基1、微生物需要哪些营养物质？ 答：营养物质主要包括碳源、氮源、无机盐、生长因子、水。2、根据所需碳源和能源的不同，微生物的营养类型分为几种？其碳源和能源分别是什么？ 答：分为4种，（1）光能无机营养型，碳源为二氧化碳，能源为光；（2）化能无机营养型。碳源为二氧化碳，能源为无机化合物氧化；（3）光能有机营养型，碳源为有机物，能源为光；（4）化能有机营养型，碳源为有机物，能源为来自有机物氧化。3、简述培养基的分类答：根据物理状态分液体、半固体和固体培养基；根据组成成分分天然培养基、合成培养基和半合成培养基；根据用途分加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。4、在配制培养基时琼脂的特性及作用是什么？ 答：琼脂的成分是多缩半乳糖，不被绝大多数微生物分解利用，96℃溶解，42-45℃凝固，对微生物无毒害。琼脂的作用是在培养基的配制中用做凝固剂。 5、在进行高压蒸汽灭菌时，为什么要排净锅内的冷空气？12 答：高压蒸汽灭菌利用水蒸气的压力来提高温度，一般要求温度121℃（15磅），时间20~30分钟，当水蒸气的压力为15磅时，温度达到121℃。空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，如果不排除锅内的空气，当压力达到15磅时，温度低于121℃，达不到灭菌的要求。6、影响酶促反应速率的因素有哪些？答：温度、pH值、底物浓度、酶的浓度、激活剂和抑制剂。7、试对酶催化效率高的原因进行简要说明。答： 酶催化效率高的原因：酶能降低活化能的高度（即能阈），从而降低反应物所需的活化能，这样间接增加活化分子的数目，使反应速率加快。8、试区别自养微生物与异养微生物。答：自养微生物生活时所需碳源为无机物，异养微生物生活时所需碳源为有机物。 9、灭菌、消毒的概念。 答：灭菌——用理化方法杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢的过程。消毒——用理化方法杀死致病微生物或杀死全部微生物的营养细胞及一部分的芽孢。10、试述微生物灭菌和消毒分别有哪些方法，微生物灭菌和消毒两者的本质区别是什么？11、营养物质顺浓度梯度进入细胞的方式有哪些？是如何进入的？12、营养物质逆浓度梯度进入细胞的方式有哪些？是如何进入的？13、什么是营养物质？营养物质有那些生理功能？   Chapter5微生物的生长繁殖与生存因子  1、解释细菌的生长曲线。答：将少量纯菌接种到一定量的液体培养基内，在适宜的温度下培养，并定时取样测定活细菌的数目和重量的变化，以活细菌个数的对数或活细菌重量为纵坐标，以培养时间为横坐标作图，所得的曲线即为细菌的生长曲线。 2、微生物学实验室常用的灭菌方法有哪些？当对啤酒、培养皿、LB培养基、接种工具和无菌室空间进行灭菌时，可分别采用哪些方法？答：实验室常用的灭菌方法有：①干热灭菌：包括火焰灼烧法和烘箱内热空气灭菌法（160～170℃）②湿热灭菌法有常压蒸汽灭菌和加压蒸汽灭菌另外对那些高温易分解或者破坏其营养成分的物质，必须采用除高温以外的其他灭菌手段，如巴斯德消毒法、过滤除菌和紫外灭菌等。③巴氏消毒法④过滤除菌⑤紫外灭菌12 啤酒--巴氏消毒法培养皿——烘箱内热空气灭菌法、常压蒸汽灭菌和加压蒸汽灭菌LB培养基——加压蒸汽灭菌接种工具——火焰灼烧法和烘箱内热空气灭菌法无菌室空间——先用酒精等消毒液擦洗，再进行紫外灯照射灭菌3、画图解释微生物生长曲线各个时期的特征。常规活性污泥法应该利用哪个时期的微生物？为什么？  1．停滞期少量细菌刚接入一定量的新鲜液体培养基中，并不立即生长繁殖，需要有一个适应过程。此时细胞物质开始增加，但数量不增加或增加很少，而后个别菌体繁殖，个数少许增加。曲线平缓；大量诱导酶合成。2．对数期特点•生长速率最快，细菌数以几何级数增加•代谢旺盛，细胞成分平衡发展•群体的生理特性较一致接种用的好种子。代谢、生理研究的好材料3．静止期特点：细胞代谢活力钝化，细胞成分合成缓慢；细胞生长速率为零；活细胞总数维持不变，即新生的细胞数与死亡的细胞数相等，细菌总数达到最大值4．衰亡期——营养物质被耗尽，细菌进入内源呼吸阶段；有害物质大量积累，不利于细菌的生长繁殖，此时，菌体死亡速度大于繁殖速度，死亡率增加，活菌数减少。细菌常出现畸形或衰退型。12 对于常规活性污泥法，是利用静止期（生长下降阶段）的微生物，而不是对数期的，这时因为：对数期的微生物生长繁殖快，代谢活力强，能大量去除废水中的有机物，但是相应地要求进水有机物浓度要高，而出水有机物浓度也相应提高，不易达到排放标准；又因为对数期的微生物生长旺盛，没形成荚膜和粘液层，不易形成菌胶团，沉淀性能差，降低出水水质。而处于静止期的微生物虽然代谢活力略低，但仍能较好地去除水中的有机物，且微生物体内积累了大量的贮存物，形成荚膜等，强化了微生物的生物吸附能力，自我絮凝、聚合能力强，在二沉池泥水分离效果好，出水水质好。4、菌种退化、菌种复壮的概念。菌种退化：指群体中退化的细菌占到一定数量后表现出的菌种性能下降的现象。为了保持菌种的优良特性能够得到保存，需要进行退化菌种的复壮。5、微生物菌种保藏的原理和目的是什么？保藏目的：使优良菌种不受污染、不退化、不死亡。保藏原理：创造一定的环境，使被保藏的菌种代谢活力减弱，使其生长、繁殖受到抑制，使微生物处于休眠状态。6、抗生素是如何抑制杀灭微生物的？答：通过4个方面：A、抑制微生物细胞壁合成B、破坏微生物的细胞质膜C、抑制蛋白质合成D、干扰核酸的合成7、菌种的保藏方法有哪几种？保藏方法：定期移植法（低温保藏）、干燥、隔绝空气法、蒸馏水悬浮法、综合法等。8、简述测定细菌生长的几种方法。答：直接测定法和间接测定法。直接测定法有显微镜计数法和比浊计数法，测定的是总菌数。间接测定法有平板计数法和薄膜计数法，计数的是活菌数。 9、细菌是怎样繁殖的？答：细菌的繁殖是裂殖。一个细胞分裂为两个子细胞，核质分裂为二，每个细菌子细胞具有亲本细胞同样的核物质，再进行下一轮的裂殖。以2n级数增加个体数。 10、根据最适生长温度不同可将微生物分为几种类型？答：三种。低温菌、中温菌和高温菌。 11、 在微生物的培养过程中，引起pH值改变的原因有哪些？在生产实践中如何能保证微生物能处于稳定和合适的pH环境中？答：在培养微生物的过程中，随着微生物的生长繁殖和代谢活动的进行，培养基的pH会发生变化，其原因有多方面。例如，大肠杆菌在pH为712 左右的培养基中生长，分解葡萄糖、乳糖产生有机酸这会引起培养基的pH下降，培养基变酸。微生物在含有蛋白质、蛋白胨及氨基酸等中性物质培养基中生长，这些物质可经微生物分解，产生NH3和胺类等碱性物质，使培养基pH上升。在废水和污泥厌氧消化过程中，通常pH应控制在6.6—7.6之间。城市生活污水、污泥中含蛋白质，在处理时可不加缓冲性物质。如果不含蛋白质、氨等物质，处理之前就要投加缓冲物质。所加的缓冲物质有碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化铵及氨等。12紫外线杀菌的机理和适用范围是什么？答：机理，使核酸变性形成胸腺嘧啶二聚体，产生新生态氧杀菌。紫外线杀菌力弱，不能穿透玻璃，只用于表面和空气杀菌。书上P200-201习题6,7,21 Chapter7微生物的生态名词解释土壤自净、土壤生物修复、水体自净、富营养化1、为什么说土壤是微生物良好的天然培养基？微生物的生长发育主要受到营养物、含水量、温度、pH等因子的影响，土壤具备了微生物所需要的营养和各种环境条件1）营养：土壤内有大量的有机和无机物质2）pH：土壤pH范围在3.5~8.5，多为5.5~8.5；适合于大多数微生物的生长繁殖。3）渗透压：土壤内通常为0.3~0.6MPa，土壤是等渗或低渗溶液，有利于微生物吸收水份和营养4）氧气和水：土壤具有团粒结构，有孔隙，可以通气和保持水分。5）温度：土壤具有较强的保温性，其变化幅度要小于空气。6）保护层：表面几毫米厚的土壤，可以使下面的微生物免受紫外线的直接照射。所以说，土壤具备了微生物所需要的营养和各种环境条件，是微生物良好的天然培养基。2、土壤中有哪些微生物？从种类上看，以细菌最多，达70-90%，其次为放线菌、真菌，以及藻类、原生动物和微型后生动物等。3、以什么微生物作为空气污染指示菌？为什么?4、什么是指示生物？如何用指示生物来评价水体的污染程度？答：一种生物只在某一种环境中生长，这种生物就是这一环境的指示生物。污化系统一般根据以下原理分区：当有机污染物排入河流后，在其下游的河段中发生正常的自净过程，在自净中形成了一系列连续的“带”。因为各种水生生物需要不同的生存条件，对各种有害物质也有不同的耐力，包括细菌、真菌、原生动物、藻类、底栖动物、鱼类等。多污带指示生物是细菌、颤蚯蚓，a-12 中污带的指示生物是细菌、天蓝喇叭虫，B-中污带的指示生物是水生植物出现、轮虫出现，寡污带显花植物出现、鱼类种类多。5、水体有机污染指标有几种？6、为什么用大肠菌群作为检验水的卫生指标？答：对饮用水进行卫生细菌学检验，目的是保证水中不存在肠道传染病的病原菌。天然水本身存在病原菌的可能性很小，水中的病原菌很可能是受粪便污染带入。所以只检测水中是否有肠道正常细菌存在，而不直接检测水中的病原菌。肠道正常细菌有三类：大肠菌群、肠球菌、产气荚膜杆菌。大肠菌群的生理习性与伤寒杆菌、痢疾杆菌和霍乱弧菌病原菌较为相似，外界存活时间基本一致，肠球菌在外界存活时间比病原菌短（检不出不能说水没被污染），产气荚膜杆菌有芽孢可长期存活（检出不能说明水体近期污染的）；大肠菌群在人粪便中数量很大，另两种数量少不宜检测；大肠菌群的检测技术操作简单，不复杂。所以大肠菌群可做水受粪便污染的指标。 7.我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定是怎样的？答：具体规定:（1）细菌总数1ml水中不超过100个。（2）每100ml水样不得检出总大肠菌群数、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌。（3）游离性余氯：加氯消毒时，接触时间为30分钟，游离性余氯不低于0.3mg/l；管网末梢游离性余氯不低于0.05mg/l。Chapter9环境污染控制与治理中的微生物学1、如何区分新生菌胶团和老化菌胶团？答：活性污泥性能的好坏，主要可根据所含菌胶团多少、大小及结构来确定。新生菌胶团颜色较浅，无色透明，有旺盛的生命力，氧化分解有机物的能力强。老化菌胶团吸附了许多杂质，染色较深，看不到细菌单体，像一团烂泥，生命力较差。2好氧活性污泥的组成和性质如何？答：好氧活性污泥由好氧微生物和兼性厌氧微生物与其上吸附的有机的和无机的固体杂质组成。性质——颜色以棕褐色为佳，黑色说明厌氧、白色说明无机物过多n含水率在99％大小为0．02-0．2mm弱酸性(pH约为6．7) 3、菌胶团的作用是什么？4、好氧活性污泥运行时微生物会造成哪些问题？加以分析。答：常见故障是二次沉淀池中固液分离（泥水分离）出现问题。起因是活性污泥絮状体的结构不正常造成。造成活性污泥絮状体的结构不正常的原因（1）不凝聚。污泥在沉淀池中呈悬浮状，高浓度地随水流流出。12 （2）起泡沫（厚、棕色泡沫）。由“硬”洗涤剂的使用而引起诺卡氏菌属的丝状微生物超量生长，气泡又附着在诺卡氏菌的菌体上（3）污泥膨胀。是活性污泥的性能发生变化，絮块漂浮水面，比重减轻，随着水流而排出。 5、生物膜的概念、生物膜处理废水的原理。答：生物膜——微生物在滤料表面繁殖形成的膜状结构。是一个生态系统。生物膜处理废水的原理：（1）滤池内设置固定的滤料，当废水自上而下滤过时，由于废水不断与滤料接触，微生物在滤料表面繁殖，逐渐形成生物膜。（2）当生物膜形成并达到一定厚度时，氧就无法透入生物膜内层，造成内层的厌氧状态，使生物膜的附着力减弱。此时，在水流的冲刷下，生物膜开始脱落。随后在滤料上又会生长新的生物膜。如此循环往复，废水流经生物膜后得以净化。 6、试述活性污泥法处理废水的净化作用原理，活性污泥法常见的处理工艺有哪些? 答：活性污泥法处理废水的净化作用过程分三步：第1步在有氧的条件下，活性污泥绒粒中的絮凝性微生物吸附废水中的有机物第2步是活性污泥绒粒中的水解性细菌水解大分子有机物为小分子有机物，同时，微生物合成自身细胞。第3步是其他的微生物吸收或吞食未分解彻底的有机物。好氧活性污泥法的处理工艺很多，常见的有推流式活性污泥法、完全混合式活性污泥法、接触氧化稳定法、分段布水推流式活性污泥法、氧化沟式活性污泥法。7、废水生物处理法、生物处理单元、好氧生物处理法、厌氧生物处理法的概念。答：废水生物处理法——利用微生物处理废水的方法。生物处理单元——处理废水的微生物和处理构筑物共同构成生物处理单元。好氧生物处理法——在有氧的条件下借好氧微生物的作用处理废水。又叫废水生物处理。厌氧生物处理法——在无氧的条件下，借多种厌氧微生物的作用处理废水。又叫厌氧消化。 13举出三种以上利用好氧微生物处理废水的方法。 14好氧活性污泥、菌胶团的概念。 8、叙述好氧活性污泥中的主要微生物群落并画出好氧活性污泥法的工艺流程图。好氧活性污泥的微生物群落好氧活性污泥的结构和功能的中心是菌胶团。在其上面生长有其他微生物，如酵母菌、霉菌、放线菌、藻类、原生动物及微型后生动物等。好氧活性污泥法的工艺流程图如下：12  9、简述生物膜法处理废水的原理及生物膜的结构。答：在滤池内设置固定的滤料，当废水自上而下滤过时，由于废水不断与滤料接触，微生物在滤料表面繁殖，逐渐形成生物膜。当生物膜形成并达到一定厚度时，氧就无法透入生物膜内层，造成内层的厌氧状态，使生物膜的附着力减弱，此时在水流的冲刷下，生物膜开始脱落。随后在滤料上又会生长新的生物膜，如此循环往复，废水流经生物膜后得以净化。生物膜似海绵状，由两部分组成附着生物体部分和液膜部分，附着生物体部分的膜外层生活好氧微生物，膜内侧生活厌氧微生物（接触滤料），液膜部分分附着水层和流动水层。 Chapter10污水深度处理1、名词解释氨化作用、硝化作用、反硝化作用、人工湿地、聚磷菌答：氨化作用——在微生物的作用下，有机氮转化为氨态氮（NH3、NH4+）的过程。硝化作用——在有氧气时，微生物将氨氧化为硝酸的作用。反硝化作用——硝酸盐在通气不良环境中（缺氧），被反硝化细菌还原成NO2或N2的过程。 2、分析生物脱氮的原理，及生物除磷的原理。答：生物脱氮的原理——生物脱氮是污水中的含氮有机物，在生物处理过程中被氨化微生物氧化分解，转化为氨氮，然后由自养型硝化细菌将其转化为NO3-，最后再由反硝化细菌将NO3-还原为N2，从而达到脱氮的目的。生物除磷的原理——利用聚磷菌一类的细菌，过量地、超出其生理需要地从外部摄取磷，并将其以聚合形态储存在体内，形成高磷污泥，排出系统，达到从废水中除磷的效果。 3、饮用水消毒的方法有几种？  4、简单讨论控制水中微生物的方法。12 答：控制水中微生物的方法分病原微生物的去除和藻类的去除。目前自来水厂常用的病原微生物的去除有加氯消毒、臭氧消毒、紫外线消毒和二氧化氯消毒。加氯消毒在水中的加氯量包括需氯量和余氯量，要求加氯接触30分钟后，游离性余氯不应低于0.3mg/L，集中式给水，除水厂的出水应符合上述要求外，管网末梢水的游离性余氯不应低于0.05mg/L，水的pH值越低，消毒效果越好，水温低，消毒效果好。臭氧有强的杀菌力，不需长时间接触可杀死细菌，对病毒、芽孢有很大的杀伤效果，还可以除铁、除锰、去臭、去味。二氧化氯消毒是一种氯消毒法，效果优于氯，次于臭氧。优点不形成致癌物——三氯甲烷。PH6~10范围内，杀菌效果几乎不受PH影响。二氧化氯有很强的除酚能力。紫外线一般只在特殊情况下小规模使用，如色度低、悬浮杂质和胶体物少、水深不超过12cm的水。藻类问题主要发生在水库、湖泊中，可选用CuSO4，效果好，药效长，但不能去臭；漂白粉可杀藻也可去臭。不管是CuSO4还是漂白粉都要注意在用量范围内使用。微生物研究方法及实验  1、简单染色法有什么用途?答：观察细菌的形态、大小和排列方式。  2、作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚?其染色成败的关键是什么?答：涂片过厚染料在规定时间内不宜着色，从而造成染色结果错误。染色成败的关键是95%酒精脱色30秒。 3、革兰氏染色有什么用途？答：鉴别细菌是阳性菌还是阴性菌。 4、根据你所制作的培养基，简述其制作过程。答：配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基制作过程是（1）按配方称量药品（2）量取定量的水加药品加热熔化（3）调节PH：（4）分装试管和三角瓶（5）双层纸和绳子包扎（6）高压蒸汽灭菌 5、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？答：配制培养基的成分中有大量各种微生物存在，培养基配制好后立即灭菌是杀死所有微生物。如果不立即灭菌微生物会马上利用培养基中的营养物质，从而使培养基失去其应有的营养特性。 6、为什么高压蒸汽灭菌比干热灭菌所需的时间短，温度低？答：（1）菌体内含水量越高凝固变性温度越低。（2）蒸汽冷凝会放出潜热。（3）饱和水蒸汽穿透力强。（4）湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定性，主要破坏氢键结构。  7、比较干热灭菌与高压蒸汽灭菌的异同。12 答：相同点都是利用高温达到杀死物体上所有微生物的方法。不同点是：（1）灭菌温度和时间不同干热灭菌温度是160~170℃，时间2小时；湿热灭菌温度121℃，时间20~30min。（2）灭菌用以提高温度的介质不同干热灭菌利用干热空气提高温度；湿热灭菌利用热蒸汽压力提高温度。（3）灭菌的对象不同玻璃、金属器皿等耐热的固体物质采用干热灭菌；湿热灭菌的适用范围广，除了玻璃、金属器皿等耐热的固体物质外，液体物质、培养基等都可以灭菌。 8、在微生物接种过程中，应如何确保无菌操作？答：（1）接种用的培养皿、试管、培养基等用具材料必须经过灭菌后使用。（2）有条件的可以在超净工作台或无菌间中操作。（3）必须在酒精灯火焰旁约1~1.5cm附近操作。（4）接种前将接种环（连同接种柄）在火焰上充分灭菌后再取菌。接种完毕接种环上的菌体要烧死方可放在桌面上。（5）试管塞不能放在桌面上，要拿在手里，接完后塞子在火焰上灭菌后才能塞回试管；培养皿的盖子不能完全打开，要侧开，以防空气中的杂菌进入。填空题1．G+细胞壁的主要成份是和。2．是原生动物抵抗不良环境的一种休眠体。3．根据物质成分不同，微生物的培养基可以分为、和等。4.微污染水源水的预处理工艺均采用处理，而不用处理。5.1956年，我国微生物学家等应用鸡胚卵黄囊接种法，在国际上首先成功地分离培养出，这种病原体可以引起人类沙眼，甚至引起结膜炎、角膜炎等临床症状。6.微生物的五大营养要素有、、、和。7.通常，大多数细菌、藻类的最适pH值的环境是，酵母菌和霉菌的最适pH值范围是。12