发给学生的微生物实验报告

广州大学实验报告学院土木学院专业、班级06给水排水班学号姓名课程名称水处理微生物学实验时间2008.12.1――2008.12.516 实验目录实验一显微镜的使用及微生物形态的观察实验----------------------------2实验二微型动物的计数实验--------------------------------------------5实验三细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察实验----------------------6实验四微生物的染色实验----------------------------------------------7实验五培养基的制备及灭菌实验----------------------------------------9实验六微生物纯种分离、培养及接种技术-------------------------------12实验七纯培养菌种的菌体、菌落形态观察实验---------------------------14实验八微生物的生理生化特征实验-------------------------------------1516 实验一显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的(1)学习普通光学显微镜的使用方法。(2)结合天然污水的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物形态，并学习测量微生物大小的方法。二、实验用具(1)生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。(2)显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。三、实验步骤(一)显微镜的结构和各部分的作用微生物检验常用的显微镜见图3—1—1、3—1—2，其构造分机械和光学两部分1．机械结构熟悉显微镜的镜筒、载物台、调节器的各部分结构，并操作使用。2．光学部分（1）接目镜。显微镜具有3个接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”符号，即使用时可放大5倍、10倍或16倍。观察微生物时常用16倍的接目镜。(2)接物镜。接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，放大倍数分别是4、10、40、100。(3)聚光器。聚光器在载物台的下面，用来聚合由光源聚合器射来的光线。聚光器可以上下调整，中央装有光阑，用以调节显微镜照明系统的数值孔径，它直接影响分辨率、对比度和焦深。（二）显微镜使用和保护的方法1．操作步骤(1）把电源开关按向“ON”一边，接通电源。(2)把标本放在载物台上，把10×物镜转入16 工作位置，对标本调焦。调焦旋钮往外旋为升，往内旋为降。微调焦钮每一转使载物台升(降)0，3mm。此调焦钮上的刻度分为每小格2／an。粗调焦钮每一转使载物台升(降)3．6mm。转动调焦钮时用力要均匀、缓慢，避免碰坏标本片。(3)将需用的物镜转入，再次对标本调焦。(4)调节聚光器的升降位置，达到所需要的照明状态。一般情况下，孔径光阑的直径调至物镜光瞳的70％—80％时，能获得适当对比度的良好图像。(5)调节亮度控制钮，改变输入电压以调正亮度。(6)调节聚光器孔径光阑。2．油镜的使用使用100×油物镜时，必须在镜头与标本之间涂上香柏油，浸油不能存有气泡，不然将使像质劣化。检查镜渍油中是否有气泡时，将目镜从镜筒取下，在镜筒中的光瞳孔观察。要消除气泡，可将物镜转换器稍稍来回转动几次，再加些油，或者换掉油，注意不要把转换器转得过远，以免其他物镜端面也沾上了油。擦去油时，要用擦镜纸或软布片，沾上二甲苯在透镜下面轻擦数次。用过的纸或布，不能再接触擦净的透镜。（三）活性污泥和生物膜的观察观察活性污泥与生物膜的结构及菌胶团的形状、形态特征和运动方式等。1.标本的制备(1)、活性污泥。①取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片的中央(如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀污泥一小滴加到载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀释后进行观察)。②小心地用洗净的盖玻片覆盖。这样，就制成了活性污泥的标本。注意：加盖玻片时应使其中央已接触到水滴后才放下，否则会在片内形成气泡，影响观察。(2)、生物膜。①从生物膜法的构筑物内刮取生物膜一小块，用蒸馏水稀释，制成供显微镜观察用的菌液。对于用石子作滤料的生物滤池，也可取石子一小块，置于冲洗干净的烧杯中，加蒸馏水少许和干净的玻璃珠，摇荡数分钟，使滤料上的生物膜脱落在水中，去掉滤料，再摇荡数分钟，做成菌液(如太浓、不易在显微镜下观察，可进行稀释)。②取菌液一小滴，置于洁净载玻片的中央，用洗净的盖玻片覆盖(注意不要有气泡)，以备显微镜观察之用。1.显微镜观察(1)、低倍镜观察。①、在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺1格的长度(单位以μm计)：②、观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、菌胶团等微生物的形态草图。选择一个原生动物，量出其尺寸：③记下观察所用接目镜和接物镜的放大倍数，算出显微镜的放大倍数。16 (2)高倍镜观察：①改用高倍镜观察，画出微生物的形态草图，并与用低倍镜所看到的比较，注意其不同点。②记下显微镜的放大倍数。四、实验结果：五、思考题(1)、使用显微镜时，哪些地方必须特别注意?(2)、使用低倍镜时，显微镜的放大倍数最小可达多少?使用高倍镜时显微镜的放大倍数是怎样呢?在什么时候才需要使用油镜?(3）、为什么目测微尺必须用物测微尺标定?在某一放大倍数下，标定了目测微尺，如果放大倍数改变，它还需重新标定吗?实验二水中微生物的观察实验一、实验目的16 观察天然污水或活性污泥法曝气池混合液中的微生物。二、实验用具(1)、天然污水或活性污泥法曝气池混合液，(2)、显微镜、小量筒、滴管、载玻片等，三、实验步骤①、取洗净的滴管1支(其每一滴水的体积应预先标定)，吸取天然污水或混合均匀的曝气池混合液或已稀释的混合液，滴1滴在载玻片的中央，以盖玻片(以方形为好)轻轻盖好水滴，要避免盖玻片内形成气泡。②、将标本放在显微镜低倍镜下计数。计数时，先将视野放在盖玻片的右上角(可根据各人的习惯，也可放在另一角)，然后移动玻片，视野即可随之从上而下、从右到左通过。当前一个视野数完，并作好记录后，再换第二个视野，如此往复将整个盖玻片下面的动物全部计数完毕。注意在调换视野时，不可使相邻的视野重叠或遗漏，然后换算成1mL混合液中的动物数。四、实验结果微生物名称每滴稀释液中的数量每ml混合液中的数量状态描述实验三细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察实验一、实验目的16 (1)、进一步掌握显微镜的使用方法。(2)、观察几个典型细菌的形态(示范片)。(3)、观察几个典型细菌的构造(示范片)。(4)、观察霉菌、酵母菌、放线菌的形态和构造，以便找出它们之间及细菌之间的区别点。二、实验用具(1)、显微镜、擦镜纸、镜油(香柏油)、二甲苯等。(2)、示范片。①、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、四联球菌、尿八联球菌、链球菌、球衣细菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等。②、枯草杆菌芽孢、假单孢杆菌鞭毛、固氮菌荚膜等。③、酵母菌、霉菌、放线菌三、实验步骤(1)、复习显微镜的使用方法，重点放在油镜的使用部分。(2)、严格按照显微镜的使用方法，依次逐个观察细菌的形态、构造及酵母菌、霉菌、放线菌的形态，分别绘出其形态、构造图。四、实验结果（观察细菌形态构造图）实验四微生物的染色实验一、实验目的16 学习微生物涂片染色的操作技术，掌握微生物的普通染色法(单染色法)和革兰氏染色法。二、实验用具(1)、菌种。(2)、显微镜、载玻片、接种环、酒精灯等。(3)、染料，a、单染色染色剂:①美蓝染色液，②石炭酸品红染色液。b、革兰氏染色剂:①草酸铵结晶紫染色液，②碘液，③沙黄染色液。三、操作步骤1．单染色(1)、涂片：在洁净的载玻片上先作一记号，以免弄错正反面，在其中央滴1滴无菌水或生理盐水(0．85％NaCl)，用烧灼冷却过的接种环取少量菌体至玻片水滴中，和匀后涂成薄片，涂片面积不宜过大。对于活性污泥，可用滴管取其1滴，置于玻片上铺成一薄层即可。(2)、干燥：在空气中自然干燥，使菌体的位置不再移动(也可将玻片置酒精灯火焰高处稍稍加热以干燥之，涂抹面应向上)。(3)、固定：于酒精灯火焰中通过3—4次(以玻片与手接触面感到稍微烫手为度)，使菌体固定于玻片上而不易脱落。固定也可使标本容易着色。(4)、染色：放标本于水平位置，在上面滴加美蓝或石炭酸品红染色液，染色时间的长短，随不同染色液而定(美蓝约染3-5min，石炭酸品红约染1—2min)。(5)、水洗：染色达到需要的时间后，倾去染色液，并以水冲洗，至冲下的水无色时为止。注意使水柱由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。(6)、吸干：在空气中自然干燥，或用吸水纸吸干后，用油镜观察。2．革兰氏染色(1)、将实验所供菌种按单染色法作涂片、干燥并固定。(2)、在涂面上，加草酸铵结晶紫染色液1滴约Imin后，水洗。(3)、加碘液lmin后，水洗。(4)、斜置载玻片于一烧杯之上，滴加95％酒精脱色。并轻轻摇动玻片，至流出的酒精不现紫色时立即停止滴加(约滴加0．5-lmin)，随即水洗。为了节约酒精，也可将酒精滴至涂片上，静置0．5-lmin后水洗。酒精脱色程度必须严加掌握。如脱色过度，则阳性菌会被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌将被误染为阳性菌。(5)、加沙黄复染液0．5min，水洗。(6)、吸干，置于油镜下观察，阳性者为紫色，阴性者为红色。四、实验结果观察到的微生物有：单染色，复染色，草图如下：染色方法菌体类型颜色（分析）菌体草图16 五、思考题(1)、微生物的染色原理是什么?(2)、用单染法染色后看到的微生物是什么颜色?什么形状?画出所观察到的微生物的草图。(3)、用革兰氏染色法染色后看到的细菌是什么颜色，属于革兰氏阴性还是阳性?(4)、革兰氏染色法中若只做(1)—(4)的步骤而不用沙黄复染液复染，是否能分出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，为什么?(5)、微生物经固定后，是死了呢还是仍活着?实验五培养基的制备及灭菌实验一、实验目的16 (1)、学会玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。(2)、掌握培养基配制和无菌水制备的方法。(3)、学会高压蒸汽灭菌技术。二、实验用具(1)、培养皿(又称平皿，直径90mm)、试管、吸管、锥形瓶、烧杯等。(2)、纱布、棉花、报纸。三、实验内容(一)、玻璃器皿的洗刷与包装1．洗刷：玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。培养皿、试管、锥形瓶等可先用去污粉或洗洁精洗刷，然后用自来水冲洗。吸管则先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿应放在烘箱中烘于。2．包装(1)、培养皿由一底一盖组成1套，按实验所需的套数一起用牛皮纸包装。(2)、吸管应在吸端用铁丝塞人少许棉花，构成1-1.5cm长的棉塞，以避免吸尔球中细菌吸入管内。(3)、试管和锥形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。(二)、培养基的制备1．营养琼脂培养基(1)、成分：蛋白胨log，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂10—20g，蒸馏水1000ml。(2)、制法1)、将上列成分混合后，煮沸至琼脂完全溶解。在加热过程中，应不断搅拌。2)、用蒸馏水补充因蒸发而损失的水量。3、)调整溶液的pH值为7.4—7.6。4、)乘热用纱布或脱脂棉过滤(最好用保温漏斗)，分装在锥形瓶中，250mL的锥形瓶，以装100mL左右为宜。瓶口以棉花塞住。5)、置高压蒸汽灭菌器中，以121℃(9.8MPa)灭菌20min，然后储存于冷暗处备用。2．乳糖蛋白胨培养基(用于“发酵法”大肠菌群检验)(1)、成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，氯化钠5g，1.6％溴甲酚紫乙醇溶液lmL，蒸馏水1000mL。(2)、制法1)、将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH值为7.2—7.4。2)、加入1．6％溴甲酚紫乙醇溶液lmL，充分混匀，分装于试管(内有倒管)中，每管装10mL。3)、置高压蒸汽灭菌器中，以115℃(6.9MPa)灭菌20min。4)、储存于冷暗处备用。3．浓乳糖蛋白胨培养基(用于“发酵法”大肠菌群检验)按上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制。分装于发酵瓶或试管(内有倒管)中。每个发酵瓶或大发酵管装50mL，每个试管装5mL。4．品红亚硫酸钠培养基16 (1)、成分：蛋白胨10g，酵母浸膏5g，牛肉膏5g，乳糖10g，琼脂20g，磷酸氢二钾3.5g，无水亚硫酸钠5g左右，5％碱性品红乙醇溶液20mL，蒸馏水1000mL。(2)、储备培养基的制备。1)、先将琼脂加至900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000mL，调整pH值为7.2—7.4。2)、趁热用脱脂棉或纱布过滤(最好用保温漏斗)，再加入乳糖，混匀后定量分装于锥形瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃(6．9MPa)灭菌20min，储存于冷暗处备用。(3)、平板的制备。1)、将上法制备的储备培养基加热融化。2)、根据锥形瓶内培养基的量，用无菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于无菌空试管中。3)、根据锥形瓶内培养基的量，按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于无菌空试管内，加无菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min以灭菌。4)、用无菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液中至深红色褪成淡粉红色为止。5)、将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加于已融化的储备培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)。6、)立即将此种培养基适量倾人已灭菌的培养皿内(90mm直径的培养皿约需培养基10～15mL)，待其冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存亦不宜超过2周。如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。(三)、无菌水的制备.在试管或瓶内先盛以适量的自来水(不用蒸馏水，管口或瓶口用塞子塞好，并用牛皮纸扎紧)，使其灭菌后，其水量恰为9mL(用管)或99mL(用瓶)。此种适量的水体积可在灭菌器内由实验求得。也可以先将管或瓶灭菌，再用灭菌的吸管(所谓无菌吸管)取灭菌的自来水9mL或99mL加入管或瓶中。无菌水常用来稀释水样。(四)、高压蒸汽灭菌上面所准备好的一切玻璃器皿、培养基等均需进行灭菌。本实验用高压蒸汽灭菌器灭菌，其操作和注意事项如下：(1)、加水至电加热圈1cm以上。(2)、把需要灭菌的器物放入灭菌器内，关严灭菌器盖，勿使漏气。(3)、打开出气口。(4)、接通电源。(5)、器内水沸腾以后，蒸汽逐渐驱除器内原有的冷空气。当指针指到读数100℃时，关闭出气口。这一点应特别注意，因为如果冷空气没有排尽，器内虽然达到了一定的压力，但达不到所需的温度。16 (6)、关闭出气口后，器内蒸汽将不断增多，压力和温度随着升高。当蒸汽压达到所需的压力时，即为灭菌开始时间。灭菌时间的长短由灭菌物品决定。玻璃器皿、无菌水、营养脂培养基可用高压蒸汽灭菌器已定的13.7MPa(125℃)的压力灭菌20imn(高压蒸汽灭菌器到13.7MPa时自动放气减压)。含糖的培养基用6.9MPa(115℃)的压力灭菌20min(高压蒸汽灭菌器到6.9MPa时人工放气减压)。(7)、灭菌时间到达后，切断电源。(8)、待压力计指针降到“0”时，打开出气口。如过早打开，管内和瓶内的培养基会因压力骤降，而温度并不同时很快下降，以致培养基翻腾，沾污棉塞。(9)、揭开器盖，取出灭菌的物品，将器内剩余的水放掉。(10)、待已灭菌的物品冷却后，置阴凉处。四、实验结果1、制备出实验所需的培养基2、制备实验所需的无菌水3、对相关器具灭菌五、思考题（1）、培养基是根据什么原理配制的?营养琼脂培养基中的成分各起什么作用?（2）为什么湿热灭菌比干热灭菌优越?实验六微生物纯种分离、培养及接种技术一、实验目的16 1、学习微生物纯种分离的方法：稀释平板法和平板划线法。2、学习微生物的分离、培养及接种技术。3、学习饮用水细菌总数的测定方法。二、实验用具(1)、无菌培养皿(直径90mm)、无菌移液管、无菌广口瓶等。(2)、营养琼脂培养基、品红亚硫酸钠培养基(已灭菌的)。(3)、接种环(针)、酒精灯、恒温培养箱等。以上器材，除接种环(针)、恒温培养箱等外，均在实验五中准备好。二、实验步骤(一)．释稀平板分离（测定饮用水中细菌总数）1、取样：用酒精棉消毒取水口，放出管中存水，用无菌广口瓶渠水样。2、接种：用无菌移液管吸1ml水样放入培养皿，倒入冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，并与水样混匀，将培养皿倒置培养箱37℃培养。(二)、平板划线分离（大肠杆菌分离培养）1)、左手持培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀起一些，右手持接种环灭菌，沾取前一天乳糖发酵的大肠杆菌菌液，在品红亚硫酸钠培养基表面上轻轻划线(千万不要戳破培养基平板)。可作平行划线、扇形划线，或其他连续划线。将培养皿倒置培养箱37℃培养。(2)、将用过后的接种环烧灼灭菌。四、实验结果五、思考题(1)、分离活性污泥为什么要稀释水样?你考虑怎样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养?(2)、用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从哪一个浓度开始?为什么?实验七纯培养菌种的菌体、菌落形态观察实验一、实验目的1、观察实验六培养出的细菌和大肠杆菌菌落形态、菌落特征。16 2、通过革兰氏染色或单染色，观察细菌和大肠杆菌菌体形态。二、实验用具(1)、显微镜、载玻片、接种环、酒精灯等。(2)、革兰氏染色液全套，单染色液。三、实验步骤(1)、菌落形态、特征的观察。由于微生物个体的表面结构、分裂方式、运动能力、生理特性以及产生色素的能力等各不相同，因而个体在固体培养基上的情况各有特点。按照微生物在固体培养基上形成的菌落的特征，可粗略地辨别是何种类型的微生物。(3)、微生物个体形态观察：在观察了已培养好的各种微生物菌落形态以后，用革兰氏染色法或单染色法染色，用显微镜油镜观察细菌和大肠杆菌菌体形态，并绘制形态图。四、实验结果：五、思考题1、细菌和大肠杆菌菌落形态和个体形态是怎样的?革兰氏染色呈什么反应?菌落形态染色方法菌体形态革兰氏阴（阳）实验八微生物的生理生化特征实验一、实验目的1、通过大肠杆菌群的培养，了解微生物的生理生化特性。16 2、测定饮用水和天然污水中的大肠杆菌数。3、测定饮用水中的细菌数目。二、实验用具水样瓶、吸管、试管、锥形瓶等、稀释瓶、培养皿(平皿)、发酵管和发酵瓶、接种环、细菌滤器、滤膜、高压蒸汽灭菌器、恒温箱(培养箱)、电冰箱、显微镜、镜油(香柏油)、二甲苯、擦镜纸等。三、实验步骤(一)、大肠菌群的检验1．发酵法发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖类而产酸产气等特征来进行检验的。(1)、生活饮用水。按下列3个步骤进行检验：1)、初步发酵试验。在2个各装有已灭菌的50mL浓乳糖蛋白胨培养基的发酵瓶(内有倒管)中，以无菌操作各加入水样lOOmL；在10支装有已灭菌的5mL浓乳糖蛋白胨培养基的试管(内有倒管)中，以无菌操作各加入水样lOmL。混匀后置于37℃恒温箱中培养24h。观察其产气产酸的情况。①、如无气体和酸产生，则为阴性反应，表示无大肠菌群存在。②、如有气体和酸产生，或虽无气体产生，但有酸形成，则为阳性反应，表示此水可能为粪便污染，需作进一步的检验。③、如有气体形成，但没有产酸，溶液也不浑浊，则表示操作技术上有问题，须重作检验。2)、平板分离。按实验6操作。结果如下：①、如无细菌增殖现象，可认为是阴性反应，无大肠菌群存在。②、如仅发现芒状、霉状或其他无关菌属的菌落，则表示无粪便性的污染。③、如发现有下列特征的菌落，则应取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。如涂片中没有革兰氏阴性的杆菌，则表示无大肠菌群存在；如涂片中有革兰氏阴性无芽孢的杆菌时，则进行复发酵试验。品红亚硫酸钠培养基上的菌落：①、紫红色，具有金属光泽的菌落。②、深红色，不带或略带金属光泽的菌落。③、淡红，中心色较深的菌落。④、透明菌落。3)、复发酵试验。用无菌接种环挑取上述涂片镜检显示革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的另一部分接种于已灭菌的装有lOmL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的试管(内有倒管)中，每管可接种分离自同一初发酵管或发酵瓶的最典型的菌落1—3个，然后置于37℃16 恒温箱中培养24h，有产酸产气者(不论倒管内气体多少皆作为产气论)，即证实大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管数或瓶数，查P表，报告每升水样中的大肠菌群数。(2)、水源水。1)、将水样作1：10稀释。稀释的方法：在用来稀释的试管(稀释管)内先盛以适量的自来水，使其灭菌后，其水量恰为9mL。此种适量的水体积可在灭菌器内由实验求得。2)、于各装有5mL3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基的5个试管中(内有倒管)，各加入lOmL水样；于各装有lOmL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的5个试管中(内有倒管)，各加入lmL水样；于各装有lOmL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的5个试管中(内有倒管)，各加入1mL1：10稀释水样，共计15管、3个稀释度。以后的检验步骤同上述生活饮用水的检验方法。(3)、根据证实有大肠菌群存在的阳性管数查P表报告每升水样中的大肠菌群数：(二)、生活饮用水细菌总数的测定1、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml。充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应作一平行接种，同时另用——个乎皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。2、待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数：3、菌落计数及报告方法：作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。四、实验结果四、思考题1、测定大肠菌群数说明什么问题?为什么要用大肠菌群作检验指标?2、测定细菌总数说明些什么?3、为什么乳糖蛋白胨培养基用6．9MPa灭菌20min，而不用13．7MPa220min4、作了细菌检验，为什么自来水厂还要经常进行余氯的测定?5、根据我国饮用水水质标准，讨论本次检验的结果?6、培养大肠杆菌时，试管中的导管起什么作用?培养液经过37。C24h培养后变色，说明什么问题?16