微生物与血库作业指导书

ABCD人民医院检验科程序文件文件编号：版本/修订号：A/0主题内容关于发布《程序文件》的声明生效日期：20060808第二页共46页微生物与血库作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-01~10ABCD-3-WS-01~05第A版编制：审核：批准：生效日期：2006年8月8日ABCD人民医院检验科 ABCD人民医院检验科微生物与血库作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20060808第2页共41页目录序号主题内容代号页号微生物室作业指导书部分1结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定ABCD-3-WS-0142涂片找抗酸杆菌操作规程ABCD-3-WS-0263普通细菌培养鉴定操作规程ABCD-3-WS-0384尿液培养操作规程ABCD-3-WS-04105血液培养操作规程ABCD-3-WS-05126黑马Bact-ist微生物分析系统操作维护规程ABCD-3-WS-06147GNP-9270型隔水式恒温培养箱操作维护规程ABCD-3-WS-07188BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程ABCD-3-WS-08199BSC-1100ⅡB2型生物安全柜操作维护规程ABCD-3-WS-092410飞鸽牌离心机操作维护规程ABCD-3-WS-1028血库作业指导书部分1血库工作制度ABCD-3-XK-01302交叉配血（凝聚胺法）ABCD-3-XK-02313ABO血型鉴定（生理盐水法）ABCD-3-MY-03334ABO正定型和Rh血型鉴定ABCD-3-MY-04385KJX-IA型冰冻血浆解冻箱ABCD-3-MY-0541 ABCD人民医院检验科微生物与血库作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容修订页生效日期：20060808第3页共41页修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-01版本/修订号：A/0主题内容结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定生效日期：20060808第5页共41页结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2原理若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。3标本要求（1）标本类型：深部痰液。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。4容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。5试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。（2）试剂生产厂家：美国BD生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂6仪器设备：BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪；美国BD生物技术有限公司。酒精灯显微镜、超净工作台、台式离心机7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤见仪器操作维护规程：BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程；9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-01版本/修订号：A/0主题内容结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定生效日期：20060808第5页共41页10生物参考区间阴性11患者检验结果的可报告区间阴性/阳性，药敏及菌种鉴定见BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程；12临床意义：分支杆菌的药敏试验有助于筛选有效的抗结核药物，提示药物所需的治疗剂量，供临床医生和防痨医生参考；同时，还可了解耐药株的流行情况，为抗结核药物的合理应用提供试验依据。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-02版本/修订号：A/0主题内容涂片找抗酸杆菌操作规程生效日期：20060808第7页共41页涂片找抗酸杆菌操作规程（改良碱性复红法）1检验目的检验样本中是否含有抗酸杆菌，为临床提供诊断依据。2原理结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。3标本要求（1）标本类型：病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等（2）标本采集：见标本采集手册（一般须得深咳痰，其它无特殊要求。）（3）标本储存和运输：可室温保存、室温运送。病人标本须密封运送以避免污染环境。4容器和添加剂类型痰盒、尿杯、试管等6试剂（1）试剂名称：结核菌染色液（2）试剂生产厂家：广东省结核病研究所统一配制（3）包装规格：3X500ML（4）试剂盒组成：试剂1：石碳酸复红液试剂2：酸性酒精溶液试剂3：亚甲基蓝溶液7仪器设备：CHKIKO320奥林巴斯双目显微镜BH-2奥林巴斯落射荧光显微镜8校准程序送XX市计量质量检测研究所校准 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-02版本/修订号：A/0主题内容涂片找抗酸杆菌操作规程生效日期：20060808第7页共41页9操作步骤⑴涂片经火焰固定，加石碳酸复红液染色5分钟或更久（需加温）。⑵水洗（之后尽可能将水沥干）。⑶加酸性酒精溶液，脱色1-2分钟。⑷水洗（假如标本面还可以看到残存红色时，再加酸性酒精溶液脱掉红色为止）。⑸加亚甲基蓝溶液染色30秒，水洗，干燥。(6)镜检。10质量控制：参加我科质量管理组的质量控制活动。11干扰和交叉反应麻风菌可能对检验结果产生影响。12生物参考区间涂片未见抗酸杆菌13患者检验结果的可报告区间涂片未见抗酸杆菌/涂片见细长、红色抗酸杆菌14临床意义：结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，其毒力主要是在机体中细胞内、外生长与大量繁殖的能力，细菌成分与其代谢产物引起免疫反应（Ⅳ型）导致一系列组织学上的意义。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-03版本/修订号：A/0主题内容普通细菌培养鉴定操作规程生效日期：20060808第9页共41页普通细菌培养鉴定操作规程1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2原理人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的，如检出细菌则视为致病菌。并排除采样及操作污染。3标本要求（1）标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。人泌尿生殖道标本如白带前列腺液等需临床标本接种于巧克力平板或特殊的运送培养基并置保温设备中送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。4容器和添加剂类型均使用灭菌器皿盛放标本5试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等（2）试剂生产厂家：珠海黑马生物技术有限公司6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统。（3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-03版本/修订号：A/0主题内容普通细菌培养鉴定操作规程生效日期：20060808第9页共41页（1）血液、骨髓、脑脊液等标本按照培养目的增菌培养12-18小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。（2）接种：以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35℃培养过夜，观察结果。（3）涂片：肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色；（4）纯培养：根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。（5）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见BACT-IST黑马微生物鉴定系统10质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11生物参考区间血液，骨髓，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长；其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。12患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属；菌群调查报告比例。13临床意义：为医生提供病原学诊断，并为进一步药敏实验提供依据。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-04版本/修订号：A/0主题内容尿液培养操作规程生效日期：20060808第11页共41页尿液培养操作规程1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。患有泌尿系感染时，尿中的细菌数高于104/mL，以此作为诊断泌尿系感染依据。2原理使用BACT-IST黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。3标本要求（1）标本类型：中段尿液。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。4容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。5试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等（2）试剂生产厂家：珠海黑马生物技术有限公司（3）包装规格：4X500Ml（4）试剂盒组成：试剂1：龙胆紫液试剂2：碘溶液试剂3：脱色液试剂4：沙黄溶液6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统（3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-04版本/修订号：A/0主题内容尿液培养操作规程生效日期：20060808第11页共41页（1）细菌的分离培养：用接种环取1uL标本接种于血平板及麦康凯琼脂培养基，35℃培养过夜，观察结果。菌落生长者做菌落计数，并挑取优势菌菌落做纯培养。（若初次分离菌落单一且生长较多时可直接做鉴定）（2）涂片：取菌落涂片做革兰氏染色，确认时G+或G-以及是球菌还是杆菌（球杆菌）。（3）细菌鉴定及药敏实验:革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验（必要时做动力试验），氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板；氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板；革兰氏阳性球菌（主要是成簇或四联排列），触酶试验阳性者接种葡萄球菌、微球菌鉴定/药敏测试板；触酶试验阴性者则接种链球菌鉴定/药敏测试板；革兰氏阴性双球菌，氧化酶试验阳性者使用淋球菌鉴定/药敏试剂盒测试。（4）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，见BACT-IST黑马微生物鉴定系统、PHOENX100全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规程。9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10生物参考区间正常人体膀胱中尿液无菌。11患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属，菌落计数高于104/mL。12临床意义：为医生提供泌尿系感染的病原学诊断。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-05版本/修订号：A/0主题内容血液培养操作规程生效日期：20060808第13页共41页血液培养操作规程1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2原理使用BACT-IST黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。3标本要求（1）标本类型：血液（2）标本采集：给患者用抗生素前抽取。见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。4容器和添加剂类型使用灭菌器皿或鉴定仪配备的血培养瓶盛放标本，不加任何防腐剂，抗凝剂。5试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等（2）试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司（3）包装规格：4X250Ml（4）试剂盒组成：试剂1：龙胆紫液试剂2：碘溶液试剂3：脱色液试剂4：沙黄溶液6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统（3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤（1）细菌的分离培养：血培养瓶经12-18小时35℃孵育后，肉眼若见生长则转种血平板及麦康凯琼脂培养基，35℃培养过夜，观察结果。菌落生长者挑取优势菌菌落做纯培养。（若初次分离菌落单一且生长较多时可直接做鉴定） ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-05版本/修订号：A/0主题内容血液培养操作规程生效日期：20060808第13页共41页（2）涂片：取菌落涂片做革兰氏染色，确认时G+或G-以及是球菌还是杆菌（球杆菌）。（3）细菌鉴定及药敏实验:革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验（必要时做动力试验），氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板；氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板；革兰氏阳性球菌（主要是成簇或四联排列），触酶试验阳性者接种葡萄球菌、微球菌鉴定/药敏测试板；触酶试验阴性者则接种链球菌鉴定/药敏测试板。（4）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，见BACT-IST黑马微生物鉴定系统、PHOENX100全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规程。9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11生物参考区间正常人体血液无菌。12患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属，同时报告药物敏感试验结果。13临床意义：为医生提供感染的病原学诊断。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-06版本/修订号：A/0主题内容微生物分析系统操作维护规程生效日期：20060808第17页共41页黑马Bact-ist微生物分析系统操作维护规程1主要技术指标Bact-IST微生物鉴定／药敏分析系统融合了自动化、电脑化及微生物微量生化反应测试方法，可同时进行微生物分析鉴定（ID）与药敏（MIC）检测，使细菌鉴定／药敏分析规范化、标准化、现代化。1.1完善的分析系统：微生物鉴定分析系统，微生物药敏分析系统统计分析／院内感染监测专家系统联网功能1.2药物种类：呋喃类，磺胺类，喹诺酮类，青霉素类大环内酯类，氨基糖甙类，头孢菌素类 1.2鉴定范围：肠杆菌科，非发酵菌，葡萄球菌属，真菌，微球菌属，链球菌属，肠球菌属，弧菌属 1.3院内感染检测环境空气，物体表面，医疗用品，消毒剂及保存液，血液透析2适用范围黑马Bact-ist微生物分析系统(包括微生物鉴定和药敏分析两大功能)；是对己分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物敏感/耐药程度的专用设备。3工作原理 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-06版本/修订号：A/0主题内容微生物分析系统操作维护规程生效日期：20060808第17页共41页自1880年郭霍(Koch)发明固体培养基，对细菌的研究技术有了重大的突破之后，一个多世纪以来，人类对细菌的研究和认识已经得到了极大的成就，对细菌分类的理论根据和方法已趋成熟，命名已经统一，对繁浩的各种细菌众多的生物学、物理学特性己基本明确，从20世纪初开始，形成了利用各种细菌之间生物学、物理学特性的差异或不同，来区别和鉴定细菌种类的方法，不断丰富发展，沿用至今，成为细菌鉴定的常规方法。但由于细菌种类繁多，生物学性状错综复杂，实验操作繁琐、费时，不仅初学者不易掌握，有经验者也常感困惑。20世纪70年代，由于电子计算机的发展，有人首先利用信息编码来签定细菌，将复杂的各种细菌的生物学性状建立数据库，被检菌的各种生物性状测出后，输入电脑与贮存信息相比较即刻可判断未知菌的种属。八十年代初己设计出各种多项生物学试验的套装组合，与电脑贮存的项目内容相对应，即细菌的编码鉴定法，很快在全球得到了重视，迅速推广应用。随后，在上述编码鉴定的基础上，又开发研究了各种类型的半自动和全自动的细菌鉴定药敏分析仪器。黑马微生物鉴定/药敏分析系统，与国际上的其他同类仪器一样，都是按照上述的原则和技术基础而设计和投产的，设计时，细菌的分类、命名、各种细菌的生物学特性和鉴定依据，各项鉴定试验，特别是“关键性试验”的方法和标准，抗生素药物与浓度的选择和敏感度判断标准等，全部按卫生部印发的《全国临床检验操作规程第二版》、《NCCLS药敏试验法规(2001)》等权威性文献执行，这些文献己与国际接轨，因此，它和国外同类产品的性质和功能基本上是一致的。4试剂采用珠海黑马原配试剂5操作步骤与功能特点黑马微生物自动鉴定／药敏分析系统分为“半自动”和“自动”两种，半自动系统由电脑软件和测试板两部分组成：自动系统是在半自动的基础上再加自动判断装置。使用半自动系统时，先将被测菌制成菌液加注到测试板微孔内，经孵育后，将板上的各项测试结果(阳性或阴性)输入电脑软件的相应界面，便可即刻判定被测菌的种、属名称及其对各种抗菌药物的敏感度，同时生成和打印一份完整的报告。如使用自动系统，则将孵育后的测试板插入自动判读槽内，由仪器自动读取各项试验结果，从而省却人工判读和输入的手续。黑马微生物鉴定/药敏分析系统具有以下几种功能和特点:1、细菌鉴定功能：可以将与医学和人类有关的绝大部分细菌及真菌鉴定到“种”及“亚种”水平，这些细菌包括：肠杆菌科中的20个菌属、非发酵菌中的8个菌属、弧菌科中的3个菌属、奈瑟菌科中的2个菌属、微球菌科的3个菌属以及酵母样真菌中的6个菌属，合计近200种细菌(或真菌)。另外，还有性传播疾病(STD)的鉴定／药敏分析系统。2、抗生素敏感度分析功能：可以根据被检细菌在不同浓度的各种药物中生长状态，分析判断其对各种抗菌药物的敏感／耐药程度，测定的结果以MIC(最小抑菌浓度)表示，并根据所测的MIC，按国际的统一规定(NCCLS)给出S(敏感)、MS(中度敏感)和R(耐药)的判断，还可提示被测菌是否存在β-内酰胺酶、超广谱β ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-06版本/修订号：A/0主题内容微生物分析系统操作维护规程生效日期：20060808第17页共41页-内酰胺酶和耐甲氧西林的状况。同时，还按NCCLS文件提供每种细菌的选药原则和方法，用户也可以用纸片法或稀释法自行测试，将结果（抑菌圈直径或MIC）输入后，软件可按NCCLS的标准判断其敏感度并打印报告。本软件还设置了比较完善的“专家系统”，对测试结果进行分析审核和解释。对药敏结果出现的“异常表型”、药物选择和报告中的不合理现象、以及检验者如何正确操作、临床医师用药时要注意的问题等给予提示。同时根据提高疗效、防止滥用的原则，还设置了药敏结果的选择性报告功能。这些对保证药敏结果的可靠性、科学性，对提高药敏试验的“含金量”，以及对临床用药的指导作用，防止滥用、扼制耐药菌株的蔓延等，均有着重要意义。3、对不合理、可信度低的鉴定试验结果具有提示功能，提出重复试验或加做某顶试验的建议。4、院内感染和医院环境细菌学监测的分析功能：按照卫生部规定的关于院内感染6种监测而设计，只要将被检病区(或科室)及其生长的菌落数输入后，即可自动生成和打印报告。提示被检单位的菌落总数，国家规定的标准数，并同时给予“及格”或“不及格”的判定。该系统还有完善的院内感染监测的统计分忻系统，可定期将各科室的监测结果统计分析后，向上级主管部门汇报或供院内感染委员会研究。六种监测是：环境空气的细菌学监测、物体表面的细菌学监测、医务人员手的细菌监测、医疗用品的细菌学监测、使用中的消毒剂及无菌器械保存液的细菌学监测、血透室及透析液的细菌学监测。5、贮存、查询和联网功能：所有的检验结果资料全部可以长期贮存，随时可以查询回放，已有联网的医院，可以和全院联网，更为方便。6、统计分析功能：统计分析项目全面，且与WHO推荐的WHONET5软件接轨，具体项目有：不同标本细菌检出率的统计分析不同标本中细菌检出百分比率的统计分析不同病区(病房)细菌发生率的统计分析不同病区(病房)细菌发生率的月趋势分析不同菌种的月份比率趋势分析不同月份不同细菌百分比的统计分析各种细菌对各种抗菌药物的耐药性分析各细菌同型生化反应谱的统计分析耐甲氧西林/β-内酰胺酶葡萄球菌统计分析超广谱β-内酰胺酶统计分析工作量及经济收入统计 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-06版本/修订号：A/0主题内容微生物分析系统操作维护规程生效日期：20060808第17页共41页7、手工试验结果输入功能：某些特殊种类的细菌需要用传统的手工试验得以鉴定，或特殊的抗菌药物需要用手工法或纸片法作敏感度测定，也可利用此功能输入结果，生成和打印报告，同时存储资料，参与统计分析。8注意事项1、学习和掌握医学微生物学的专业知识，熟练微生物检验技术。2、使用仪器和各种测试板之前，仔细阅读《操作说明书》和《用户手册》。3、建立严格的无菌操作制度，操作时避免杂菌污染检测板，严防致病性的被测菌染及自身和周围环境。4、分离培养技术过关，严禁将两种或两种以上的细菌混在一齐检测。5、做好细菌的涂片染色、镜检观察、形态及动力观察、氧化酶、凝固酶等板外操作。6、遇有比较疑难或有问题的菌株，不应轻易放过，应保留菌种作进一步试验观察，把问题搞清。9仪器维护(1)严格按照仪器的关机程序关机。(2)仪器不使用时请罩防尘罩。(3)注意检查仪器的运行情况，并填写《仪器使用登记表》。10期间核查由XX市计量质量检测研究所执行11相关记录(1)仪器使用登记表 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-07版本/修订号：A/0主题内容隔水式恒温培养箱操作维护规程生效日期：20060808第18页共41页GNP-9270型隔水式恒温培养箱操作维护规程1仪器原理和适用范围1.1采用电热器加热、精制双金属片热控温度原理。具有钢板外壳和内箱，中填玻璃棉隔热等设计特点。1.2适用于中小实验室作干燥、恒温培养等工作。1.3仪器工作条件——电源220V；50Hz；5A；400W功率；接地良好、桌面稳定；1.4环境条件——防震、通风。2技术参数2.1温度调节范围室温加3℃～60℃；2.2温度波动范围±1℃、温度均匀性±1℃；2.3最大容量为420×420×500mm3；3操作步骤3.1接通电源，调节温度旋钮至工作所需温度，观察温度计是否达到，多次微调后定位3.2搁置工作物后关上箱盖，直到需取用时拿出；3.3放长假不工作前，应拔出电源插头，确保安全。4注意事项4.1为确保培养目的实现，外插温度计应为合格品，并随时观察温度是否正确；4.2为确保仪器内钢制金属内壳与搁板不受腐蚀，酸碱试剂不得置于箱内；4.3箱壳必须有效接地,若有电感，应立即切断电源,检查排除故障；5仪器维护5.1日常维护——保持机外清洁，每月用消毒液清洗机内，经常注意温度变动；5.2定期、期间核查按《仪器设备管理程序》进行,定期每年一次、其间1～2次，主要了解温度恒定、钢制内壳和搁板锈蚀状况等。6相关记录《仪器使用登记表》 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20060808第23页共41页BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程1技术参数物理参数高53inches(134.62cm)宽36inches(91.84cm)深28inches(71.12cm)周边应留空间左，后，右12inches(30.48cm)前48inches(121.9cm)重量（没有测试管）754lbs.(342kg)重量（有测试管）794lbs.(360.2kg)电气要求输入电压100–120或200–240VAC输入电流最大10.0Amp输入频率50or60Hz±3Hz散热4000BTU/hr功耗2000Watts环境要求非操作状态温度-17.8°C--65.0°C(0°F–149°F)湿度30%-80%RH,non-condensing操作状态 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20060808第23页共41页温度24°C-28°C(66.2°F–86°F)湿度30%-80%RH,non-condensing定位水平放置，避免阳光直射，避免发热装置海拔高度海拔0--4,000M2适用范围适用于该仪器操作手册所列的分支杆菌的培养鉴定和药敏。3工作原理若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。4试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。（2）试剂生产厂家：美国BD生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂5操作步骤（1）标本的采集和处理：吸1ml的痰液加1：1的4%的氢氧化钠消化15分钟，取消化液离心10分钟。弃去上清液，加入PH6.8的无菌PBS液5ml，温和混匀。再离心，弃去上清液，加入无菌PBS液1ml充分混匀。（2）胃液、脑脊液、骨膜液、胸膜液和膀胱穿刺尿等标本要先去污染处理。（3）在MGIT管标签上直接标记，在无菌条件下用滴管加入0.5mlMGITOADC营养添加剂；在无菌条件下加入0.1mlMGITPANTA抗菌素混合溶液。（4）加入0.5ml处理好的标本（注意：标本量超过0.5ml会增加污染机会）。（5）旋紧管盖、适当混匀。（6）将MGIT培养管置入BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育培养。（7）BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。（8）阳性标本进行涂片，确认为分枝杆菌进行药敏试验后发出报告。样品要求：（1）标本类型：深部痰液。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20060808第23页共41页（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。6药敏试验（1）试剂及试剂制备：MGITASTSIRE药敏试剂盒为冻干试剂，2～8℃保存，溶解后可-70℃保存6个月。建议溶解后立即使用。SM160ugINH20ugRFP200ugEMB700ug试剂制备方法：分别在每一抗菌素试剂瓶内加入4ml灭菌蒸馏水或去离子水后混匀，得到以下各试剂浓度。SM40ug/mlINH5ug/mlRFP50ug/mlEMB175g/ml（2）阳性管MGIT管的制备：MGIT阳性管1～3d的阳性培养物。如阳性管超过4d阳性的培养物，则需立即振荡MGIT管10s后，取1ml均匀培养物用4ml生理盐水稀释（1：5稀释）转种。（3阳性对照管的制备：①取未接种的MGIT培养管并除去管内肉汤。②将该空培养管标记为阳性对照管并标记配置日期。③配置0.4％亚硫酸钠（0.4g亚硫酸钠溶于100ml无菌蒸馏水或去离子水中）。④将5ml亚硫酸钠溶液加入管内，将盖旋紧。使用前至少应在室温放置1h。⑤阳性对照管能多次使用（4）药敏操作步骤：①将MGIT管分别标记生长对照（GC）,SM、INH、RFP、EMB等。②每管中分别加入0.5mlMGITOADC营养添加剂。③每管中分别加入对应量的已稀释的S、H、R、E，至终浓度为表1所示。表1抗生素终浓度抗生素名称终浓度 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20060808第23页共41页SMINHRFPEMB0.8ug/ml0.1ug/ml1.0ug/ml3.5g/m④分别在5管中加入0.5ml1：5稀释的阳性培养菌液。⑤BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育。⑥取0.1ml1：5稀释的阳性培养菌液接种一血平板，装入一塑料袋中于35～37℃孵育。⑦48h后检查该平血平板是否有其它杂菌生长。⑧如血平板未见有杂菌生长则可以读取BACTECMGIT960结果。⑨如血平板有杂菌生长则需重复实验步骤。（5）判读MGIT管①MGITGC生长对照管和阳性对照管为阳性，阴性管为阴性。②当GC生长对照管为阳性时则开始判读药敏管，并且连续判读后续2d的结果。③耐药：药敏管和GC管在同一天被判读仪判读为结果阳性，或比GC管晚1～2d。④敏感：药敏管在GC出现阳性后2d内仍未见生长则为敏感。7MTC与MOTT鉴定法（1）凡制备作分支杆菌药敏实验的实验室均需进行分支杆菌菌种鉴定。①PNB培养基：PNB用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀释后加入BBLMGIT分支杆菌生长指示管中，使最终浓度为0.5mg/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。②TCH培养基：TCH5mg溶于10ml无菌蒸馏水，取80ul加入BBLMGIT分支杆菌生长指示培养管中，使最终浓度为5ug/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。③接种方法：与药敏试验相同，且与药敏试验同步进行。（2）结果与报告见表2表2：分支杆菌菌种初步鉴定PNBTCH牛分支杆菌-人型结核分支杆菌-MOTT-++ ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20060808第23页共41页+8注意事项环境要求：BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪，应安放在稳固工作台上，保持通风，避免震动，避免阳光直射，避免灰尘，避免无线电波干扰，电源条件应满足117/220/240VAC±10%；50/60HZ。检测室温范围为20—30℃，相对湿度为30—50%。9仪器维护(1)严格按照仪器的关机程序关机。(2)仪器不使用时请罩防尘罩。(3)注意检查仪器的运行情况，并填写《仪器使用登记表》。10期间核查由XX市计量质量检测研究所执行11相关记录(1)仪器使用登记表 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-09版本/修订号：A/0主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期：20060808第27页共41页BSC-1100ⅡB2型生物安全柜操作维护规程1技术参数参数数值人员安全性≤4个产品安全性≤4个交叉感染≤2个平均送风风速≥0.3-0.5m∕S吸入口风速＞0.6m∕S无故障工作时间≥8000小时终端风机风量()1500m3电源AC220V50HZ洁净度等级100级振动幅值XYZ三个方向≤4μm噪声≤65dB（A）照明≥680Lx紫外线≥60uW/cm2电源消耗功率≤850V2适用范围适用于微生物操作和实验分析。3操作步骤3.1保持前窗不高于200的操作高度，当声/光报警时及时复位。3.2送风及排风风机开启前请先校整压差显示屏“0”位。3.3开机程序：开启电源-排风与送风-灭菌30’后关闭-照明-开始工作3.4关机程序:关闭送风-照明-开启灭菌30’后关闭-排风-关闭电源。3.5每次操作结束,请清洁台面及墙体。3.6压差报警:预置报警值160Pa,HEPA寿命终止压差180Pa，更换须由专业人员操作。3.7使用过程中，请勿将软纸、细微的物品等放于进风格栅附近，以免其被吸入负压风道和风机中，影响装备的运行。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-09版本/修订号：A/0主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期：20060808第27页共41页4注意事项4.1打开带钥匙的开关，即接通了装备的总电源，开启后，红色电源指示灯点亮。4.2正常使用的前窗高度为0。2M；当大于0。2时，装备会发出报警声，前窗高度红色报警指示灯也会点亮。此时操作者应将前窗高度降至报警声消除位置，前窗高度红色报警指示灯会随之熄灭。4.3当有污染物残留工作台面时应及时清理，工作台面为不锈钢制品，清洗时应注意使其不受损伤，以保证长期使用和保持其美观。4.4高效过滤器的压差损失在装备出厂时已设定预置值，所以当装备中的送风过滤器在将要达到使用寿命前，即压差损失达到预置值时，红色报警指示灯会点亮，装备发出报警声，这一现象叫预先报警。此时送风或排风红色报警指示灯虽然电路点亮着，但这并不表示装备已不能正常使用，操作者若想继续使用装备，直至送风或排风过滤器寿命终止是完全可以的，但由于此段使用时间中报警器一直处于鸣响状态，所以操作者可与销售公司联系，在技术人员的指导下消除报警声。一旦红色报警指示灯点亮，装备发出报警声，需及时与我公司服务部门联系有关调换高效过滤器的事宜。如果长时间不予更换会影响装备的安全性能。4.5操作者不得擅自改变压差损失在装备出厂时的设定预置值。4.6当液晶显示屏旁的送风排风选择按钮(即颜色为白色的按钮)处于高起状态时,液晶显示屏上显示的数字是送风过滤器的压差损失,当液晶显示屏旁的送风排风选择按钮处于低进状态时,液晶显示屏上显示的数字是排风过滤器的压差损失。即切换送风排风选择按钮可以看到送风或排风过滤器的压差损失。4.7在液晶显示屏与送风排风选择按钮中间有两个调零电位器,这两个电位器是用来调节液晶显示屏上显示的排风和送风过滤器的压差损失的零位的。当安全柜接通电源时,液晶显示屏上就会显出数字,此时应等待十分钟左右,等液晶显示屏上的数字稳定后,再通过上下两个电位器及切换送风排风选择按钮来调节排风和送风过滤器的压差损失零位。调好零位后,按下风机按键,此时液晶显示屏上显示的数字是指实时的送风或排风过滤器的压差值。每次使用安全柜前,都应调一次零位。4.8四个软贴面接键开关,分到为风机、照明、灭菌及供电。当订货合同对装备无跨接供电输出(即客户未提出在装备内增加电源插座)要求时,开关面板的供电开关为空接状态。当照明、灭菌及供电任一开关处于接通位置的,绿色指示器会点亮。对于风机开关,用户第一次按开关时,绿色指示器会点亮,此时送风风机与排风风同时开始工作,当用户再按一次按键开关时,红色指示灯会点亮,此时送风风机停止工作而排风风机继续工作,当用户第三次按开关时,红色指示灯熄灭,排风风机停止工作。一般情况下,用户从操作中一直到操作结束清理台面完毕后的5分钟内,风机按键都应该是绿色指示灯持续点亮,只有在上述行为都结束时, ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-09版本/修订号：A/0主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期：20060808第27页共41页才应该再按一次风机按键,使红色指示灯点壳,此时生物安全柜会把残留在操作区的污染物质都吸入到负压风道中去。4.9装备工作区边墙的突起装置是压差传感器的通气口,所以用户不得堵塞该通气口,也不得在该装置上悬挂物件。4.10高效过滤器有其使用寿命。随着使用期的延长,尘埃及细菌积聚于过滤器会导致高效过滤器压力损失的增大。希望装备能运行于不低于10000级空气质量的背景环境中,若长期运行于劣质空气环境中会导致高效过滤器的频繁更换。4.11风机及其下侧钢板是静压箱盖,后侧门板是负压风道挡板,这些风道在出厂时是经严格密封处理的,应保持其密封性能,操作者不得松懈或拆除这些部件的螺钉。如有特别需要,必须由专业人员作为。4.12台面上靠近前窗处的隔栅既被用作进风,同时也作为污水的排水口使用,台面下端有出水龙头,专门用于排放污水。4.13装备就位后,若要防止移动,可以使用螺丝刀穿入支撑脚的定位孔中旋转,直到支撑脚的高度与脚轮的高度等高为止。4.14注意检查仪器的运行情况，并填写《仪器使用登记表》5仪器维护5.1使用注意。该仪器在日常使用中请注意符合“4注意事项”要求5.2作业完工后维护清洗台面及墙体，保持装备整洁。喷洒酒精对操作区空间消毒,或用紫外线灭菌。如遇泼溅,在完工后拆除进风格栅清洗污染的负压风道。检查送风及排风过滤器压差监测仪表是否在正常范围。如遇非正常状况,请关机调整"0"位后再次开机验证。5.3定期维护5.3.1应检查电源线外皮有否破损,如遇外皮损坏请及时更换,以保持装备的电器安全性能。5.3.2应检查接地性能,每次维护时掀开台面检查连接电源插头"地"插销的黄绿双色线与机壳间是否连接完好。用于连接的螺钉应紧固。5.3.3应检查风机运行时有否异常声。异常声主要有两方面原因所致,均应掀开顶板排除或修理：⑴工作时杂物被卷进冈机⑵风机叶轮故障。5.3.4照明灯管及紫外线灯管为易耗品,定期维护时可以考虑更换。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-09版本/修订号：A/0主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期：20060808第27页共41页5.3.5从可维修性出发,对风机、照明、灭菌分三路设置电流保险器,方便用户判别故障。5.3.6若插上钥匙开关,红色指示灯不亮,则故障的一个原因可能是：装备背部与电源线相连接的插座口中的保险丝烧掉,在这个插座口中厂家提供了个保险丝的备件只要把它重新装上，装备即可使用。5.4严格按照仪器的关机程序关机。6期间核查6.1每三年进行一次。由技术监督局按部颁标准执行。6.2一年进行一次。由厂家提供7相关记录仪器设备使用登记表 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-10版本/修订号：A/0主题内容飞鸽牌离心机操作维护规程生效日期：20060808第29页共41页飞鸽牌离心机操作维护规程1技术参数参数缩写检测原理最高范围20000rpm定时范围0-60min最大相对离心力25480g最大容量300ml输入功率810VA噪音<75db电源220V50HZ外型长尺寸450x540x655mm熔断器规格T250V6A2适用范围适用于中小实验室作血浆、血清、沉淀物.痰液等分离工作。3操作步骤(1)打开盖板，小心将待离心试管放入护管内，注意对称两边护管内的重量应小于1克；(2)盖上盖板，接通电源，调节到所需的速度和时间，开启电源开关；(3)时间旋钮回至“0”处时，离心机自动停止工作，完成离心目的；(4)等旋转停止后，打开盖板取出离心管；(5)工作日结束时，应拔出电源插头，确保安全。4样品要求：无特殊要求5注意事项（1）为了延长使用寿命，减少故障发生，必须注意对称两边离心管护管内的等重要求；（2）为确保离心机内气溶胶不造成实验室污染，应在停止旋转后方可打开盖板。（3）仪器不使用时请罩防尘罩。（4）注意检查仪器的运行情况，并填写《仪器使用登记表》。 ABCD人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-10版本/修订号：A/0主题内容飞鸽牌离心机操作维护规程生效日期：20060808第29页共41页5仪器维护（1）日常维护——保持机外清洁，注意对称平衡，观察噪音异常；（2）季维护——每季度用消毒液清洗护管套及机内；（3）按需维护——根据使用频率及时更换碳刷，勿使碳刷后金属丝磨擦整流子轴柱，造成硬性损坏；(4)严格按照仪器的关机程序关机。6期间核查飞鸽离心机的定标不需要特别的周期间隔，本实验室飞鸽牌离心机由XX市计量质量检测研究所校准。7相关记录(1)仪器使用登记表 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-01版本/修订号：A/0主题内容血库工作制度生效日期：20060808第30页共41页血库工作制度1.输血科（血库）工作人员必须遵守劳动纪律，坚守工作岗位，如有特殊情况需暂时离开，必须向有关人员交接，说明去向、事由、时间并按时返回，杜绝脱岗现象。2.一般输血应预先填写血型申请单测定血型，需输血时再填写输血申请单，各申请单均应由医生逐项填写清楚（包括已测知的血型）。急诊输血亦应同时将血型申请单及输血申请一并送血库，否则应拒收并立即通知有关医生补齐。3.血库人员在收到申请单及血样后，应认真核对申请单上的病人姓名、性别、年龄、住院号、病区、床号及临床诊断，并与血样标签核对是否完全相符，如血样所贴标签与申请单内容不符，应立即退回重送，经核实无误后方可进行血型及配血交叉试验。4.血库人员应严格按操作规范操作，如确遇难以判断的结果，应向科室负责人或有关上级医生报告，并认真复查，直至结果明确无误，方可发血以确保安全。5.如发现采供血机构所发血液的血型标记有误，或标签内容模糊不清，应作好记录，然后通知采供血机构退回复核，并应即时向科室负责人及医务科报告。6.病员血型确定后，原则上应配发同型血。如急症输血，又一时无同型血，可酌情发给O型红细胞，最好是Rh阴性血。紧急发血时，血袋上应标明未完成配血试验，同时，应尽快完成配血试验，如发现配血不合，应立即通知临床医生停止输血。7.备用血液的申请，须按“输血申请和审批制度”严格执行。8.血液一经领出，原则上不得退回。如有特殊原因，且出库时间未超过半小时，血液保存完好，经输血科（血库）检查合格后方可酌情退血。 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-02版本/修订号：A/0主题内容交叉配血生效日期：20060808第32页共41页交叉配血（凝聚胺法）1.原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。2.标本采集：2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。4.标本运输：室温运输。5.标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。6.试剂：6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。6.3试剂组成：试剂1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。试剂4.8.5％生理盐水。7.仪器：7.1血型血清索离心机：XTL-4.7上海离心机械研究所7.2离心机：上海手术器械厂7.3电热恒温水箱：北京长源实验设备厂7.4显微镜：OLYMPUS(日本) ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-02版本/修订号：A/0主题内容交叉配血生效日期：20060808第32页共41页8.操作步骤及结果判断：8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。8.2各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。8.31000g(3000rpm)，离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。8.4加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。8.5凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。9.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。10.超出范围结果处理：10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。10.2若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。10.3红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。10.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.方法局限性：11.1试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。11.2操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。11.3离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。11.4观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容ABO血型鉴定生效日期：20060808第37页共41页ABO血型鉴定（生理盐水法）1.原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。2.标本采集2.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2.2标本要求：2.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTAK2（㎎/dL）抗凝。2.2.2用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。3.标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃保存不超过48小时。4.标本运输：室温运输5.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定6.试剂6.1试剂名称：ABO血型检测试剂6.2试剂生产厂家：南京华欣药业生物工程有限公司6.3试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容ABO血型鉴定生效日期：20060808第37页共41页试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）25102011112ml（40）0.8ml（16）0.4ml（8）0.2ml（4）为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。7.操作步骤7.1玻片法7.1.1取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。7.1.2另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。7.1.3用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。7.2试管法7.2.1取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。7.2.2另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。7.2.3摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容ABO血型鉴定生效日期：20060808第37页共41页8.结果判断8.1观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。8.2凝集强度判断标准：4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2＋＝红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1＋＝肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF＝混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。8.3按下表报告受检者红细胞ABO血型ABO血型正反定型结果分型血清＋受检者红细胞受检者受检者血清＋试剂红细胞抗－A＋——＋抗－B—＋—＋抗－A＋B＋＋—＋血型ABOABA细胞—＋＋—B细胞＋—＋—O细胞————9.临床意义：输血、器官移植与亲子鉴定10.操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。11超出范围结果处理11.1红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。11.2正反定型结果不一致原因11.2.1分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。11.2.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。11.2.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容ABO血型鉴定生效日期：20060808第37页共41页白血病或恶性肿瘤）以及B类或cisAB等。11.2.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。11.2.5受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。11.2.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.2.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.2.8血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。11.2.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。11.3正反定型结果不一致的解决方法：11.3.1另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。11.3.2将红细胞洗涤数次，配成2％盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—AI，抗—A＋B及抗—H做试验可以得到其它有用的信息。11.3.3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。11.3.4用A1、A2、B、O红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。11.3.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。11.3.6如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗—B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80％HAB分泌型的人有用。11.3.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。11.3.8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：11.3.8.1观察细胞与抗—A及抗B的凝集强度，与抗A的反应要比抗—B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。11.3.8.2用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原。11.3.8.3检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容ABO血型鉴定生效日期：20060808第37页共41页质而无B物质。11.3.8.4核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴件杆菌感染有关。12.方法局限性12.1分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染。12.2试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。12.3操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。12.4按理IgM抗—A和抗—B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温（20℃-24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。12.5离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。12.6观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。12.7判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。12.8试剂一旦发现浑浊不得使用。12.9制红细胞悬液时防止自凝现象。13.参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997，89-92 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-04版本/修订号：A/0主题内容ABO正定型和RH血型鉴定生效日期：20060808第40页共41页ABO正定型和Rh血型鉴定（微柱凝胶检测法）1.原理ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以及血清中相应的抗体来决定的，将人分为四种血型：A型、B型、AB型和O型。红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。Rh血型系统的鉴定是根据是否存在D抗原来决定的。微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。2.标本采集2.1标本种类：新抽取的抗凝血2.2标本要求：2.2.1抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝2.2.2采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意于抗凝剂混匀）2.2.3离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟3.标本储存：待测标本在2-8℃下的保存时间为48小时4.标本运输：室温保存5.标本拒收标准：不可使用溶血或受污染，或者含有凝块的样品。6.试剂6.1试剂名称：DianaGelConfirm凝胶卡、DianaSol1号试剂6.2试剂生产厂家：DiagnosticGrifols,S.A.（西班牙）6.3试剂说明：每张DianaGelConfirm凝胶卡由8个微孔管组成（A-B-D-Ctrl-A-B-D-Ctrl），微孔管内含缓冲液浸泡的微粒筛，加上不同的试剂，试剂为：A：单克隆抗－A（克隆16243G2+16247 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-04版本/修订号：A/0主题内容ABO正定型和RH血型鉴定生效日期：20060808第40页共41页E6），B：单克隆抗－B（克隆9621A8-），D：单克隆抗-D（克隆P3×290+P3×35+P3×61+P3×21223B10），质控孔（Ctrl）:无抗体的胶溶液微孔管做质控。7.操作步骤7.1将样品、DianaSol1号试剂和DianaGelConfirm凝胶卡达到室温；7.2将新DianaGelConfirm凝胶卡离心；7.3红细胞悬液的制备：用Diana1号试剂来配制2-3％的血红细胞稀释液（25μl压积极红细胞加入1ml的Diana1号试剂中）；7.4在相应的微孔（1-6微管）中分别加入25μl的2-3％的红细胞悬液；7.5在DianaFuge离心机中离心9min；7.6判读结果。8.结果判断模式9.临床意义：ABO、Rh血型鉴定不合出现溶血性输血反应。10.操作性能10.1为国际安全输血检查的推荐方法；10.2操作简便方便；10.3可节省样品红细胞和血浆；10.4灵敏度高、特异性高、重复度好；10.5客观性好，避免主观判读结果的影响；10.6检测结果可较长时间保存；10.7操作者更少接触血液标本。11.超出范围结果处理11.1红细胞自凝：冷凝集素增高是最为常见的原因。用37-40℃生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷凝集素，可获得可靠的正定型。11.2正反定型结果不一致原因11.2.1自身免疫性溶血性贫血引起的红细胞被自身抗体包被；11.2.2红细胞A或B抗原的弱化；11.2.3红细胞悬液浓度过浓或过淡；11.2.4红细胞抗原位点过少或抗原性减弱；11.2.5病人感染细菌或病毒后，细菌或病毒产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血浆中都含有抗T抗体，因此可于正常人血浆中产生凝集反应，正定型实验假阳性；11.2.6严重感染的病人，其血浆中白细胞过多，堵塞凝胶筛间隙，影 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-04版本/修订号：A/0主题内容ABO正定型和RH血型鉴定生效日期：20060808第40页共41页响红细胞的沉降，引起假阳性。12方法局限性：12.1变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的阴或阳性结果；12.2因为储运不当的原因，有时会发现在微管的顶部存有小水珠或在胶泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；12.3如果发现有管内胶量不足或干裂，请不要用之；12.4如果所用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度不符，可能会引起错误结果；12.5使用非原厂的稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果；12.6质控结果必须似阴性，如果是阳性，检测无效，用生理盐水清洗红细胞并重新配制悬液重新检测，如果得到阴性质控结果，则可以判读结果；12.7为了防止冷凝集现象的干扰，实验在室温25℃中进行。 ABCD人民医院检验科血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-05版本/修订号：A/0主题内容KJX-IA型冰冻血浆解冻箱生效日期：20060808第41页共41页KJX-IA型冰冻血浆解冻箱1.原理KJX-IA型冰冻血浆解冻箱是由加热箱、解冻槽、循环管路、仪器箱等组成。水在加热箱内被加热至设定温度，由循环泵送入解冻槽，冰冻血浆放在专用的不锈钢解冻夹中，水的流体静力压力包住血浆袋，与冰冻血浆袋进行热交换后再循环入加热箱内加热。循环的水流既能加快冰冻血浆与水的热交换，又能使冰冻血浆快速安全地融解至适合输入人体的温度。由于加热箱与解冻槽分离，加热管及周围的高温水不会破坏血浆的有效成分。2.性能参数：存水量：32kg水泵能力：25kg/分钟控制温度：34℃-37℃控制精度：±0.5℃加热功率：1500W解冻时间：10-18分钟最大化浆量：6袋（每袋50-200ml）3.操作规程：3.1解冻：将冰冻血浆装入专用塑料袋后再放入解冻专用夹，置解冻槽内，按“启动”键进行解冻3.2当发“嘟---”一长声提示音时，解冻程序结束，“完成”灯亮，循环泵自动关闭。解冻槽内的水流回加热箱，解冻完成4.维护保养及注意事项：4.1每月对水箱温度进行一次检测校正，其方法为：4.1.1按住面板上的“1”档键开机，循环泵随即打开，水箱水上升至解冻槽内，温度窗口显示即时水温。4.1.2用计量准确的水银温度计测量解冻槽内的水温，若温度不一致可按温度“十·一”键若干次直至两者温度相同。4.1.3最后按一次“存储”键确认即完成校正。4.2浆袋破损或水内有污物应及时清洗，方法为：4.2.1非解冻状态下，按“清洗”键，机器进入清洗状态。温度显示窗口显示“清洗”符[Q]，并有“清洗”图案提示。4.2.2时间窗口显示清洗遍数2，增加或减少清洗遍数按“清洗”键即可（范围1-3遍）4.2.3清洗完成时，时间窗口显示“End”。