10生物(2)班王世忠文献综述

四川裂腹鱼同工酶研究文献综述：姓名：王世忠10生物（2）班学号：08111002025四川裂腹鱼在分类上属于鲤形目、裂腹鱼亚科，喜欢在流水湍急的峡谷江段生活。主食水生昆虫幼虫等，最大个体近500mm,有重要的经济价值。主要分布于长江上游的金沙江、雅砻江水系。由于近年来遭到滥捕和环境污染的严重破坏，该鱼天然资源量已经十分稀少。本实验对四川裂腹鱼中不同组织的同工酶进行研究，在丰富其基础生物学内容的同时，为其他鱼类同工酶的研究提供参考。  同工酶是生物体内基因转录和翻译的直接产物，它反映了编码酶蛋白的DNA序列信息[1]，酶谱的变化反映了等位基因和位点[2]的变化，同工酶的产生是进化过程中代谢的适应，是基因表达的产物，愈是关键的代谢调控酶或与外界环境密切的酶，同工酶越普通，分子类型也愈多。利用凝胶电泳技术[3]，能够得到具有较好的的同源性和可比较的同工酶谱，通过对酶谱的进一步分析，可以较深入、直接地了解物种的遗传信息[4]，包括群体的遗传结构、个体发育过程同工酶的表达和组织特异性等内容。同工酶电泳技术的使用大大促进了人们对种的遗传过程的认识，并且随着生化技术的提高，这种研究方法不断得到完善，研究领域继续拓展。对于鲤科鱼类同工酶的研究:有胡思玉、白建梅、葛传龙,、王延斌、陈永祥对（2007）昆明裂腹鱼淀粉酶活性研究[5] ,赵海涛,陈永祥,詹会祥,周礼敬(2007)昆明裂腹鱼畸形胚胎的形态观察[6]，张伟(2006)对鄱阳湖泥鳅细胞遗传与繁殖生物学研究[7]，马泼等(2000)对兴凯湖翘嘴红鱼白的肌、肝、眼、心4种不同组织的8种同工酶(LDH、EST、MDH、IDH、SOD、ME、G-6-PDH、ADH)进行了研究[8]，分析了各种同工酶的基因表达谱式，宋君(2006)对岩原鲤（Procyprisrabaudi）种群遗传多样性研究[9]，杨正玲、赵世海、龚疏影、董仕(2008)对州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤的mtDNAD-loop的RFLP分析[10]，唐文家、祁得林、杨成、申志新(2008)对黄河裸裂尻鱼乳酸脱氢酶同工酶研究[11]，刘鸿艳、谢从新(2008)对鱼类同工酶应用及研究进展[12]，王金秋、石椿(2001)对松江鲈鱼(Trachidermusfasciatus)不同组织同工酶的研究[13]，赵凯(2001)对青海湖裸鲤与鲤、鲫、草鱼的随机扩增多态DNA分析[14]，全成干、王军、丁少雄、苏永全(1999)对大黄鱼养殖群体遗传多样性的同工酶[15]，朱必凤、葛刚、彭志勤、薛喜文、罗莉菲(1999)对鄱阳湖鳜鱼、团头鲂肌肉四种同工酶研究[16]，吴瑯虎、袁均林、张伟(2003)对高背银鲫、大口胭脂鱼及胭脂鲫(F_1)不同组织的同工酶的表型分析[17]，对江苏水域7种重要养殖鱼类的同工酶和ISSR分析[18]等。有关四川裂腹鱼的研究资料，我国学者陈永祥等对四川裂腹鱼繁殖生态学生物学进行了研究[19][20][21][22][23]，何勇等对其进行了遗传多样性的RAPD分析[1] ，而目前对该鱼的同工酶研究还未见报道。本实验通过对四川裂腹鱼的眼睛、肌肉、心脏、性腺、肝脏、脾脏、肾脏、大脑的同工酶谱进行分析，为四川裂腹鱼的遗传研究提供依据。三、研究内容与方法3.1.1实验材料：四川裂腹鱼3.1.2实验设备：解剖器材、匀浆机、离心机、水浴锅、冰柜、电泳仪器、分析天平、电子天平、电炉、酸度计、烧杯、漏斗、试剂瓶、加样器、滤纸、容量瓶等。3.1.3实验药品：Na2HPO4、NaH2PO4、Tris、HCI、Gly、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、ddH2O、TEMED、NAD+、NBT、PMS、乳酸钠、氯化钠、NaOH、苹果酸钠、95%乙醇、A-醋酸萘酯、B-醋酸萘酯、丙酮、坚牢蓝RR盐、联苯胺、无水乙醇、乙酸钠、乙酸、NADP+、DL-苹果酸。3.2试验方法——垂直平板不连续聚丙烯酰胺疑胶电泳法采用垂直平板不连续聚丙烯酰胺疑胶电泳法，电泳槽为DYCZ-24D型。浓缩胶占5%，分离胶占10%，电极缓冲液为Tris-Gly溶液(PH8.3).进样量45-55ul,指示剂为溴酚兰,在4℃下进行电泳。3.3实验操作3.3.1取材 将四川裂腹鱼活体解剖,取出眼睛、肌肉、心脏、性腺、肝脏、脾脏、肾脏、大脑９种组织，用双蒸水冲洗干净,分别称重，置于匀浆机中,按1:3(W/V)加入0.1mol/L的磷酸缓冲液(PH7.0),冰浴研磨8-10分钟,4℃下20000r/min离心30分钟,吸取上清液置于低温冰箱中保存备用。3.3.2配制溶液1000ml0.1mol/L磷酸缓冲液(PH7.0)：0.1mol/LNa2HPO4610ml+0.1mol/LNaH2PO4390ml1000ml0.1mol/LTris-HCI(PH8.8)缓冲液：121gTris溶于ddH2O,用HCI调PH8.8,定溶1000ml1000ml0.1mol/LTris-HCI(PH6.8)缓冲液：121gTris溶于ddH2O,用HCI调PH6.8,定溶1000ml1000mlTris-Gly溶液(PH8.3)(5*)：Tris3.03g,Gly14.42g,定溶1000ml30%聚丙烯酰胺溶液：丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加ddH2O100ml,过滤,保存。3.3.3制胶分离胶(18ml)：30%聚丙烯酰胺溶液4.5ml0.1mol/LTris-HCI(PH8.8)6.72mlddH2O6.72ml10%过硫酸铵0.12mlTEMED18ul 将上面几种溶液混合,立即加到玻璃板里,然后在胶上面加一小层蒸馏水,1小时后,用滤纸把水吸干,再加浓缩胶。浓缩胶(10ml)：30%聚丙烯酰胺溶液1.67ml0.1mol/LTris-HCI(PH6.8)1.25mlddH2O7.03ml10%过硫酸铵0.1mlTEMED12ul将上面几种溶液混合,立即加到玻璃板里,然后在胶上面轻轻插上梳子。3.3.4加样加完浓缩胶1小时之后,轻轻取出梳子,用滤纸把每个孔里的水都吸干,分别加人9种不同的组织各50ul。3.3.5电泳加样完毕后,在40C条件下进行电泳,具体是这样,在电泳槽里加入Tris-Gly溶液(PH8.3)(5*)电极缓冲液,电泳时间：100V浓缩1小时,200V分离3-4小时.电泳完毕后,取出胶板,在注射器里装满水,顺着胶板壁将胶冲到培养皿中去,然后用蒸馏水算洗1到2次。3.3.6染色将配制好的染色液(具体配方见下)培养皿中,染色30分钟到1小时。3.3.7保存 到掉染液,用蒸馏水算洗1到2次,保存于7%的醋酸中。用于拍照及结果分析4.各种染色液的配方4.1乳酸脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，1M乳酸钠(PH7.0)10ml,0.1M氯化钠5mg,0.5MTris-HCI(PH7.1)15ml,100ml容量瓶定容。4.2苹果酸脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，1M苹果酸钠(PH7.0)10ml,0.5MTris-HCI(PH7.1)20ml,100ml容量瓶定容。4.3谷氨酸脱氢酶:NAD+60mg、PMS2mg、NBT30mg，1M谷氨酸钠(PH7.0)5ml,0.5磷酸缓冲液(PH7.0)25ml,100ml容量瓶定容。4.4乙醇脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，95%乙醇4ml,0.2MTris-HCI(PH8.0)14ml,100ml容量瓶定容.0.2MTris-HCI(PH8.0)缓冲液的配方:0.605gTris.加200mlddH2O.用浓盐酸调PH8.0,250ml容量瓶定容。4.5酯酶：1%A.B-醋酸萘酯溶液3ml、坚牢蓝RR盐100mg,0.5MTris-HCI(PH7.1)缓冲液10ml,100ml.。容量瓶定容1%A.B-醋酸萘酯溶液的配方：1gA-醋酸萘酯和1gB-醋酸萘酯，溶于50ml丙酮和50ml蒸馏水中。4.6过氧化物酶：0.1g联苯胺,5ml无水乙醇,1.5M乙酸钠10ml,1.5M乙酸10ml。4.7苹果酸酶：90mlTris-HCI(PH8.0)缓冲液，10ml2MDL-苹果酸(PH8.0)，NADP+50mg、NBT30mg、PMS2mg。 [1]何勇、安苗、陈祥、李兴美、邹习俊、韩雪．乌江上游四川裂腹鱼和昆明裂腹鱼遗传多样性的RAPD分析[J]．贵州农业科学，2008（3） [2]葛颂、洪德元，泡沙参同工酶基因位点的遗传分析[J]，植物学报，1986:431-438[3] 北京师范大学生物系生物化学教研室，基础生物化学实验。北京：北京高等教育出版社．1982:142-145[4]胡能书、万贤国，同工酶技术及其应用[M].长沙：湖南科技出版社，1985:86-126 [5]胡思玉,白建梅,葛传龙,王延斌,陈永祥.昆明裂腹鱼淀粉酶活性研究[J].水产科学,2007(04) [6]赵海涛,陈永祥,詹会祥,周礼敬.昆明裂腹鱼畸形胚胎的形态观察.毕节学院学报.2007(4):72-75[7]张伟．鄱阳湖泥鳅细胞遗传与繁殖生物学研究[D].南昌大学学报．2006:11-15[8]马波、石连玉、尹家胜．兴凯湖翘嘴红鱼白不同组织的同工酶(LDH、EST、MDH、IDH、SOD、ME、G-6-PDH、ADH)进行了研究[J]．淡水渔业，2000:6-9[9]宋君．岩原鲤（Procyprisrabaudi）种群遗传多样性研究[D].四川大学学报,2006:5-10[10]杨正玲、赵世海、龚疏影，董仕州． 河鲤、建鲤和框鳞镜鲤的mtDNAD-loop的RFLP分析[J].淡水渔业．2008:41-43[11]唐文家、祁得林、杨成、申志新，黄河裸裂尻鱼乳酸脱氢酶同工酶研究[J]．水产科学，2008:40-41[12]刘鸿艳、谢从新，鱼类同工酶应用及研究进展[J]，水利渔业，2008，1-3[13]王金秋、石椿，松江鲈鱼(Trachidermusfasciatus)不同组织同工酶的研究[J]，复旦学报(自然科学版)，2001:354-356[14]赵凯，青海湖裸鲤与鲤、鲫、草鱼的随机扩增多态DNA分析[J]．淡水渔业，2001:49-51[15]全成干、王军、丁少雄、苏永全．大黄鱼养殖群体遗传多样性的同工酶研究[J]，厦门大学学报(自然科学版)．1999，585-588[16]朱必凤、葛刚、彭志勤、薛喜文、罗莉菲．鄱阳湖鳜鱼、团头鲂肌肉四种同工酶研究[J].南昌大学学报(理科版)．1999:63-66[17]吴瑯虎、袁均林、张伟，高背银鲫、大口胭脂鱼及胭脂鲫(F_1)不同组织的同工酶的表型分析[J]．生物学杂志．2003:19-21[18]吴兴兵．7种重要养殖鱼类的同工酶和ISSR分析[D]．南京大学．2006：12-24[19]陈永祥等.四川裂腹鱼繁殖生态生物学研__IV性腺组织学及性腺发育．毕节师专报.1996（1）:1-5 [20]陈永祥等.四川裂腹鱼繁殖生态生物学研究_V繁殖群体和繁殖习性.1997（1）:1-5[21]陈永祥等.四川裂腹鱼繁殖生态生物学研究_续_胚胎发育的研究．1994（4）:1-7[22]陈永祥等.四川裂腹鱼繁殖生态生物学研究_续_幼鱼发育的观察．1995（2）:1-4[23]陈永祥等.乌江上游四川裂腹鱼的胚胎发育.四川动物．199616（4）:163-167