动药生物制品考试重点

1生物制品学：是在微生物学、免疫学和传染病学的基础上，采用生物学、生物化学及生物工程学等技术和方法，研究和制备生物制品，用于解决人、畜疫病防治的一门新兴应用学科。生物制品：根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物（血清）等为原料，采用生物学、生物化学以及生物工程学的方法加工制成的、用于传染病或其它有关疾病的预防、诊断和治疗的生物制剂2传染病：即传染性疾病，是由病原体引起的、能在人与人、动物与动物或人与动物之间相互传染的疾病。3基因缺失疫苗:利用基因工程技术，在DNA水平上造成毒力有关基因的缺失或突变，即切去基因组中编码致病性物质的某一片段核苷酸序列或使其突变，使该微生物致病性丧失，但仍保持其免疫原性及复制能力。4.冻干:又称冷冻真空干燥或冷冻干燥。是将含有大量水分的生物活性物质，经预先冻结成固体，再在真空和低温条件下使固体水分子直接升华成水蒸气，最后使生物活性物质形成疏松多孔状、体积不变的干燥制品，这一过程称冷冻干燥，简称冻干。5.酶标二抗:酶标抗体是指与底物结合后能显色的酶与抗体连接后所制备的结合物。酶标二抗即酶标记的抗抗体（抗异种动物的抗体）。如兔抗猪酶标二抗、兔抗鸡酶标二抗。6.GMP：《药品生产质量管理规范》。7.类毒素:细胞在生长繁殖过程中所产生的外毒素，经化学药品（如0.3-0.4%甲醛）处理后，成为无毒性而保留其免疫原性的生物制剂。8.免疫佐剂:凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质均称为佐剂,也称免疫佐剂。9.DNA疫苗：又称核酸疫苗，是应用基因工程技术将编码某种抗原蛋白质的外源基因与载体重组后直接导入动物体内，利用免疫原基因在宿主体内表达出的抗原蛋白质引起机体的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。10灭活:指破坏或杀灭微生物使其成为无生命物质的过程，即破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能保留其免疫原性。11基因工程亚单位疫苗：指利用基因工程技术所构建的重组表达载体在高效表达系统中表达出来的强毒病原体的某种免疫原性成分而制成的疫苗。12类毒素：又称脱毒毒素，细胞在生长繁殖过程中所产生的外毒素，经化学药品（如0.3-0.4%甲醛）处理后，成为无毒性而保留其免疫原性的生物制剂。13多联疫苗：指利用不同种微生物的增殖培养物或其代谢产物，按免疫学原理、方法组合而成的疫苗。14冻干：冻干又称冷冻真空干燥或冷冻干燥。是将含有大量水分的生物活性物质，经预先冻结成固体，再在真空和低温条件下使固体水分子直接升华成水蒸气，最后使生物活性物质形成疏松多孔状、体积不变的干燥制品，这一过程称冷冻干燥，简称冻干。15灭活疫苗：又称死苗，以含有细菌和病毒的材料利用物理的或化学的方法处理，使其失去感染性或毒性而保留其免疫原性，接种机体后能产生自动免疫，预防疫病的一类生物制品。16高免血清：为含有高效价特异性抗体的血清制剂。即动物经反复多次地免疫后，机体的体液尤其是血清中就产生大量抗此中抗原的抗体，采取次此种动物的血液分离所得血清，即为高免血清、免疫血清、抗血清。二填空1．人工获得弱毒株的途径有化学途径、物理途径和生物途径三种。 2．按照生物制品生产的性质，可将其分为疫苗、类毒素、诊断制品、抗病血清、微生态制剂和副免疫产品六大类。3．破伤风类毒素是将破伤风杆菌所产生的外毒素经过化学制品处理而制成的一种具有免疫原性生物制剂。4．生物制品生产中，培养病毒的方法有动物培养法、细胞培养法和鸡胚培养法三种。5．属于人工主动免疫用的生物制品有类毒素和疫苗，主要用于传染病的预防；而属于人工被动免疫用的生物制品有抗体、抗毒素血清及高免卵黄液等，主要用于发病时的紧急性免疫接种和治疗。6．细胞的培养方法有静置培养、转瓶培养、悬浮培养、微载体培养、中空纤维培养法和微囊化技术培养法六大类。7．在灭活疫苗的制备过程中，最常用的灭活剂是甲醛。8在破伤风抗毒素的精制过程中，常加入胃蛋白酶对制品进行处理，其作用是将H链从铰链区二硫键的近C端切断，获得两个大小不同的片段。9生物制品生产中，培养病毒的方法有动物培养法、细胞培养法和鸡胚培养法三种。10根据佐剂在体内存留时间的长短，可将免疫佐剂分为储存型佐剂和非储存型佐剂两大类，常用的白油佐剂、Al(OH)3胶均属于储存型佐剂。11诊断液包括诊断抗原和诊断抗体两大类。三、简答题1．单价疫苗、多价疫苗和多联疫苗有何不同？答：一、制备不同：1）单价苗是利用同一种微生物菌（毒）株或同一种微生物菌（毒）株的单一血清型菌（毒）株的增殖培养物制备。2）多价苗是用同一种微生物中若干血清型菌（毒）株的增殖培养物制备。3）多联苗是利用不同微生物增殖培养物，按免疫学原理和方法组合而成。二、接种后的效果不同：1）单价苗对单一血清型微生物所致的疫病有免疫保护效力，但单价苗仅能对多血清型微生物所致疾病中的对应血清型有保护作用，而不能使免疫动物获得完全的免疫保护。2）多价苗能是免疫动物获得完全的保护力，且可在不同地区使用。3）多联苗接种动物后，能产生对相应疾病的免疫保护，具有减少接种次数和使用方便等优点，具有一针防多病的生物制剂。2．凝集反应抗原和沉淀反应抗原各有何特点？对于可溶性抗原若欲应用于凝集试验，该怎麽处理？答：凝集反应抗原是颗粒性抗原，在有电解质存在条件下，能与特异性抗体结合，形成肉眼可见的凝集现象。沉淀反应抗原为胶体状态的可溶性抗原，与相应抗体相遇，在两者比例合适并有电解质存在时，抗原抗体相互交联形成免疫复合物达一定大时，即出现肉眼可见的沉淀。沉淀抗原是细胞浸出成分，为细微的胶体溶液，体积小而总面积大，反应时需要的抗体量多。制备时先取可溶性抗原，然后将抗原应用物理吸附/化学偶联的方法连接在颗粒性载体（红细胞、乳胶、炭）上，制成间接凝集抗原，用于正向间接凝集反应（被动凝集反应）。3．欲制备兔抗鸡（二抗）高免血清，试设计一制备方案（免疫程序），并举例说明其在免疫学诊断中的具体应用。制备程序：采取鸡血、分离血清→提取IgG→取鸡IgG接种于家兔（一般３次，每次间隔１０天左右，剂量递增）→最后一次注射后１０左右采血检测其琼扩效价，达１：３２－６４以上时，大量采血，分离血清，即得到兔抗鸡高免血清。高效价特异性兔抗鸡（二抗）高免血清在鸡病的诊断和抗体检测中具有十分重要的作用，主要用于酶联免疫吸附试验（ELISA)。4在生物制品的冻干过程中，加热干燥可分为哪两个过程？请详细解释之。 答：加温干燥：经预冻后即进入真空干燥阶段。该过程分两个阶段。①升华干燥阶段：加温使制品温度达到共熔点温度，在共熔点温度下将冻结物质中的水分除去的过程称为升华，即升华干燥阶段。在升华干燥阶段可除去85%以上的水分。②解吸干燥阶段：使与物质结合的水分子通过加热方式除去的过程称为解吸干燥。一般在加热下使产品温度迅速上升到25-30℃，冻干箱内的压强控制在15-30Pa下进行解吸干燥。此阶段可除去10%的水分5.生物制品生产中培养细菌的方法有哪几种?各有何特点？答：有固体表面培养法；液体静置培养法；液体深层通气培养法；透析培养法。固体表面培养法：可根据需要调节细菌浓度，但产量低，劳动强度大。液体静置培养法：操作简便，但细菌数量一般不高。液体深层通气培养法：加速细菌分裂繁殖，缩短培养时间，提高细菌数量。透析培养法：培养基和培养液可独立控制；可以搅拌和通气；可使用任何类型的透析膜和滤膜；液体在透析器中的流向和流速可以掌握；可将每个部分按比例缩小和放大，有利于制备高效力的生物制品。四、问答题1.简述常规疫苗的种类和特点答:常规疫苗包括灭活疫苗（死苗）和活疫苗。死苗：是以含细菌、病毒的材料，用物理化学方法处理，使之失去感染性或毒性而保留免疫原性，接种后能使机体产生自动免疫，预防疾病的生物制品。优点:1）安全，不存在返祖返强、散毒，从而造成新疫源的危险；2）易保存、运输，不许低温保存及特殊运输条件；3）稳定，便于制备多价或多联苗；4）对母源抗体的干扰作用不敏感。缺点：1）产生免疫力慢，不适于紧急接种；2）免疫途径受限，一般需注射；3）不加佐剂效果差，免疫期短；4）不产生局部免疫，主要产生体液免疫，引起细胞介导免疫能力较弱5）用量大，价格较贵。活疫苗：人工诱变的弱毒株或筛选出的自然弱毒株制成，弱毒株对原宿主丧失致病力或亚临床感染，但仍保留免疫原性和遗传特性。优点：1）产生免疫力快且持久；2）可多途径接种，如滴鼻、点眼、口服等；3）可引起整个免疫应答，局部免疫及全身免疫；（4）成本低，价格便宜。缺点：1）具有返祖返强的危险。残毒在自然界动物群中持续传递后有毒力增强的危险。2）残余毒力问题；3）需要低温、冷暗运输储藏；4）存在不同抗原，母源抗体干扰，影响免疫效果；5）污染，生产过程中易造成其他病毒的污染。2．今有一猪场反复发生链球菌病，应用商品疫苗及多种药物均不能有效控制，现欲制备自家灭活疫苗，如何制备？请详述之。从发病仔猪中分离致病性链球菌菌株→接种于血琼平板37℃24h→挑取单个菌落接种于少量马丁肉汤37℃20h→转种于适量马丁肉汤，37℃20h，作为种子液→接种大量马丁肉汤培养基，加入量为1%，37℃24h→纯粹检验、计数→加入0.1%甲醛，37℃7-12h→加入菌液:Al(OH)3=5:1的Al(OH)3，混匀，置室温24h，弃去适量上清液→混匀、分装。3．何谓单克隆抗体？简述其制备原理及基本制备程序。答：单抗：由一个B细胞克隆分化增殖的子代细胞所产生的针对单一抗原决定簇的抗体。 4.何谓单克隆抗体？简述其制备原理及基本制备程序。（15分）答：概念：由一个B细胞克隆分化增殖的子代细胞所产生的针对单一抗原决定簇的抗体制备原理：McAb是通过杂交瘤技术将在体外不能长期繁殖的免疫淋巴细胞和瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，此细胞承接了两个亲代细胞的遗传性，既保存了瘤细胞无限迅速增殖传代的能力，又继承了免疫淋巴细胞合成、分泌特异性抗体的能力。经过克隆化培养后，成为单克隆杂交瘤细胞系，这种细胞只产生单一的高度纯的特异性抗体，即McAb。制备的基本过程：（1）应用已知抗原反复免疫小鼠，使其B淋巴细胞产生特异性抗体（2）从免疫小鼠分离脾细胞（3）将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞在融合剂作用下进行融合；50%PEG（4）融合细胞的筛选：融合后转移到HAT选择培养基〔含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）〕，未融合的脾细胞因不能在体外存活而死亡，未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被氨基喋呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤HGPRT和ＴＫ，不能利用次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡，而融合细胞由于从脾细胞获得HGPRT和ＴＫ，故能在HAT培养基中存活和增殖。（5）杂交瘤细胞的克隆化：一方面是保证以后获得的杂交瘤细胞是由一个细胞增殖而来的，即单个克隆，另一方面防止杂交瘤细胞因染色体丢失而丧失分泌抗体的能力，常用方法有有限稀释法，显微操作法等。（6）单克隆抗体的生产：采用小鼠体内培养法或体外培养法进行批量生产。制备基本原理：通过杂交瘤技术，将在体外不能长期增殖的免疫淋巴细胞和瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，此细胞既保存了瘤细胞无迅限速增殖传代的能力，又继承了免疫淋巴细胞合成、分泌特异性抗体的能力。基本程序：1应用已知抗原反复免疫小鼠，使其B淋巴细胞产生特异性抗体。2从免疫小鼠分离脾细胞。3将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞在融合剂作用下进行融合。4融合细胞的筛选。5杂交瘤细胞的克隆化。6单克隆抗体的产生。