蒙药用植物棉团铁线莲总生物碱和总黄酮含量的测定

蒙药用植物棉团铁线莲总生物碱和总黄酮含量的测定　　摘要：目的研究蒙药用植物棉团铁线莲的总生物碱和总黄酮含量。方法用乙醇提取棉团铁线莲的总生物碱和总黄酮，采用分光光度法测定其含量。结果棉团铁线莲的总生物碱含量为：0.0056mg/g，黄酮含量为0.1085mg/g。结论蒙药用植物棉团铁线莲中富含有黄酮类化合物和生物碱类化合物，其生物碱含量较高。　　关键词：蒙药用植物；棉团铁线莲；总生物碱；总黄酮　　棉团铁线莲（Clematishexapetala.）别名山蓼、棉花团、威灵仙，为毛茛科（Ranunculaceae）铁线莲属多年生宿根草本植物。在我国分布于内蒙古、甘肃东部、陕西、山西、河北、辽宁、吉林、黑龙江。生固定沙丘、干山坡或山坡草地，尤以东北及内蒙古草原地区较为普遍。分布广，资源丰富[1]。棉团铁线莲全草入蒙药，夏末、秋前采收。具有破痞，调温，"协日乌素"，止腐，消肿，止泻之功效。临床上主治寒痞，消化不良，寒性"协日乌素"病，"吾雅曼"病，黄水疮，疮疡，水肿，寒泻，祛除各种瘤的功效[2]。最近研究发现其具有抗肿瘤、降血压、降糖、抑菌、抗氧化等药理作用，主要有效成分为生物碱类化合物[3-4]。本研究测定蒙药用植物棉团铁线莲的总生物碱含量和总黄酮含量，为这一民主植物药的开发利用提供实验数据。　　1资料与方法　　1.1一般资料 实验用棉团铁线莲采自内蒙古呼和浩特市大青山，采摘后自然晾干，粉碎后过100目的筛子，保存于阴凉干燥处。盐酸小檗碱标准品和芦丁标准品购于中国生物检定所。主要仪器有，HH-W600数显恒温三用水箱，SG8200H超声波清洗器，GL-22M高速冷冻离心机，SHB-B95循环水式多用真空泵，IKA-RV10B25旋转蒸发仪和UV-2000紫外可见分光光度计等。　　1.2盐酸小檗碱标准曲线的制作精确称取2.5mg盐酸小檗碱标准品，用甲醇定容至25mL得到母液，分别吸取0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3.5mL、4.5mL母液于5mL玻璃试管中，再分别用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白对照在408nm下测吸光值，以盐酸小檗碱浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，测定总生物碱的含量。　　1.3盐酸小檗碱标准曲线的制作准确称取芦丁标准品25.00mg于100mL容量瓶中，加入少量80%乙醇，溶解，定容至刻度，摇匀，得芦丁标准溶液，浓度为0.25mg/mL。精确量取芦丁标准品溶液0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.4mL分别置于10mL刻度的试管中，均用蒸馏水稀释至2.40mL，各加5%亚硝酸钠0.40mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝0.40mL混匀，放置6min，加4.3%氢氧化纳4.0mL，最后用水稀释至刻度，混匀，放置15min。以试剂空白为参比，在506nm处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。　　1.4总生物碱的提取测定方法称取4g棉团铁线莲干粉，加入80mLpH为3的95%乙醇，50℃下提取1h，反复提取2次，合并滤液，旋转蒸发得乙醇浸膏，用10mL 1%盐酸溶解，过滤，滤液用25%氨水调节pH至10，用三氯甲烷萃取2次取下层，合并滤液，旋转蒸发，用5mL甲醇溶解，在408nm下测定其吸光度。　　1.5总黄酮的提取测定方法准确称取棉团铁线莲干粉1.00g于试管中，加入80%乙醇10ml，浸泡30min（含研磨时间），加1g石英砂研磨，离心，取上清液。取提取1mL于10mL有刻度试管中，加水至2.40mL，加5%亚硝酸钠0.40mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝0.40mL混匀，放置6min，加4.3%氢氧化纳4mL，最后用水稀释至刻度，混匀，放置15min以试剂空白为参比，在506nm处测定吸光度值，代入标准曲线，计算黄酮含量。　　2结果　　2.1总生物碱含量以盐酸小檗碱浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：y=10.118x+0.0160，R=0.9980，见图1。棉团铁线莲总生物碱在418nm处的吸光度为0.075，见表1，根据回归方程计算棉团铁线莲干粉中提取到的总生物碱含量为0.1085mg/g。　　2.2总黄酮含量以芦丁标准品浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：y=0.051x-0.0161，R=0.9881，见图2。棉团铁线莲总黄酮在506nm处的吸光度为0.999，见表1，根据回归方程计算棉团铁线莲干粉中提取到的总生物碱含量为0.0056mg/g。　　图1小檗碱标准曲线图2芦丁标准曲线　　3结论 　　棉团铁线莲是蒙古民族独特的药用植物，具有破痞，调温，"协日乌素"，止腐，消肿，止泻之功效。临床上主治寒痞，消化不良，寒性"协日乌素"病，"吾雅曼"病，黄水疮，疮疡，水肿，寒泻，祛除各种瘤的功效[2]。通过本研究发现棉团铁线莲含有生物碱和黄酮类化合物。总生物碱含量较高，在本实验条件下，1g干粉中提取到的总生物碱含量为0.1085mg。黄酮含量为0.0056mg/g，含量较低。　　综上所述，棉团铁线莲总生物碱和总黄酮的提取工艺条件简便、含量较高，因此进一步加强其总生物碱和总黄酮的的分离纯化和药理研究，使其得到有效的开发和利用，对社会和经济发展具有重大意义和价值。　　参考文献：　　[1]刘立波，杨慧，王锦.铁线莲属植物研究进展[J].安徽农业科学，2009，37（15）：6959-6961.　　[2]张鸽香，武珊珊.我国铁线莲属植物的研究现状及其园林应用方式[J].安徽农业科学，2010，38（22）：12076-12078.　　[3]刘立波，杨慧，王锦.铁线莲属植物研究进展[J].安徽农业科学，2009，37（15）：6959-6961.　　[4]孙凤，杨得坡.铁线莲属植物的化学成分研究进展[J].中国中药杂志，2009，34（20）：2660-2668.编辑/张燕