GBT22101.4-2009棉花抗病虫性评价技术规范枯萎病.pdf

'ICS65．020B16国营中华人民共和国国家标准GB／T22101．4—2009棉花抗病虫性评价技术规范第4部分：枯萎病Technicalspecificationforevaluatingresistanceofcottontodiseasesandinsectpests—Part4：Fusariumwilt2009-10-30发布2009-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局世士中国国家标准化管理委员会覆仲 前言GB／T22101．4—2009GB／T22101<<棉花抗病虫性评价技术规范》分为以下五个部分：——第1部分：棉铃虫；——第2部分：蚜虫；——第3部分：红铃虫；——第4部分：枯萎病；——第5部分：黄萎病。本部分是GB／T22101的第4部分。本部分的附录B为规范性附录，附录A为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。本部分起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心。本部分主要起草人：简桂良、孙文姬、马存、石磊岩、邹亚飞、郭荣。 1范围棉花抗病虫性评价技术规范第4部分：枯萎病GB／T22101．4—2009GB／T22101的本部分规定了棉花抗枯萎病[病原菌：尖镰孢萎蔫专化型(FusariumoxysporumSchl．f．sp．vasinfectum(Atk．)SnyderetHansen)]的鉴定方法和抗性评定标准。本部分适用于棉花抗枯萎病性鉴定和抗性评定。2术语和定义下列术语和定义适用于GB／T22101的本部分。2．1发病率rateofinfected发病棉苗占总棉苗数的百分率。2．2病情指数diseaseindex全面考核发病率和严重程度的综合指标。3病原菌的培养3．1培养病原菌的基本设备恒温箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、可控温的温室(使温度保持在20℃～28℃之间)、塑料盆、铝锅、电炉、培养皿、试管、剪子、镊子、广口瓶、酒精灯等。3．2鉴定所用枯萎病菌小种由于棉花枯萎病菌7号小种分布最广，为此宜选用7号小种，但各地亦可根据当地的优势小种，选择所用菌系。3．3枯萎病病原菌培养枯萎病病原菌(参见附录A)菌种培养物采用麦粒或麦粒砂培养(麦砂比为3：1)，先将麦粒用水浸泡12h以上，再用水煮涨为止，沥干水分后拌入细砂，装入广口瓶，湿热灭菌2h；在超净工作台上将已培养好的枯萎病菌平板或斜面接人其中，随后置于25℃温箱培养7d～10d。3．4鉴定用病土的接菌用筛过的无病土，经160℃干热灭菌。然后，将病菌麦粒或麦粒砂培养物按土重的2％～3％的比例加入到灭菌土中，混合均匀。用干净的报纸卷成直径6cnl、高8cm的有底纸钵，将已混均匀的带菌土装入钵中，至2／3高度，随后将其装入30cm×20cm×9cm的塑料盆中，待用。3．5鉴定材料种植方法鉴定材料种植于温室，采用纸钵土壤接菌盆栽法。3次重复，每重复一盆12钵，每个鉴定材料3盆，共36钵；播种前每盆先浇300mL自来水，使钵中的土吸足水分，随后将已催芽的待鉴定品种的种子先拌5％的多菌灵杀菌剂，再摆放于钵中，每钵6粒～8粒棉籽；然后用无菌土覆盖(高度与钵平齐)，再浇人200mL自来水。3．6标准对照鉴定中选用一个感病对照和一个抗病对照，抗病对照采用“86—1号”，感病对照可选用“冀棉11号”】 G]B／T22101．4—2009或“鄂荆1号”或本地区的常规感病品种。抗病对照选择标准为在常规接菌量下病情指数小于10的品种；感病对照选择标准为在常规接菌量下病情指数大于50的品种。4调查记载方法4．1棉苗的管理播种后将塑料盆置于温室中，进行育苗，温室温度保持在23℃～28℃之间，切勿超过30℃，进行精心管理。棉苗拱土前，只要钵中土壤不会太干，一般不要再浇水。棉苗出土后，注意保持盆中的干湿度，土壤湿度保持在60％～80％为宜，早晚注意温度变化，防止温度过高和过低。4．2发病调查在棉苗第一片真叶长出后，棉花枯萎病陆续开始发生，在播种后一个月左右开始调查各品种的枯萎病发生情况，调查鉴定结果记录到鉴定结果原始记录表，见附录B。采用5级分级法，可进行数次调查，当感病对照病情指数达50以上时，即可全面调查各品种的发病率，求出病情指数，进行校正后，评判各品种的抗病水平。4．3调查分级标准温室苗期棉花枯萎病的主要症状为青枯型和黄色网纹型，真叶和子叶发生萎蔫，叶片变软，下垂，叶缘开始凋枯，叶脉变黄，以致叶片枯萎，棉株死亡。各病级分级标准如下：0级：棉株健康，无病叶，生长正常。1级；棉株1片～2片子叶变黄萎蔫。2级：棉株2片子叶和1片真叶变黄萎蔫，叶脉呈黄色网纹状。3级：棉株2片子叶及2片或2片以上真叶变黄萎蔫，叶脉呈黄色网纹状或青桔状；棉株矮化或萎蔫。4级：棉株所有叶片发病，棉株枯死。4．4调查结果的统计根据调查的结果计算各品种的发病率和病情指数。发病率以“R，计，数值以“％”表示，按式(1)计算：尼一生×100nt式中：7"／i——发病株数；仇——总株数。计算结果精确到小数点后两位。病情指数以“DI”计，按式(2)计算：Dr一紫棚。式中：d。——相应病级}n。——各病级病株数；tit——总株数。计算结果精确到小数点后两位。5鉴定结果的校正由于鉴定的外界条件，包括地区间不可能完全一致，即使同一地区年度间、批次问鉴定结果也可能存在差异。为此，应对鉴定结果进行校正，即采用相对病情指数进行校正。方法为：鉴定中必须设感病2 GB／T22101．4—2009对照，在感病对照病情指数达50．0以上时进行发病调查，由于感病对照病情指数不可能刚好为50．0为此，采用校正系数K来进行校正，K值的求法按式(3)计算：K一鬻式中：50．00——感病对照标准病情指数；Dkx——本次鉴定感病对照病情指数。用K值与本次鉴定中被鉴定品种的病情指数相乘，求得被鉴定品种的相对病情指数(RDI)，RDI按式(4)计算：RDI—DI×K⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(4)式中：D卜一被鉴定品种病情指数；K——校正系数。以K值在0．75～1．25(相当于病情指数66．67～40．00)范围之间的鉴定结果为准确可靠。6鉴定结果的评价根据被鉴定品种的相对病情指数的大小评定品种的抗性级别，各级别评定标准如表1。表1棉花品种抗枯萎病性评定标准级别抗性类型英文缩写相对病情指数标准l免疫IRDI--02高抗HR020．0 B／T22101．4—2009A．1学名附录A(资料性附录)棉花枯萎病病原尖镰孢萎蔫专化型(FusariumoxysporumSchlectend：Fr．f．sp．vasinfectum(Atk．)W．C．Snyd．＆H-N．Hans．)属真菌界(Fungi)，半知菌亚门(Deuteromycotina)，丝孢纲(Hyphomycetes)，瘤座孢目(Tuberculariales)，瘤座孢科(Tuberculariaceae)，镰孢属(Fusarium)，美丽组(elegansWr．)，尖孢种(oxysporumSehl．)真菌。’A．2培养特性和孢子形态在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，菌丝为白色，培养时间稍长培养基经常出现紫色，茵丝体透明，有分隔。具有3种类型孢子，分别为大型分生孢子、小孢子和厚恒孢子。大型分生孢子着生在复杂而又有分枝的分生孢子梗或瘤状的孢子座上，通常具有3个～5个分隔，呈镰刀形至纺锤形，椭圆型弯曲基部有小柄，两端尖，顶端呈钩状，有的呈喙状弯曲，壁薄。其中以3个分隔的常见，大小为(2．6／zm～4．1pm)×(22．8pm～38．4pm)，黄褐色至橙色。通常有3种培养型，I型大型分生孢子为匀称镰刀形或纺锤形，顶细胞较长，足细胞明显或不明显，多为3个分隔，属典型的尖孢类型；lI型大型分生孢子较宽短或细长，多为3个分隔，有的可多达4个～5个分隔，有时可达8个分隔；Ⅲ大型分生孢子宽短，顶端呈钩状，有的呈喙状弯曲，孢子上端1／3处变宽，基部细胞逐渐变窄，足细胞有或不明显，孢子多为3个分隔，近于马特型。小型分生孢子多数为单胞，少数有1个分隔，通常为卵形，有时为椭圆形、倒卵形、肾形，甚至柱形，大小为(5pm～12pm)×(2．2pm～3．5pm)，通常着生于菌丝的侧面的分生孢子梗，聚集成假头状。厚恒孢子通常单生，有时双生，多数在老熟的菌丝体上顶端和间生形成，有时亦可生于大型分生孢子上，表面光滑，偶有粗糙，球形至卵圆形，浅黄至黄褐色。4 附录B(规范性附录)鉴定结果原始记录表表B．1棉花品种抗枯萎病性鉴定结果原始记录表GB／T22101．4—2009鉴定地点：鉴定结果调查时间：年月日。级1级2级3级4级相对品种名称总株数发病率／％病情指数病株数病情指数检测人：校核人：审核人：年月日年月日年月日5'