微生物限度验证观察记录

沉香化滞丸微生物限度方法学验证及报告1、供试品检品名称：沉香化滞丸规格：6g/袋×10袋/盒产品批号：130423013042401304210生产单位：河南爱民药业集团股份有限公司检验依据：《中国药典》2010年版一部2、微生物限度验证所用菌种大肠埃希菌〔CMCC(B)44102〕枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63501〕白色念球菌〔CMCC(F)98001〕金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕3、方法：《中国药典》2010年版一部微生物限度检查中薄膜过滤法验证（附录XⅢC）3.1菌液制备(1)取经37℃培养18~24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的营养肉汤培养物1ml+9ml0.9%盐水，10倍稀释至10-5~10-7，细菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。(2)经25℃培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9ml0.9%盐水10倍稀释至10-5~10-7，菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。 3.2结果见表1、表2表1细菌计数结果菌种大肠埃希菌（10-7）金黄色葡萄球菌（10-6）枯草芽孢杆菌（10-5）计数（CFU）727685917678均值（CFU）748877表2霉菌计数结果菌种白色念球菌（10-5）计数（CFU）6971均值（CFU）704、供试液的制备4.1取供试品10g，置研钵中研细，慢慢加入45℃PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，作为1：10的供试液，分别人工污染上述四种代表试验菌株。5、回收率测定：5.1试验组取1ml1：10供试液，分别加入含菌数为50～100cfu的试验菌1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。 5.2菌液组取含菌数为50～100cfu的试验菌各1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。5.3供试品对照组：取1ml1：10供试液，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：25℃培养120小时。5.4稀释剂对照组：取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，加入1ml含菌数为50～100cfu/ml的菌悬液，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌：26℃培养120小时验证试验结果见记录 微生物限度验证观察记录(1)品名沉香化滞丸批号1304230检验日期2013.04.21报告日期2013.04.24大肠埃希菌培养时间菌落计数试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组4月21日17时10分至4月22日17时10分平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2687183864473764月22日17时10分至4月23日17时10分70748888447577平均7288476回收率77%//86%金黄色葡萄球菌培养时间菌落计数试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组4月21日17时10分至4月22日17时10分平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2767987928672744月22日17时10分至4月23日17时10分81859094887678平均8392877回收率82%//84%白色念珠菌培养时间菌落计数试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组4月21日17时10分至4月22日17时10分平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2636578743469724月22日17时10分至4月23日17时10分646680764571724月23日17时10分至4月24日17时10分65678478557373平均6681573回收率75%//90%/枯草牙孢杆菌培养时间菌落计数试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组4月21日17时10分至4月22日17时10分平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2平皿1平皿2656772743.365684月22日17时10分至23日17时10分66687577444971平均6776470回收率83%//92%观察人：复核人 结论：实验表明，三批沉香化滞丸稀释剂对照组的菌数回收率和试验组的菌数回收率均高于70%，因此，平皿法可用于沉香化滞丸的微生物限度检查。4、控制菌检查的验证：4.1菌种金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕大肠埃希菌〔CMCC（B）44102〕4.2菌液制备同细菌、酵母菌计数方法的验证试验项下4.3供试液的制备称取样品10g，加0.9%盐水至100ml，用研钵研磨均匀，制成1：10供试液。4.4大肠埃希菌检查的方法学验证4.4.1试验组取1：10供试液10ml及10～100cfu大肠埃希菌菌悬液分别加入100mlBL增菌培养基中，依照大肠埃希菌检查法进行检查。4.4.2阴性菌对照组取1：10供试液10ml及10～100cfu金黄色葡萄球菌分别加入100mlBL增菌培养基中，依照大肠埃希菌检查法进行检查。4.4.3结果见下表试验组阴性菌对照（金黄色葡萄球菌）供试液菌液供试液菌液BLMUG 靛基质试液大肠埃希菌加菌量10mlcfu/ml金黄色葡萄球菌加入10mlcfu/ml结论：本品经按《中国药典》2010年版一部微生物限度检查法中控制菌检查验证方法验证，结果表明可用常规法检验大肠埃希菌。5大肠菌群检查的验证5.1菌种金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕大肠埃希菌〔CMCC（B）44102〕5.2菌液制备同细菌、酵母菌计数方法的验证试验项下5.3供试液的制备称取样品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用研钵研磨均匀，制成1：10供试液。取2ml1：10供试液过滤，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至20ml，混匀，制成1：100供试液。取2ml1：100供试液过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至20ml，混匀，制成1：1000供试液。5.4大肠菌群检查的方法学验证5.4.1试验组取1：10供试液10ml及10～100cfu大肠埃希菌分别加入100ml胆盐乳糖发酵培养基管中，依照大肠菌群检查法进行检查。5.4.2阴性对照组取1：10供试液10ml及10～100cfu金黄色葡萄球菌加入100ml胆盐乳糖发酵培养基管中，依照大肠菌群检查法进行检查。5.4.3结果见下表试验组阴性菌对照（金黄色葡萄球菌）供试液菌液供试液菌液 胆盐乳糖发酵培养基管曙红亚甲蓝琼脂培养基大肠埃希菌加菌量1mlcfu/ml金黄色葡萄球菌加入10mlcfu/ml结论：本品经按《中国药典》2010年版一部微生物限度检查法中控制菌检查验证方法验证，结果表明可用常规法检验大肠菌群。负责人：检验人：核对人：