微生物学---培养基的制作

微生物学---培养基的制作l牛肉汤培养基1.去掉筋膜及脂肪的新鲜牛肉,切成条、绞碎、按1000g牛肉加入DH2O2000ml浸泡,置冰箱过夜.2.次晨,将其煮沸半小时,并同时不断用不锈钢饭勺去掉脂肪及油汽（注意:不能用铁勺以免Fe2+掉入汤中影响细菌生长）,静置15分钟,肉汤分层,将上清液吸出,沉渣过滤.3.于上述肉汤中加入蛋白胨10g每1000ml,NaCl3g每1000Ml,再煮沸3分钟,用10mol/L的NaOH调节PH7.2～7.6（实际应用中应调到处7.7～8.0每12000ml加入10mol/L的NaOH调出浓度即大致为PH约为8即每400ml加入1mlNaOH）4.再按2g每1000ml加入K2HPO4（对肉汤的PH起缓冲作用）,煮沸150秒,静置30分钟吸取上清液,沉淀过滤用1mol/LNaOH滴到PH为8（以酚红作指示剂）再煮沸静置1～2小时,吸取上清液,以DH2O补至原有体积,再测PH8（因高压会使PH降低）分装、高压灭菌、置室温备用l肝化汤1.取猪胃数个,洗净绞碎称400g与绞碎的猪肝400gI混合,再加50摄氏度DH2O4000ml浓盐酸40ML置50～56度水箱中消化18～24小时2.加2NNa2CO3溶液约25ML或3NNa2CO315ml煮沸30分钟,静置过夜.3.吸上清液加热70摄氏度调PH7.2,补充DH2O至4000ML,再煮沸30分钟,静置30分钟以上.4.加入K2HPO48g煮沸15分钟,调节PH7.6再煮沸30分钟,静置数小时,吸上清液分装,高压灭菌.｛附注;国产的营养粉可代替牛肉汤和肝化汤作血培养基和巧克力培养基｝l肝化汤和血清肝汤1.肝化汤肝汤（PH7.6）:100ML牛肉汤（PH8）:100ML混合后,以200ML量分装三角烧瓶,高压灭菌,临用时倒入无菌试管2.血清肝汤〖问;是否可以不要肝汤？答;可以〗肝汤（PH7.6）:100ML牛肉汤（PH8）:100ML混匀灭菌后,加新鲜兔或羊血清20ML,混合备用同上l普通琼脂培养基（作用和成分类似于M-H水解酪蛋白培养基,常用于做药敏）※※※蛋白10gNaCl5gDH2O1000ml肉浸膏5g酵母膏5g1.溶解、煮沸15分钟,调PH7.4～7.6,过滤后补充体积,再测PH7.4～7.62.分装每瓶300ML,加琼脂5g或琼脂粉1.5～2g,高压15磅15分钟.3.室温保存,临用时加热溶化制板.（注意;在用普通琼脂做药敏时,应先用无菌NS调菌浓度,革兰氏阳性球菌G+c应调1个麦氏单位,因它生长速度没有G-b快,而G-b调0.5个麦氏单位） l血琼脂培养基及巧克力培养基※※※※肝化汤100ML牛肉汤100ML1.混合后调节PH至7.6,加琼脂5g,分装三角烧瓶、高压、备用.2.临用时加热溶化冷却至50摄氏度左右,加兔血20～30ML（8～10%或以上）混合制板,冰箱4度保存备用,有效期一周附注;巧克力培养基制作:即趁80度时加入兔血，按5～8%比例混匀,再到80摄氏度水浴中10～15分钟（同时不停轻摇）让V、X因子充分释放,最后加入用NS或DH2O适量稀释的万古霉素（每100ML加8mg）摇匀,冷却至50度左右制板（常用去甲万古霉素50～80mg/ml且在制板之前加）,以抑制G+c菌的生长,大多数G-b能生长,也可加杆菌肽（最好）300mg/ml.为使血琼脂保存的时间相对较长,适量多加点兔血,这样可保存一个月,但巧克力不能太多,因太多太浓时V、X因子不易释放出来.l沙氏培养基※※※蛋白胨10gDH2O1000ML调PH5.5,分装200ML/瓶,每瓶加4g琼脂,高压10磅15分钟,备用.临用前每瓶加入8g葡萄糖和氯霉素针一支（抑制细菌生长,只允许霉菌生长.在临倒之前直接加入）.制斜面.（？是否煮）l双糖（克氏双糖铁琼脂KIA）培养基※一、上层（产酸产气将变黄并有气泡）蛋白胨10gNaCl5gDH2O1000ml牛肉膏煮沸,冷却后,调PH7.6,补充DH2O至1000ML,加入0.6%酚红4ML,分装,每200ML加入4g琼脂.临用前加乳糖成1%浓度,煮沸（注;不能高压）二、下层（产酸产气将变黄并有气泡）蛋白胨10gNaCl5gNa2S2O30.5g枸櫞酸铁铵　　０．５ｇ混合煮沸，补充ＤＨ２Ｏ至１０００ＭＬ，调ＰＨ７．４～７．６，加入０．６％酚红溶液４ＭＬ，０．８ｇ／２００ｍｌ（？）琼脂粉分装，高压，临用时加入葡萄糖２００ｍｇ，煮沸备用l乙酰甲醇（Ｖ—Ｐ）试验培养基（葡胨水）〖甲基红M和Vp试验均应用葡胨水〗※蛋白胨5g葡萄糖5g磷酸氢二钾（对PH起缓冲作用）5gDH2O1000ml将以上成份混合加热溶解,调节PH7.2,分装小试管内,每管约2.5ml,再10磅20分钟灭菌l蛋白胨水〖用于靛基质试验的培养基〗※蛋白胨10gNaCl5gDH2O1000ml.混合煮沸10分钟,校正PH7.4,分装高压10磅15分钟,临用时倒入无菌管.l尿素培养基※蛋白胨1gNaCl5gKH2PO42gDH2O1000ml加热溶解---以1NNaOH调节PH至6.9---煮沸---补充DH2O至1000ml,再调节PH至6.9,分装200ML/瓶,加4g琼脂高压.临用前加热煮沸并加入:尿素4g0.6%酚红4ml葡萄糖0.2g煮沸冷却至50摄氏度左右制斜面. l伊红美兰琼脂培养基（EMB）※※※蛋白胨10gNaCl5g乳糖10g琼脂20g2%伊红水溶液10ml1%美兰水溶液5mlDH2O1000ml1.将蛋白胨、NaCl溶于DH2O中,水浴煮沸,调节PH7.2～7.4,DH2O补足至1000ml2.分装6g琼脂于300ml1.液中三角烧瓶内高压.临用前加3g乳糖、2%伊红3ml、1%美兰1.5ml,煮沸制板.附:它为鉴定性培养基,无色半透明菌落为可疑菌,有金属光泽的紫黑色菌落为非致病菌.lSS琼脂培养基※※※SS粉18.5gDH2O1000ml煮沸溶解---高压---制板附:它为强选择性培养基,抑制非致病菌如大肠杆菌和阳性球菌的生长.目的是选择志贺氏和沙门氏以及2号病菌等,以无色半透明和黑色菌落为可疑菌.（粉红色为利用乳糖的非致病菌）注意:伊红美兰麦康凯SS溶于DH2O后都必须在水浴中煮沸.l6.5%NaCl肉汤培养基NaCl6.5g1.6%溴甲酚紫0.05ml肉汤100ml葡萄糖0.5g～1.0g调节PH至7.0l七叶素苷培养基蛋白胨15g枸橼酸铁铵　２ｇ　　琼脂　１％　　ＤＨ２Ｏ１０００ｍｌ将上述成分煮沸溶化调ＰＨ至７．０，临用时加２００ｍｇ七叶素苷制成斜面．l高盐培养基牛肉浸液　１０００ｍｌ　　　蛋白胨　２０ｇ　　　ＮａＣｌ　４０～５０ｇ调节ＰＨ７．４～７．６分装于３００ｍｌ三角烧瓶内高压灭菌．l硝酸盐培养蛋白胨　１ｇ　　　　硝酸钾（无ＮＯ２）０．１ｇ　　　ＤＨ２Ｏ　１０００ｍｌ　将上述成分混合后溶解，矫正ＰＨ７．４～７．６，用滤纸过滤，分装试管１５磅高压灭菌１５分钟后备用．注意：１．　如无硝酸钾可用蛋白胨１０ｇ　　ＮａＣｌ　５ｇ　　硝酸钠０．２ｇ　　ＤＨ２Ｏ　１０００ｍｌ代替．２．用营养肉汤１０００ｍｌ＋硝酸钾１ｇ均可．　　l枸橼酸盐及醋酸钠培养基ＮａＣｌ　５ｇ　　　ＭｇＳＯ４　０．２ｇ　　（ＮＨ４）２Ｈ２Ｐ０４　１ｇ　　　　　　　　　　　ＫＨ２ＰＯ４　１ｇ　　　枸橼酸钠或醋酸钠　２．３ｇ　　　溶于１０００ｍｌＤＨ２Ｏ中，调节ＰＨ７．０加１％溴麝香草酚酒精溶液１０ｍｌ、琼脂４ｇ　分装１５磅高压２０分钟，制斜面 l丙二酸培养基酵母浸膏１ｇ　硫酸铵２ｇ　磷酸氢二钾　０．６ｇ　　　磷酸二氢钾　０．４ｇ　　　　　ＮａＣｌ　２ｇ　　丙二酸钠3g　　　　葡萄糖　　０．２５ｇ　　１％溴甲麝香草酚兰　２．５ｍｌ　　ＤＨ２Ｏ　　１０００ｍｌ将以上成份（除指示剂外）混合加热溶解，调节ＰＨ６．８７．０后再加入指示剂．分装小试管内，每管约３．５ｍｌ，１５磅高压灭菌１５分钟，同时做一份不加丙二酸钠的空白对照培养基．l苯丙氨酸培养基酵母膏　３ｇ　　磷酸氢二钠　１ｇ　　　ＤＬ－苯丙氨酸２ｇ（Ｌ－苯丙氨酸１ｇ）ＮａＣｌ　５ｇ　　琼脂　１２ｇ　　　　ＤＨ２Ｏ　１０００ｍｌ将以上成份混合加热溶解；调节ＰＨ至７．０，分装于小试管内，１５磅高压１５分钟取出制成斜面，４摄氏度备用．l代替牛肉汤培养基1.蛋白胨10g2.牛肉膏5g3.酵母膏5g4.NaCl3g5.K2HPO42g将以上1、2、3、4用DH2O溶解至1000ml，煮沸后，调节PH至7.6再加5.