微生物检验重点知识

微生物知识要点：一、葡萄球菌：1致病因素：血浆凝固酶；溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮剥脱毒素；TSST-1；耐热核酸酶；葡激酶；透明质酸酶；脂酶。2临床意义：疖痈等；内脏感染肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心内膜炎；全身感染败血症、脓毒血症；（毒素相关）食物中毒；烫伤样皮肤综合症；毒性休克综合症；假膜性肠炎。3鉴定：细菌和菌落形态；生化实验：触+微阳性；链+肠阴性葡：杆菌肽R，呋喃唑酮S金黄色葡萄球菌特征：普通平板-脂溶性黄色色素；血琼脂-β溶血；血浆凝固酶+；耐热核酸酶+甘露醇发酵+2）.如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌？并确定其有无致病性。答：①直接镜检，经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌，可初步报告疑为葡萄球菌，需进一步分离培养鉴定。②分离培养：血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定，若无细菌生长，需连续观察7天，并以血平板确定有无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板，37℃过夜，可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。③试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定，SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA检测有A蛋白的存在。二、链球菌：1致病因素：M蛋白；脂磷壁酸；透明质酸酶；链激酶；链道酶；链球菌溶血素；致热外毒素。2临床意义：A群：化脓性炎症；猩红热；风湿热；急性肾小球肾炎；IIIII肺炎链球菌：大叶性肺炎；中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎、心内膜炎。3鉴定：形态。。培养+血清等，血琼脂-灰白色，半透明或不透明表面光滑小菌落；肺炎链球菌48h呈脐窝状。几中链球菌特征：A群：血平板β溶血;杆菌肽-敏感B群：血平板β溶血;杆菌肽-耐药；CAMP+；胆汗七叶苷（—）；马尿酸水解试验（+）草绿色链球菌：血平板α溶血；optochin耐药；胆汗七叶苷（—）；肺炎链球菌：血平板α溶血；optochin敏感，菊糠分解（+），胆汗溶菌（+），荚膜肿胀实验（+） 一、大肠埃希菌1致病因素：侵袭力（K抗原和菌毛）；内毒素；肠毒素（LT，ST）2临床意义：肠道外感染（泌尿系统感染为主，腹膜炎，胆道感染，肺炎等；肠道感染：EHEC、ETEC、EPEC、EIEC、EaggEC3鉴定：普通平板（湿润、光滑、灰白中等大小菌落）有便毛，有动力，葡萄糖发酵（+），硝酸盐还原（+），氧化酶（—），触酶（+）中国兰平板（蓝色），伊红美蓝（紫黑色）,麦康凯和SS（红色）二、志贺菌属1致病因素：侵袭力（菌毛）；内毒素；外毒素（志贺毒素ST，也称Vero）2临床意义：1）急性细菌性痢疾：腹痛腹泻脓血粘液便，里急后重，发热，便中带血，粘液和WBC；中毒性菌痢多见于小儿，2）慢性细菌性痢疾；3）携带者3鉴定：葡萄糖发酵（+），硝酸盐还原（+），氧化酶（—），触酶（--）接种SS和麦康凯平板，分离出无色、透明的小菌落为可疑志贺菌。血清学鉴定。5.简述对疑似痢疾患者进行病原学诊断的常规及快速方法。答：常规鉴定：①初步鉴定②最后鉴别③鉴别试验④血清学鉴定⑤非典型菌株可用传代法及毒力试验进行鉴定。快速诊断：①直接凝集②免疫荧光菌球法③协同凝集试验④乳胶凝集试验⑤分子生物学方法三、沙门菌属1致病因素侵袭力（Vi抗原），内毒素，肠毒素。2临床意义胃肠炎（食物中毒）；菌血症和败血症；肠热症（伤寒副伤寒）3鉴定：接种SS和麦康凯平板，分离出无色、透明的小菌落为可疑沙门氏菌，需进一步生化反应鉴定，3）．如何根据O抗体和H抗体的变化特点判断肥达试验的结果？答：若O、H凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大，若两者均低，肠热症的可能性小，若O不高H高，可能预防接种或非特异性回忆反应，若O高H不高，则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。4）．对肠热症患者进行微生物学检查时标本采集应注意什么？答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第1、2周取外周血，第2、3周取粪便、尿液，全程可取骨髓分离培养细菌。四、铜绿假单胞菌其生物学特性主要有4℃不生长，而42℃生长。在血琼脂、麦康凯培养基上均可形成5种不同形态的菌落，在普通培养基上可产生多种色素。 鉴定：革兰阴性杆菌，葡萄糖氧化发酵（氧化型），动力阳性，氧化酶（+），触酶（+），专性需氧，营养要求不高，麦康凯上生物良好，初始分离培养基特征性菌落（扩展性，平坦，具有锯齿边缘，金属性光泽，产生蓝绿色色素，玉米面气味）42度长，4度不长。一、嗜血杆菌简述流感嗜血杆菌的生物学特点.答：革兰阴性短小球杆菌，无芽胞、无鞭毛、不能运动，多数菌有荚膜。需氧或兼性厌氧最适生长温度35℃，最佳培养基是巧克力琼脂。临床意义：脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎，鼻窦炎，中耳炎鉴定：培养特性，5-10%CO2，X因子，V因子；血琼脂：卫星现象；巧克力平板，露滴状菌落。八、霍乱弧菌霍乱患者为什么会出现剧烈腹泻及严重脱水的症状？答：霍乱弧菌可产生致泻性极强的霍乱肠毒素，该毒素由1个A亚单位和5个相同的B亚单位组成，B亚单位使毒素分子与真核细胞上的受体结合，A亚单位具有酶活性功能。A亚单位进入细胞后，激活腺苷环化酶，令胞内cAMP水平增高，导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔，同时钠的吸收减少，导致严重的腹泻和呕吐.九白喉棒状杆菌简述白喉棒状杆菌的致病过程。答：白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉头气管及鼻腔粘膜，有时皮肤、结膜等部位也可见到。传染源为患者及带菌者，细菌多随飞沫或污染的物品传播，感染后白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素，引起局部炎症和全身中毒症状。白喉杆菌在侵犯局部增殖，产生外毒素致病2．简述白喉杆菌体外毒力试验的原理、方法及结果判断。答：①琼脂平板毒力试验。将含有20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中，每只平皿10ml，50℃冷却，在凝固之前，将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉于琼脂内，制成平板(Elek平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画直线接种，划线宽度约6-7mm，两端与皿壁连接。同时，与之相距10mm处平行划线接种一标准产毒菌株，作为阳性对照。37℃培养24-48小时，若菌苔两侧出现斜向外延伸的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。②SPA协同凝集试验：将白喉抗毒素IgG先吸附在SPA上，再加入待检菌培养物上清液。若有白喉外毒素，则与SPA-IgG结合出现可见的凝集反应。③对流电泳：将已知的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中，电泳30min后，若两孔之间出现白色沉淀线，表明待检菌为产毒株。 鉴定：革兰染色阳性，有明显的异染颗粒的杆菌，无荚膜，无鞭毛，菌体长短不一，直或微弯，一端或两端膨大，排列呈V，L等文字形，。亚碲酸钾血培养出黑色菌落，有或无狭窄B溶血，菌落灰白色，隆起，湿润。九结核杆菌.致病机制：1荚膜。2脂质：包括索状因子，磷脂，硫酸脑苷脂，蜡质D。3蛋白质与蜡质D结合使机体产生超敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状。2.结核分枝杆菌细胞壁中脂质含量高，这一特点有何意义？答：结核分枝杆菌胞壁含脂质多，与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等特性有密切关系，脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性；细胞壁含大量脂质，可防止菌体内水分的丢失，故对干燥的抵抗力特别强；同时影响营养物质的吸收，故生长缓慢，且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质D、硫酸脑苷脂等毒性成分以不同机制致病。3．简述从标本中检验结核分枝杆菌的方法。答：1．显微镜检查(1)直接涂片染色镜检：是一种临床常用的简易快速的检查方法。直接涂片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀(3000r／min，20min)的尿沉淀物2—3接种环涂片，涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进行齐-尼抗酸染色，或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查，后法用荧光显微镜高倍镜检查。镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少100个视野。结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色，其它细菌和细胞为蓝色。经荧光染色的结核分枝杆菌，在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸性杆菌’’或“未找到抗酸性杆菌”，而不能报告“找到结核分枝杆菌”。(2)浓缩集菌涂片检查法：如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌，应采用浓缩集菌涂片检查法，以提高结核杆菌的检出率。所谓浓缩集菌涂片即为将采集标本离心，取沉淀涂片，或是采用漂浮集菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取3—4个接种环，涂抹面积大约直径在15mm即可，干燥固定后染色镜检。2．核酸检测用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染。设计结核分枝杆菌特异rRNA片段的引物进行扩增，然后用结核分枝杆菌rRNA序列特异的DNA探针与之杂交。PCR技术的特异性与敏感性均大于95％。3．抗PPDIgG的检测用ELlSA法检测患者血清中抗PPDIgG，可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一。肺结核病人的血清阳性率为80％—90％。4．简述抗酸染色的步骤及结果，并举出两种抗酸菌。答：①初染：石炭酸复红加温染5min②脱色：3%的盐酸酒精脱色1min③复染：美兰染1min结果：抗酸菌为红色，非抗酸菌为蓝色。结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌均为抗酸菌5．一患者怀疑患有肺结核，如何进行微生物学检查？（包括标本采集至报告结果的全过程，检查方法应有传统方法和快速检查方法。）答：1）标本采集：根据感染部位不同，采集不同的标本。2）标本直接检查：①显微镜检查②核酸检测③抗PPDIgG的检测。3）分离培养与鉴定4）药物敏感性试验5）免疫学诊断6）动物接种 梅毒螺旋体获得性梅毒（TP）:一期：硬下疳；二期：梅毒疹；三期皮肤黏膜溃疡，内脏器官肉芽肿。标本直接检测1、暗视野显微镜检查2、免疫荧光染色3、镀银染色法4、核酸检测。抗体检测1、性病研究实验室试验(VDRL)2、快速血浆反应素环状卡试验（RRR）3、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）2、荧光梅毒螺旋抗体吸收试验FTA-ABS；荧光梅毒螺旋抗体双染色试验FTA-ABS-DS;抗梅毒螺旋抗体的微量血凝检测MHA-TP;抗梅毒螺旋抗体明姣颗粒凝集试验TPPA;ELISA1.比较支原体与细菌L型的主要区别。（表格自制）【生物学性状与致病性--细菌L型--支原体】--{培养特性--需要高渗---需要胆固醇}{菌落--油煎蛋状，0.5-1mm---油煎蛋状，0.1-0.3mm}{形态--高度多形态性--高度多形态性}{大小--大小为0.6-1.0µm--大小为0.2-0.3µm}{细胞膜--不含固醇--含高浓度固醇}{细胞--缺乏或无--无}{细胞壁缺失的原因--青霉素、溶菌酶和胆汁等作用所致，去除条件可恢复--遗传}{通过滤器--能通过滤器--能通过滤器}{对青霉素的作用--抵抗--抵抗}{液体培养--有一定混浊度，可附壁---混浊度极低}{致病性--引起慢性感染，如骨髓炎、尿路感染和心内膜炎等--原发性非典型性肺炎，泌尿生殖道感染和条件致病}1.简述衣原体独特的发育周期。答：沙眼衣原体严格寄生在细胞内，有独特的发育周期，在其繁殖发育的周期内，可见两种形态，原体及始体。原体具有感染性，通过表面受体吸附于易感细胞并被细胞吞噬进体内。原体在吞噬体内体积增大进入增殖状态，形成始体。始体在吞噬体内以二分裂的形式进行分裂，繁殖出子代并成熟为原体，从易感细胞中释放出来，再感染新的易感细胞。2.沙眼的病原体及其传播方式。答：沙眼的病原体是沙眼衣原体，传播方式主要通过眼-眼或眼-手-眼传播3.衣原体有哪些重要特点？答：①形态多为球型，革兰染色阴性原体小，介于细菌和病毒之间，始体大，大小与细菌相似。②代谢，缺乏能量来源，故严格的细胞内寄生③有独特的发育周期④有DNA和RNA两种核酸⑤由肽聚糖组成的细胞壁，对多种抗生素敏感。4.衣原体引起哪些重要疾病？答：能引起人类的沙眼、泌尿生殖道的感染和呼吸系统等疾病 2.简述白色念珠菌感染的微生物检查方法及结果分析。答：①直接镜检可见革兰阳性、圆形或卵圆形芽生孢子及假菌丝②分离培养在沙氏培养基上形成乳白色或淡黄色类酵母菌落，镜检可见假菌丝及成群的卵圆形芽生孢子③血清学实验可检测多种假丝酵母菌的抗体，应用ELISA或胶乳凝集实验可检出白假丝酵母菌细胞壁甘露聚糖。④动物实验将白假丝酵母菌悬液1ml经尾静脉或腹腔注入小鼠或耳静脉注入兔体内，5-7天后动物死亡，解剖发现肾、肝等有脓肿。白色念珠菌检验：1标本直接检查直接显微镜检查；G试验，也称螯试验，也测定1-3-B-D-葡聚糖；抗原检测，ELISA免疫印迹；核酸检测；2培养鉴定接种沙氏培养基，25或37度培养1-4天，可见奶油色类酵母样菌落，镜检可见假菌丝和芽生孢子。鉴定试验：1芽管形成试验2厚膜孢子形成试验3糖同化或发酵试验。白色念珠菌鉴定的依据有哪些答：①直接镜检观察到圆形或卵圆形的芽生孢子、假菌丝，假菌丝中隔部伴有芽生孢子，顶端有厚壁的厚膜孢子，革兰染色阳性，着色不均匀。②玉米琼脂室温及35℃均生长并形成顶端厚膜孢子，42℃也能生长。③芽管形成试验阳性。④葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖发酵试验阳性，蔗糖、乳糖发酵试验阴性。⑤葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖同化试验阳性，乳糖同化试验阴性。⑥三氮唑氯试验，培养基不变色或淡红色。桥。新生隐球菌主要侵犯部位为肺、脑、脑膜，也可侵犯皮肤，骨，关节致病物质为荚膜；标本直接检测：1显微镜检查2抗原检测3抗体检测4核酸检测1.简述流行性感冒病毒的形态结构及其主要结构成分的功能。流感病毒呈球形或丝状⑴流感病毒的内部结构核衣壳：病毒分片段的RNA，结合有核蛋白NP以及与复制和转录有关的三种依赖RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋对称。基质蛋白（M蛋白）：覆盖在核衣壳外面，M蛋白抗原性稳定，也具有型特异性。外膜：来自宿主细胞的脂质双层膜。⑵流感病毒的辅助结构血凝素(HA)：HA（病毒吸附））保护性抗原，血凝抑制抗体(保护性抗体) 神经氨酸酶（NA）（核衣壳释放）与病毒释放有关。2.简述分离与鉴定流感病毒常用的实验室检验方法有哪些。.主要包括病毒分离培养、血清学诊断和快速诊断方法3.甲型流感病毒为何容易引起大流行？流感病毒RNA分节段，甲型和乙型由8个节段，丙型由7个节段构成。甲型流感病毒根据其表面HA和NA抗原性的不同，可分为若干亚型。4.简述流感病毒的抗原变异。抗原漂移（antigenicdrift）因HA或NA的点突变造成，变异幅度小，属量变，引起局部中、小型流行。抗原转换（antigenicshift）因HA或NA的大幅度变异造成，属质变，导致新亚型的出现，引起世界性的暴发流行。轮状病毒临床意义：4-24月婴幼儿呈急性胃肠炎感染，24-72小时潜伏，80%患儿先发热，呕吐和腹痛，随即频繁腹泻，第天10-20次，淡黄色水样便或蛋花汤样酸性便呀白色米汤样便，无粘液和脓血，恶臭。简述轮状病毒的微生物检验方法⑴标本采集与处理⑵标本直接检查①电镜和免疫电镜检查②抗原检测③病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳分析④核酸检测⑶病毒分离培养2.简述乙型肝炎病毒的形态结构。球形,双层衣壳。外衣壳=包膜(脂质双层+蛋白质)HBsAg等内衣壳：HBcAg、HBeAg内部：DNA---环状双链、DNA多聚酶3.简述乙型肝炎病毒的基因组及其功能。不完全双链环状DNA，含4个ORF,编码7个蛋白S：HBsAg,Pre-s1,Pre-s2C：HBcAg，HBeAgP：polymerase多聚酶X：HBxAg基因4.简述乙型肝炎病毒的抗原组成及其意义。HBV抗原组成⑴、HBsAg表面抗原：是机体受HBV感染的主要标志之一。具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体，即抗HBs。⑵、HBcAg核心抗原：HBcAg主要定位于感染细胞核内，不易从患者血清中检出。但HBcAg也可在肝细胞膜表面表达，宿主CTL作用的主要靶抗原。HBcAg抗原很强，能刺激机体产生抗HBc，但无中和作用。检出高效价抗HBc，特别是抗HBcIgM则表示HBV在肝内处于复制状态。⑶、HBeAg核心抗原：HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志。急性乙型肝炎进入恢复期时HBeAg消失，抗HBe阳性；但抗Hbe亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中。抗HBe说明病毒感染性较低（是预后良好的征象）简述乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测的用途⑴乙型肝炎的诊断⑵判断传染型⑶判断预后⑷筛选献血员⑸检测乙肝疫苗接种效果⑹流行病学调查3．巨细胞病毒感染的病原学直接检查方法有哪些？⑴检测病毒颗粒⑵检测病毒包涵体⑶检测病毒抗原⑷检测病毒核酸4．疑似人巨细胞病毒先天性感染的诊断依据是什么？在出生最初3周内从新生儿尿液、呼吸道分泌物或者其他体液分离出HCMV是先天性感染最敏感和特异的诊断依据。 HIV的形态结构形态：球形病毒，80-120nm结构1、核衣与核心——呈圆锥状、两条相同的正链RNA、有衣壳蛋白和核衣壳蛋白、有逆转录酶，蛋白酶和整合酶2、包膜：1、脂质双层2、糖蛋白刺突（gP120gP41）2.简述HIV的复制过程。⑴逆向转录为DNA，形成DNA复制中间体，⑵形成前病毒DNA⑶转录为病毒RNA⑷有的拼接成mRNA，有的形成RNA基因组，⑸组装，释放3.简述AIDS的临床表现。AIDS的临床表现分为四个时期：急性感染期、无症状感染期、艾滋病相关综合症、艾滋病4.HIV感染的常用临床检测方法有哪些？⑴标本直接检查①抗原检查②核酸检查⑵抗体检测①初筛试验②确证试验⑶CD4T细胞计数4.人乳头瘤病毒诊断方法有哪些？⑴核酸分析⑵原位杂交⑶DNA印迹⑷聚合酶链式反应内毒素和外毒素的特点有何不同？答：区别要点外毒素内毒素1.来源革兰阳性菌和部分革兰阴性菌革兰阴性菌2存在部位由细菌合成并分泌到菌体外，细胞壁成分，菌体裂解后释出少数菌裂解后释出3化学成分蛋白质脂多糖4.稳定性不稳定，不耐热稳定，耐热5.毒性作用：外毒素极强，对组织器官有选择性的毒害作用，引起特殊临床表现。内毒素较弱，各菌的毒性作用大致相同。6.抗原性：外毒素强，刺激机体产生抗毒素，中和游离外毒素的毒性作用，0.4﹪甲醛处理，可脱毒成失去毒性而保持抗原性的类毒素。内毒素弱，刺激机体产生的抗菌抗体无明显中和作用，甲醛处理不形成类毒素